Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Окраска метиленовым синимТехника. Чистое предметное стекло смачивают кипящим насыщенным водным раствором метиленового синего. Когда краска на стекле высохнет, его протирают сухой тряпочкой до нежно-голубой окраски. На подготовленное таким образом стекло наносят каплю исследуемой культуры, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Микроскопическая картина. Микробы постепенно окрашиваются в бледно-голубоватый цвет. Окраска нейтральным краснымПриготовление красителя: насыщенный на холоду водный раствор нейтральрота разводят физиологическим раствором хлористого натрия 1:100. Техника. Каплю исследуемого материала смешивают на предметном стекле с каплей разведенного нейтральрота. Препарат покрывают покровным стеклом и микроскопируют с иммерсией. Микроскопическая картина. Микробы постепенно окрашиваются в розоватый цвет. Негативный способ окраски живых бактерийДля окраски используют тушь, негрозин, конго красный. Тушь чертежную разводят дистиллированной водой в соотношении 1:10. Конго красный используют в виде 3% водного раствора. Метод БурриТехника. Каплю исследуемой культуры смешивают на предметном стекле с каплей туши, затем с помощью другого стекла, поставленного к первому под углом в 45, делают тонкий мазок по принципу приготовления мазков из крови. Мазок высушивают на воздухе и микроскопируют нефиксированным. При использовании раствора конго рот после высушивания мазок обрабатывают 1% раствором соляной кислоты в абсолютном алкоголе, затем высушивают и микроскопируют. Микроскопическая картина: на окрашенном фоне ясно видны неокрашенные светлые микробные клетки. ОКРАСКА ФИКСИРОВАННЫХ ПРЕПАРАТОВ МИКРООРГАНИЗМОВВ микробиологической работе наиболее употребительны способы окраски фиксированных микроскопических препаратов, которые в основном можно разделить на две группы: ориентировочные, или простые, и дифференциальные, выявляющие химические и структурные особенности того или иного вида микроорганизма. Простые методы окраски микробов Простые методы окраски препаратов предполагают использование одного анилинового красителя и позволяют изучить такие морфологические признаки микроорганизма, как форму, размеры, расположение в мазке. Для этих целей используется ряд красителей: метиленовый синий, фуксин и др. Окраска спиртово-водным раствором метиленового синегоПриготовление раствора: красителя 1 г, 95% спирта 10 мл, дистиллированной воды 100 мл. Техника. Нанести на фиксированный мазок на 3-5 минут. Микроскопическая картина. Все клетки окрашиваются в синий цвет. Окраска водным раствором метиленового синегоПриготовление раствора: красителя 1 г, дистиллированной воды 1000 мл. Техника. Нанести на фиксированный мазок на 5-10 минут. Микроскопическая картина. Окраска дает нежные отчетливые препараты клеток, окрашенных в синий цвет. Окраска щелочным метиленовым синим (синим Леффлера)Приготовление щелочного раствора метиленового синего: дистиллированной воды 100 мл, 10% раствора едкого калия 2 капли, насыщенного (7%) раствора метиленового синего 30 мл или 2) метиленового синего 3 г, 95% спирта 20 мл, 1 % раствора едкого калия 1 мл, дистиллированной воды 100 мл. Это стойкий и хорошо красящий раствор. Техника. Нанести на фиксированный мазок на 3-10 минут. Микроскопическая картина. Дает окраску в синий цвет различной интенсивности для разных видов микроорганизмов и тканевых элементов (рис.13). Окраска разведенным карболовым фуксиномТехника. На зафиксированный мазок наносят фуксин Циля, разведенный непосредственно перед окраской, дистиллированной водой в соотношении 1:10. Выдерживают 1-2 минуты, после чего смывают водопроводной водой, высушивают и микроскопируют. Микроскопическая картина. Все клетки равномерно окрашиваются в розово-красный цвет. Приготовление и окраска препаратов для люминесцентной микроскопии Препараты для люминесцентной микроскопии готовят так же, как для световой. Это относится и к их фиксации. Окраска препаратов отличается тем, что для люминесцентной микроскопии применяют специальные красители – флуорохромы. Их отличительная особенность – способность светиться под воздействием ультрафиолетовых и сине-фиолетовых лучей. Среди флуорохромов встречаются самые разнообразные органические вещества. Для окраски микроскопических препаратов применяют очень слабо концентрированные (1:500-1:100000) растворы флуорохромов. Растворы готовят на дистиллированной воде, изотоническом растворе хлорида натрия или буферных смесях и хранят в темной склянке, избегая действия света. Сложные или дифференциальные методы окраски микробов |