Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Метод ХайденхайнаТехника. Реактивы. 1) Жидкость Шаудина: делают смесь 1 объема 96 этилового спирта с 2 объемами насыщенного раствора сулемы; к этой смеси непосредственно перед употреблением приливают ледяную уксусную кислоту в количестве 3-5% к общему объему. Смесь употребляют слегка нагретой (до появления паров). 2)Спирт этиловый 70-96. 3) Спирт-йод – 70 этиловый спирт, к которому добавлена настойка йода до красноватого цвета. 4) Железо-аммониевые квасцы, 2,5-4% водный раствор. 5) Раствор гематоксилина: 1 г кристаллического гематоксилина растворяют в 10 мл 96 этилового спирта и доливают до 100 мл дистиллированной водой: настаивают на свету при комнатной температуре 2-3 недели. Жидкость Шаудина наносят на нефиксированный мазок на 2-5 минут. Затем мазок помещают в 70 этиловый спирт на 2 минуты, смесь этилового спирта с йодом на 2 минуты и снова в этиловый спирт на 2 минуты. Мазок промывают дистиллированной водой в течение 2 минут и помещают в раствор железо-аммониевых квасцов на сутки. Через сутки мазки быстро ополаскивают дистиллированной водой, дают стечь воде и переносят в раствор гематоксилина на сутки. После этого мазки промывают водопроводной водой в течение 5 минут и далее дифференцируют 2% раствором квасцов. Дифференцирование является наиболее трудным моментом. Его цель – удаление излишка краски для выявления структуры простейших. Оно проводится под контролем микроскопа. С препарата осторожно удаляют осадок краски и наливают раствор квасцов. Дифференцирование прекращают, когда протоплазма отдаст излишек краски, и появятся четкие контуры клеток. После этого препарат промывают проточной водой и подсушивают. Микроскопическая картина. На серо-лиловом фоне цитоплазмы клеток отчетливо видны черные хроматиновые элементы ядер. Окраска йодом и йод-эозиномИспользуется для окраски нативных мазков амеб и их цист. Техника. Для приготовления мазка используют раствор Люголя, приготовленный следующим образом: в 100 мл дистиллированной воды сначала растворяют 2 г йодистого калия, а затем 1 г кристаллического йода. Жидкость хранят в склянке темного стекла. Йод-эозин (по Дональдсону): смешивают равные объемы насыщенного раствора кристаллического йода в 5% водном растворе йодистого калия и насыщенного водного раствора желтого (водорастворимого) эозина. Микроскопическая картина. Цисты и вегетативные клетки приобретают четкие контуры коричневого оттенка. Негативная окраска по БурриИспользуется для выявления амеб и их цист. Техника. См. выше. Микроскопическая картина. На темно-сером тушевом фоне видны бесцветные клетки и цисты (рис.24). Микроскопическое исследование актиномицетов Простые методы окраски (см. выше) Техника. См. выше. Микроскопическая картина. Клетки приобретают цвет примененного красителя (рис.25). Метод ГрамаТехника. См. выше. Микроскопическая картина. Клетки окрашиваются грамположительно (в сине-фиолетовый цвет). Микроскопическое исследование патогенных грибов Исследуемый материал помещают на предметное стекло в каплю 10-20% едкой щелочи (или смеси спирта с глицерином), закрывают покровным стеклом и исследуют сразу после приготовления и через 20 минут (рис.26). Основные красители Наиболее часто применяемые в микологической практике красители для контрастного окрашивания мицелия – метиленовый синий, метиловый фиолетовый, генциановый фиолетовый, раствор Люголя. Метиленовый синий применяют в виде спиртовых, водных, щелочных растворов: 1) спиртовый раствор: к 100 мл 96-ного спирта добавляют 3 г краски, взбалтывают, оставляют отстояться на несколько суток, фильтруют; перед употреблением разводят в 5-10 раз; раствор прочный; 2) водный раствор: к 100 мл воды добавляют 2 г краски, отстаивают 2 суток; периодически взбалтывают. Окраска метиленовым синим Техника. На зафиксированный мазок наносят водно-спиртовый раствор метиленового синего на 5-10 мин. Микроскопическая картина. Клетки окрашиваются в синий цвет (рис.27) Дифференциальное окрашивание мицелияТехника. Готовят смесь Судана 3, хлопчатобумажного синего и йода в молочной кислоте (1:1:1). Микроскопическая картина. В гифах жир окрашивается в ярко-оранжевый цвет, гликоген – в буро-красный, а протоплазма – в синий. |