Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Определение стерильности лекарственного средства
РАЗДЕЛ: « ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ» Тема: Инфекция. Экспериментальная инфекция. Цель: Усвоить основные понятия об инфекционном процессе; овладеть навыками заражения и вскрытия лабораторных животных Вопросы для самоподготовки
Литература
Экспериментальная инфекция Инфекционный процесс может быть воспроизведен искусственно, путем заражения лабораторных животных. Экспериментальное заражение лабораторных животных производится с целью:
В качестве лабораторных животных наиболее широко используют белых мышей, морских свинок, кроликов, белых крыс. Специальные исследования проводят на обезьянах, кошках, собаках, крупном и мелком рогатом скоте, лошадях, некоторых видах диких животных (хомяки, суслики, хорьки, полевки), птицах, а также куриных эмбрионах. Выбор и подготовка к заражению лабораторных животных Выбор метода введения инфекционного материала лабораторным животным зависит от вида возбудителя, используемого в опыте (или при диагностике) и от предполагаемого тропизма (преимущественных мест поражения). Перед началом эксперимента животных помечают металлическими ярлычками или краской, взвешивают, иногда термометрируют. Перед накожным или внутрикожным способом заражения шерсть на месте введения материала удаляют выщипыванием, выбриванием или с помощью депилятора. При работе с животными их фиксируют руками или применяют специальные приспособления (станки, столики). Для заражения животных используют стерильные инструменты. Методы заражения лабораторных животных Подкожное заражение. Материал вводят в складку кожи, которую захватывают пальцами на спине, у корня хвоста (мышь), на животе (морские свинки, кролики). Прокалывают складку иглой, вводят иглу примерно наполовину, медленно впрыскивают материал. После этого отпускают складку кожи, накладывают на иглу кусочек ваты и быстро вынимают иглу. Во избежание выхода инъецированной жидкости иглу вынимают под углом 45º. Место введения обрабатывают спиртом. Накожное заражение. На участок кожи, лишенный шерсти и продезинфицированный наносят царапину с помощью иглы или скарификатора. На царапину капают каплю заразного материала и втирают его в кожу шпателем или стеклянной палочкой. Внутрикожное заражение. Накануне введения шерсть на боку или спине животного (кролики, морские свинки) подстригают, а затем выбривают. Тонкую иглу вводят острым углом в приподнятую складку кожи под эпидермис. Жидкость вводят в объеме 0,1-0,2 мл, при этом используют туберкулиновый шприц. В результате на месте введения поверхностный слой эпидермиса приподнимается в виде бугорка. Внутримышечное заражение. Материал вводят длинной иглой глубоко в мышцу бедра, а у птиц – в мышцу груди. Внутривенное заражение. Для этого способа заражения у кроликов используют краевую вену уха, у морских свинок – ушную и яремную, у кошек и собак – яремную и бедренную, у мышей и крыс – хвостовую вену, причем перед впрыскиванием хвост животных погружают в теплую воду, чтобы вызвать гиперемию. Место введения дезинфицируют, тщательно протирают ксилолом для набухания вены. Материал вводят тонкой иглой по направлению тока крови. Внутрибрюшинное (интраперитонеальное) заражение. Животное держат вниз головой, чтобы внутренности брюшной полости опустились к диафрагме. При этом образуется свободное место для иглы. Укол делают в нижней трети живота, но не слишком низко. Это уменьшает опасность повреждения отдельных участков кишечника, мочевого пузыря и половых органов. Место инъекции дезинфицируют, берут складку кожи как при подкожном заражении, вводят в нее иглу, поворачивают под прямым углом и быстрым толчком прокалывают брюшную стенку. При таком способе заражения можно ввести большое количество заразного материала. Заражение через пищеварительный тракт (пероральное). Наиболее простым способом является смешивание исследуемого материала или микробной взвеси с кормом, однако при этом нельзя учесть дозу инфекта. Более точные результаты получают при закапывании материала пипеткой через рот. При этом животное фиксируют в вертикальном положении, надавливанием пальцами на щеки или пинцетом открывают рот и медленно капают, давая проглотить каждую каплю. Для данного метода заражения используют также тонкий зонд, который вводят через нос. На наружный конец зонда надевают шприц. Это также позволяет дозировать вводимый материал. Мелких животных заражают при помощи шприца, на который надевают иглу с утолщением на конце в виде оливы. Заражение через нос (интраназальное). Производят закапывание материала в нос пипеткой или иглой, надетой на шприц. Лучше такое заражение осуществлять под легким наркозом. Внутричерепное (интрацеребральное) заражение. Мышей и крыс заражают как под наркозом так и без него. Заразный материал вводят на расстоянии 1-2 мм от точки пересечения средней линии черепа с линией, соединяющей наружные углы глаз. Место укола дезинфицируют. Для заражения используют туберкулиновый шприц с тонкой иглой. Кроликов и морских свинок