Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Метод ЛеффлераТехника. За 1-2 суток до употребления готовят протраву, состоящую из 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 10 мл 20% водного раствора танина, 5,5 мл насыщенного на холоду водного раствора сульфата закисного аммиачного железа (соль Мора). Перед употреблением фильтруют. Препарат, приготовленный на покровном стекле, фиксируют и помещают на часовое стекло. Наливают протраву и 30-50 с подогревают до отхождения паров. Дав стеклу остыть, его промывают водой и, поместив на другое часовое стекло, красят фуксином Циля 2-3 мин при слабом подогревании. После тщательной промывки и высушивания препарат готов для микроскопирования. Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в розово-красный цвет (рис.18). Серебрение по МорозовуГотовят 3 реактива: 1)1 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл имеющегося в продаже формалина, 100 мл дистиллированной воды; 2)5 г танина, 1 мл жидкой карболовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды; 3)5 г кристаллического нитрата серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды, отливают 20 мл в другой сосуд, к оставшимся 80 мл раствора по каплям добавляют раствор аммиака, пока не растворится образующийся осадок и не останется легкая опалесценция; если аммиака будет добавлено слишком много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл раствора серебра надо добавлять по каплям до получения нужной слабой опалесценции. Для окраски препарата раствор серебра разводят дистиллированной водой 1:10. Техника. Наливают на 1 мин первый реактив, сливают, промывают препарат водой, наливают второй реактив, подогревают на легком пламени до отхождения паров (1 мин), тщательно промывают водой, 1-2 мин при подогревании обрабатывают препарат третьим реактивом до появления темно-коричневой окраски мазка, тщательно промывают водой, высушивают. Рассматривают с иммерсионной системой. Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в буро-черный цвет. Метод ГреяРастворы, составляющие протраву, смешивают за сутки до употребления. Растворы состоят из: 1) насыщенного водного раствора калийных квасцов K2SO412Н2О – 5 мл, 20% водного раствора танина – 2 мл и насыщенного водного раствора двухлористой ртути – 2 мл; 2) насыщенного спиртового раствора основного фуксина – 0,4 мл. Техника. Протраву наливают на препарат на 8-10 мин, затем промывают его дистиллированной водой и окрашивают 5 мин карболовым фуксином Циля. Вновь промывают водой, сушат на воздухе и микроскопируют. Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в красный цвет. Окраска по ШенкуПротраву, состоящую из двух растворов, готовят за 7-10 дней до употребления. Первый раствор состоит из 30 мл насыщенного водного раствора танина и 10 мл 5% водного раствора полуторахлористого железа, второй – из 1 мл анилина и 4 мл 95% спирта. Техника. На препарат наносят 8 капель первого и 1 каплю второго раствора. После того как избыток протравы сливают, на препарат наносят краску (без промывания). Красить можно 1% сафранином в 50% спирте или метиленовым синим Леффлера. Хорошие результаты можно получить, применив для окраски смесь 30 мл метиленового синего Леффлера и 8 мл второго раствора протравы. Микроскопическая картина. Жгутики приобретают синий цвет. Метод ПетрукаТехника. Метод Петрука – модификация метода Грея. Вместо карболового фуксина применяют нитрат серебра, раствор которого готовят следующим образом: 1 г АgNОз растворяют в 2 мл дистиллированной воды, к нему по каплям добавляют 5% раствор аммиака до растворения образовавшегося осадка и появления легкой опалесценции. Этот исходный раствор разбавляют в 10 раз дистиллированной водой и применяют для окраски. Препарат с нанесенным на него раствором нитрата серебра слегка подогревают над пламенем. Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в желто-коричневый цвет. Окраска включений в бактериях Окраска метахроматических зерен (волютина) Волютин является запасным полифосфатом у некоторых видов бактерий, Его наличие и расположение в клетке может иметь диагностический характер, например, у коринебактерий дифтерии (тельца Бабеша-Эрнста). Метод НейссераСпособ 1. Приготовление краски Нейссера: а) метиленового синего 0,1 г, 95% спирта 2 мл, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл; б) раствор хризоидина, или везувина, или бисмаркабраун красителя 1 г, дистиллированной воды 300 мл. Краситель растворяют в кипящей воде и фильтруют через бумагу. Техника. Препараты выдерживают по 1 минуте в растворе метиленового синего и в растворе Люголя. Промывают водой. Докрашивают раствором хризоидина (или везувина, или бисмаркбраун) 1-3 мин. Промывают водой. Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в светло-желтый цвет, зерна Бабеша-Эрнста – в темно-синий. Способ 2. Приготовление растворов. Готовят основные растворы: Раствор 1:
Раствор 2:
Для окраски смешивают две части раствора 1 с одной частью раствора 2. Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов 1 и 2, через минуту краску сливают и мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем промывают водой, докрашивают в течение 2-3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в светло-желтый цвет, зерна волютина (Бабеша-Эрнста) – в темно-синий (рис.19). |