Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Метод КназиТехника. Препарат, фиксированный жаром, обрабатывают 3-5 мин протравой, состоящей из 70 мл насыщенного водного раствора калийных квасцов и 30 мл 20% водного раствора танина. На мазок, промытый водой, наносят каплю карболового фуксина, закрывают покровным стеклом и микроскопируют, не удаляя краску. Микроскопическая картина. Клеточная стенка окрашивается в красно-фиолетовый цвет. Обнаружение нуклеоида бактерийОкраска ядерных элементов. Метод РомановскогоТехника. Препарат фиксируют метиловым спиртом, спирт-формолом, жидкостью Карнуа или смесью Никифорова. Окрашивают рабочим раствором красителя (2 капли красителя Гимза на 1 мл дистиллированной воды) 10-20 мин. Промывают дистиллированной водой и после просушивания микроскопируют. Дистиллированная вода, применяемая для разведения красителя, должна иметь нейтральное значение рН, так как от этого в высокой степени зависят результаты окрашивания. Реакция дистиллированной воды, кроме обычно применяемых с этой целью способов, может быть проверена путем прибавления к ней кристаллика гематоксилина или нескольких капель его спиртового раствора. Вода пригодна, если в течение 2 мин не появляется розовая окраска; в противном случае она кислая и должна быть подщелочена 1 % раствором бикарбоната натрия. Микроскопическая картина. При микроскопировании ядерные элементы имеют красно-фиолетовый цвет, цитоплазма – слабо-розовый. Метод ПикарскогоТехника. Препарат обрабатывают I N раствором НС1 7 мин при подогревании до 60С. После промывания мазок окрашивают по Романовскому. Микроскопическая картина. Ядерные элементы темно-красные, цитоплазма розовая. Окраска риккетсийМетод Романовского-ГимзаОкраска по Романовскому-Гимза является одним из основных методов при изучении морфологии риккетсий, хламидий, спирохет, простейших, а также при исследовании форменных элементов крови. Техника. Краситель Романовского-Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Непосредственно перед употреблением к 10 мл дистиллированной воды нейтральной реакции прибавляют 10 капель краски и тотчас же наливают на препарат, предварительно фиксированный жидким фиксатором, на один час. Затем краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. Окрашивание происходит быстрее (30-40 минут), если препарат с краской поместить в термостат при 37С. К 10 мл дистиллированной воды нейтральной или слабо щелочной реакции непосредственно перед окраской препарата прибавляют 10 капель краски и тот час же наливают на фиксированный препарат (или погружают препарат в стаканчик с краской). Через 1 час краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют. Если поместить препарат с краской в термостат при 37º, то окрашивание происходит быстрее (30-40 минут). Результаты окрашивания зависят от свойства воды, поэтому следует проверять ее реакцию. Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в розово-красный цвет, ядра эукариотических клеток – в красно-фиолетовый, а цитоплазма – в голубой. Метод ЗдродовскогоТехника. Препарат тонким слоем наносят на стекло, фиксируют на пламени и окрашивают разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дважды дистиллированной воды) в течение 5 минут; затем препарат слегка обесцвечивают погружением на 1-3 секунды в слабую (0,01%) соляную кислоту, промывают водой и докрашивают в течение 30 секунд 1% раствором водного метиленового синего. Тонкий мазок фиксируют на пламени горелки. Окраску производят разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дистиллированной воды) в течение 5 минут. Окрашенный препарат промывают водой, а затем обесцвечивают в растворе органической или минеральной кислоты (0,5% лимонная кислота, 0,01% соляная кислота) в течение 2-3 секунд. Затем препарат промывают водой и докрашивают 0,5% раствором метиленовой синьки в течение 0,5 минуты. Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет, в то время как клетки хозяина обесцвечиваются кислотой и дополнительно окрашиваются в голубой (протоплазма) или синий (ядра) цвет (рис.20). Окраска хламидий Метод Романовского-ГимзаТехника (см. выше). Микроскопическая картина. На разных стадиях развития способность воспринимать окраску у хламидий меняется: - “Элементарные тельца” (инфекционные частицы) окрашиваются краской Гимза в пурпурный цвет. - “Первоначальные тельца” (неинфекционные частицы) окрашиваются по Гимза в синий цвет. - Полностью сформировавшиеся зрелые внутриклеточные включения окрашиваются краской Гимза в пурпурный цвет (рис.21). |