заражают путем прокола тонкой кости в области надглазничной борозды. Испытуемый материал необходимо вводить медленно, чтобы не вызвать резкого повышения внутричерепного давления и предупредить обратный выход вводимого материала. У крупных животных производят трепанацию черепа. Заражение через глаз (интроокулярное) можно проводить различными способами. Заражение через конъюктиву кролику или морской свинке проводят в задний угол глаза, капая одну каплю материала из пипетки. При субконъюктивальном заражении тонкой иглой вводят 0,2-0,5 мл материала под конъюктиву. Образуется небольшой пузырек, который быстро рассасывается. Заражение через прямую кишку (перректальное). Заражение производят путем введения заразного материала, суспендированного в физиологическом растворе, имеющем температуру тела, при помощи клизмы. Вскрытие зараженных лабораторных животных Вскрытие погибших животных проводится с целью извлечения пораженных органов, обнаружения возбудителя, вызвавшего гибель животного, выделения чистой культуры возбудителя и определения места его локализации. Вскрывать животных по возможности следует сразу же после их гибели, чтобы посторонняя микрофлора не исказила результаты опыта. Применяют только стерильные инструменты: скальпели, ножницы, пинцеты. Трупы мелких лабораторных животных кладут на спину, растягивают в стороны лапы, прикалывают их к доске или кювете с парафином. Можно использовать специальные столики, снабженные соответствующими фиксирующими приспособлениями. Производят осмотр наружных покровов, отмечая наличие язв, выпадение шерсти, изменения цвета кожи и др. Перед вскрытием труп животного смачивают дезинфицирующим раствором или спиртом. Инструменты переносят из стерилизатора в банку со спиртом, а перед употреблением их обжигают в пламени горелки. Вскрытие и исследование наружных покровов. Делают разрез кожи по средней линии от нижней челюсти до лобка. Кожу отсепаровывают и делают надрезы в стороны конечностей. Кожные лоскуты отворачивают в стороны. Осматривают подкожную клетчатку, отмечают состояние сосудов, отек, кровоизлияния, а также лимфатические узлы. Из последних делают мазки-отпечатки и посевы. Использованные инструменты погружают в дезинфицирующий раствор. Вскрытие грудной полости. Всю область, освобожденную от кожи смачивают спиртом и поджигают. Захватив пинцетом мечевидный отросток, делают под ним поперечный надрез, вводят в него ножницы и перерезают ребра в места их соединения с хрящами. Полученный лоскут в виде треугольника откидывают вверх. Осматривают органы грудной полости. При наличии в ней экссудата делают посевы и мазки. Производят посев крови и делают мазки-отпечатки из тканей легких и плевры. Кровь берут из сердца пастеровской пипеткой из правого желудочка или правого предсердия, место взятия предварительно прижигают раскаленным скальпелем или пинцетом. Вскрытие брюшной полости производят осторожно, чтобы не поранить кишечник. Для этого захватывают пинцетом брюшную стенку, разрезают её ножницами от диафрагмы до лобка и делают два поперечных разреза по направлению к конечностям. Образовавшиеся мышечные лоскуты отворачивают в сторону. Кишечник оттягивают пинцетом влево до тех пор, пока не обнажатся печень, почки и селезенка, на которые обращают особое внимание, отмечая цвет, величину, консистенцию. Затем делают посевы из тканей селезенки, печени, брыжеечных лимфатических узлов, экссудата. Материал для посева из органов берут следующим образом: поверхность органа прижигают раскаленным скальпелем и в этом месте делают разрез, с поверхности которого петлей соскабливают ткань и сеют в питательные среды. Для приготовления мазка вырезают кусочек ткани, берут его пинцетом и несколько раз прикасаются поверхностью разреза к предметному стеклу (мазки-отпечатки) или размазывают по нему тонким слоем. Фиксируют мазки на пламени или смесью Никифирова (спирт и эфир поровну) в течение 10-15 минут или метиловым спиртом 3-5 минут. Окрашивают мазки фуксином или синькой и по Граму. После вскрытия труп животного стерилизуют, все инструменты, доску и кювету дезинфицируют или также стерилизуют. Задания к лабораторному занятию
Тема: Иммунитет. Неспецифические и специфические факторы защиты организма. Основы клинической иммунологии. Цель: знать особенности иммунологической реактивности в норме и патологии; изучить методы оценки и освоить методы иммунодиагностики. Вопросы для самоподготовки
Литература
Основы иммунодиагностики Клиническая иммунология представляет собой раздел медицины, изучающий патологию человека в контексте нарушения функций иммунной системы. С этих позиций рассматриваются этиология и патогенез заболеваний, а также методы диагностики и лечения. Кроме того, к аспектам данной дисциплины, несомненно, относятся и нарушения взаимодействий иммунной, нервной и эндокринной систем, причем в эти рамки укладывается патогенез большинства патологических состояний человека. Основными задачами клинической иммунологии являются:
Для постановки диагноза иммунопатологического состояния используют следующие приемы:
| ||||||||||||