Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Окраска акридиновым оранжевымТехника. Мазки, фиксированные 3-5 мин метиловым спиртом, погружают в раствор (1:10000) красителя, к 10 мл которого добавлено 3-5 капель 10% раствора аммиака. Через 24 ч препарат обесцвечивают 3% солянокислым спиртом (дважды по 10 с), промывают и высушивают. Микроскопическая картина. Туберкулезные микобактерии флуоресцируют желто-оранжевым цветом. Флуорохромирование акридиновым желтымТехника. Мазок на 30 с помещают в водный раствор (1:5000) флуорохрома, затем промывают. Дифференцируют солянокислым спиртом 15 с, вновь промывают и высушивают. Микроскопическая картина. Туберкулезные микобактерии флуоресцируют желтым цветом. Окраска спорБактериальные споры, отличающиеся от вегетативных клеток многослойной липидосодержащей оболочкой, пропитанной депиколатом кальция, не поддаются окраске простыми методами и по Граму. Для окраски спор разработаны специальные методы, направленные на увеличение их проницаемости с использованием растворов кислот, концентрированных красителей и подогрева. Способ ПешковаТехника. На мазок, фиксированный жаром (над пламенем!), наливают синий Леффлера и подогревают стекло до закипания краски. Дают 15-20 с покипеть, а затем (после того как стекло остынет!) промывают водой и докрашивают препарат 30 с 0,5% водным раствором нейтрального красного. Вновь промывают, сушат и микроскопируют. Микроскопическая картина. Споры окрашиваются в голубой цвет, клетки – в розовый. Способ ГанзенаТехника. Препарат, приготовленный обычным способом, при нагревании окрашивают 1-2 мин карболовым фуксином Циля, промывают водой и обесцвечивают, погружая стекло в 2% раствор азотной кислоты в спирте или в 1 % водный раствор серной кислоты. Обесцвечивать надо так, чтобы на препарате не было видно следов красителя. Затем промывают водой и докрашивают водным раствором метиленового синего. Микроскопическая картина. Споры окрашиваются в красный цвет. Метод ОжешкиТехника. На нефиксированный мазок наливают 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогревают 1-2 мин. С препарата сливают кислоту, промывают его водой и после высыхания фиксируют на пламени. Фиксированный препарат красят по способу Циля-Нильсена. Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в синий цвет, споры – в красный (рис.16). Метод Виртца в модификации СаватееваПриготовление растворов. К насыщенному водному раствору (около 5%) малахитового зеленого добавляют 5% глицерина, пропитывают смесью полоски фильтровальной бумаги и высушивают их (лучше при 50С). Затем готовят 0,5% водный раствор сафранина, которым смачивают другие полоски фильтровальной бумаги и высушивают. Техника. На фиксированный над пламенем мазок наносят 2-3 капли дистиллированной воды и накладывают полоску фильтровальной бумаги, окрашенной малахитовым зеленым. Препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров (3-4 раза), приблизительно в течение минуты. При испарении воды ее добавляют. После остывания препарата краску с бумажкой смывают струей воды (полминуты) и сейчас же на мокрую поверхность препараты кладут бумажку, окрашенную сафранином. Через 30-40 секунд мазок промывают водой, высушивают и микроскопируют. Микроскопическая картина. Свободно лежащие споры – зеленовато-голубого цвета, споры внутри микробных клеток – темно-зеленые, вегетативные формы микробов – красные. Модификация Шеффлера и ФултонаТехника. На препарат, фиксированный жаром, наносят на 30-60 секунд 5% водный раствор малахитового зеленого и нагревают до появления паров 3-4 раза. Мазок промывают и докрашивают 0,5% водным раствором сафранина в течение 30 секунд. Промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу. Микроскопическая картина. Споры зеленые, а вегетативные клетки красные. Окраска по БиттеруТехника. Нефиксированный мазок, обработанный 10% раствором формалина (10 мин), промытый водой и высушенный, красят аммиачным метиленовым синим (20 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего, 3 мл крепкого раствора NH40H и 80 мл дистиллированной воды) 3 минуты, нагревая стекло до закипания жидкости. После промывания водой и высушивания докрашивают мазок везувином или сафранином 3-5 мин. Вновь промывают, высушивают и микроскопируют. Микроскопическая картина. В мазке бактерийные тела красные или буро-желтые (в зависимости от краски, примененной для докрашивания), споры синие. Окраска капсул Окраска капсул микробов может иногда иметь диагностическое значение. Бактериальные капсулы представляют собой слизистый слой, состоящий из разбухших в воде в виде геля полисахаридов или полипептидов. В мазках из органов или из тканей капсулы можно обнаружить при помощи простой окраски щелочным или другими растворами метиленового синего. Однако специальные окраски дают более четкие препараты. Для их выявления в мазке можно использовать негативные методы окраски, при которых окрашивают фон препарата и клетки, окруженные бесцветными капсулами. |