Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Трехцветное окрашивание по ФлеммингуТехника. Препарат фиксируют любым способом, помещают на 5-12 ч в 1-ный раствор сафранина, который готовят смешиванием 1-ного раствора водорастворимого сафранина и воды (1:1); промывают в воде, затем в спирте, снова трехкратно в воде по 15 мин, затем помещают в 2-ный водный раствор генцианового фиолетового на 30 мин, промывают водой и помещают в 1-ный водный раствор оранжа на 1-3 мин, после чего промывают в гвоздичном масле. Микроскопическая картина. Протоплазма окрашивается в розовый цвет, ахроматиновые элементы клетчатки – в фиолетовый, хроматиновые структуры – в красный. Окрашивание гематоксилином ДелафильдаТехника. Препарат фиксируют 35-50-ным спиртом и помещают в краситель, для изготовления которого 1 г гематоксилина растворяют в 6 мл абсолютного спирта и этот раствор вливают по каплям в 100 мл насыщенного водного раствора аммонийных квасцов и оставляют стоять в течение недели, затем прибавляют по 25 мл глицерина и метилового спирта и фильтруют через 4 ч. Время окрашивания 3-30 мин. Препарат промывают в нескольких сменах воды 5-30 мин. Для дифференциации структур клетки к воде или спирту добавляют соляную кислоту (1 капля на 100 мл воды); После чего промывают 70-ным спиртом и водой. Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в красный цвет, протоплазма в фиолетовый. Окрашивание гематоксилином и эозином (или эритрозином)Техника. Препарат окрашивают гематоксилином Делафильда и дифференцируют подкисленным спиртом. Срезы объекта погружают в 1-ный спиртовой раствор эозина (или эритрозина) на 1-2 мин, проводят через крепкие спирты, промывают как обычно. Микроскопическая картина. Ядро и клетчатка окрашиваются в пурпурный цвет, протоплазма – в розовый. Особенно хорошо окрашиваются ржавчинные грибы. Окрашивание борным карминомПрименяется при изучении ядер, хромосом и т.д. Техника. В 100 мл воды, нагретой до 50С, растворяют 4 г буры, добавляют 3 г кармина, а потом доливают 100 мл 70-ного спирта и фильтруют. Препарат фиксируют любым способом, промывают, обезвоживают до 50 проводкой через спирты, погружают в краситель на 1-3 дня, промывают 70-ным спиртом, подкисленным 1-2 каплями соляной кислоты, 2-3 дня. Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в яркий розовый цвет. Окрашивание ацетокарминомТехника. Нефиксированный препарат помещают в краситель, приготовленный следующим образом: насыщают кармином 45-ный (по объему) раствор уксусной кислоты при температуре кипения; после остывания, отстаивания и фильтрации на каждые 100 мл раствора прибавляют 1-2 капли 1-5-ного раствора уксуснокислого железа. Время окрашивания – 1-24 ч. Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в яркий розовый цвет. Окрашивание пирокарминомТехника. Препарат фиксируют спиртом, промывают водой и помещают в краситель, приготовленный следующим образом: 1 г кармина растворяют в 50 мл воды с 50 мл крепкого аммиака, добавляют 50 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты и оставляют в растворе красителя на 2-3 дня, затем фильтруют. Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в яркий розовый цвет. Окрашивание методом HCl-ГимзаОсобенно хорошо окрашиваются ядра в гифах несовершенных грибов. Техника. Препарат фиксируют метиловым спиртом, смесью спирта с формалином или жидкостью Карнуа по следующей схеме: Фиксация жидкости Карнуа 10 мин; промывка в 96-ном спирте; выдерживание в 70-ном спирте 30 мин; промывка в дистиллированной воде; выдерживание в холодной соляной кислоте 6 мин; гидролиз 4-6 мин при 60С; промывка в холодной 1 н. соляной кислоте и дистиллированной воде; выдерживание 15 мин в буферном растворе (фосфатный буфер, pH 6,9), затем 30-40 мин в растворе Гимза (исходный раствор и буфер (1:1) готовят непосредственно перед употреблением). Приготовление раствора Гимза: 3,8 г азурэозина растворяют в 125 мл глицерина при 60С, добавляют 395 мл метилового спирта и фильтруют. Микроскопическая картина. Ядра окрашиваются в синий цвет. При микроскопировании препарат помещают в глицерин. Микроскопия вирусов Как известно, вирусы не могут быть рассмотрены в световом микроскопе, поэтому в световом микроскопе изучают включения или ткани, пораженные вирусом. Изменения, происходящие в тканях, изучают с помощью методов и приемов гистологического исследования, которые рассматриваются в соответствующих руководствах. Препараты для микроскопирования элементарных телец и включений готовят из мазков и отпечатков органов и тканей. Подготовленные мазки немедленно фиксируют. С этой целью применяют простые и сложные фиксаторы. Среди простых чаще других употребляют метиловый спирт, смесь Никифорова (спирта и эфира поровну), ацетон. Среди сложных фиксаторов нашли применение следующие: 1) смесь Дюбоска-Бразиля-Буэна: пикриновой кислоты 1 г, имеющегося в продаже (40%) формалина 60 мл, спирта (80%) 150 мл и ледяной уксусной кислоты 15 мл; 2) сулемовые смеси: а) Шаудина: насыщенного раствора сулемы 2 части и абсолютного спирта 1 часть; б) Ценкера: сулемы 5 г, бихромата калия 2,5 г, сульфата натрия 1 г, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл. Уксусную кислоту добавляют в смесь перед употреблением; в) Хелли-Максимова: сулемы 5 г, бихромата калия 2,5 г, имеющегося в продаже неразведенного формалина 10 мл, 2% раствора осмиевой кислоты 10 мл, дистиллированной воды 100 мл. Формалин и осмиевую кислоту добавляют смесь перед употреблением. Окраска препаратов |