Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Метод ПьюТехника. К 2 мл этилового спирта добавляют 0,2 г толуидинового синего, а затем 100 мл 5% раствора уксусной кислоты (5 мл ледяной уксусной кислоты + 95 мл воды). На фиксированный мазок наливают краску и нагревают 1-2 минуты, до появления паров. Дают остыть, смывают водой и высушивают. Микроскопическая картина: тела палочек – синего цвета, метахроматические зерна – красновато-фиолетовые. Окраска по МейеруТехника. Одновременно из исследуемых бактерий готовят два одинаковых препарата и фиксируют жаром или в течение 5-15 мин в жидкости Карнуа. Красят оба мазка 10 мин метиленовым синим Леффлера и затем один из них помещают в 1% водный раствор серной кислоты, другой – в 4% водный раствор карбоната калия. Через 5 мин препараты сушат фильтровальной бумагой (не промывать). Препарат, обработанный кислотой, докрашивают 0,25% раствором светлого зеленого (лихтгрюн) с 2-3 каплями крепкой уксусной кислоты или хризоидином. Микроскопическая картина. Бактерии окрашиваются в зеленый или коричневый цвет, зерна волютина – в вишнево-красный. В препарате, обработанном щелочью, волютин обесцвечен – пустоты на фоне слабо окрашенных бактерий. Флуорохромирование волютина корифосфиномТехника. 2 мл основного раствора корифосфина 1:1000 на дистиллированной воде, 6 мл уксусной кислоты, до 50 мл дистиллированной воды. Препарат фиксируют метиловым спиртом 8 с, промывают водой, высушивают. На 10 мин наливают рабочий раствор корифосфина, сливают, вновь промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопическая картина. Бактерии желто-зеленые, зерна волютина оранжево-красные. Окраска по РаскинойТехника. На препарат наливают краситель, состоящий из карболового фуксина Циля – 4 мл, насыщенного раствора метиленового синего – 4 мл, ледяной уксусной кислоты – 5 мл, 95% спирта – 95 мл, дистиллированной воды – до 200 мл. Препарат подогревают на пламени до сгорания спирта, а затем промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина. Бактерии окрашиваются в светло-красный цвет, зерна волютина – в черно-синий. Окраска на грамофильную зернистостьМетод МухаОкраску применяют для выявления зернистой формы туберкулезных микобактерий (зерен Муха). Техника. В смеси 10 мл насыщенного спиртового раствора метилового фиолетового и 100 мл 2% водного раствора карболовой кислоты препарат выдерживают сутки. Затем его 1-2 мин обрабатывают раствором Люголя, 1 мин – 5% раствором азотной кислоты и 10 с – 3% раствором хлористоводородной кислоты. После дифференцирования в смеси, состоящей из равных объемов спирта и ацетона, до прекращения отхождения краски промывают водой, докрашивают фуксином Пфейффера, вновь промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина. Микобактерии окрашиваются в фиолетовый цвет. Метод КозловаМетод применяют для выявления зернистой формы туберкулезных микобактерий. Техника. Красят 45 мин в смеси: 1 г генцианового фиолетового, 6 г карболовой кислоты, 40 мл глицерина и 100 мл дистиллированной воды. Генциановый фиолетовый и карболовую кислоту предварительно растирают в ступке, после чего прибавляют глицерин и дистиллированную воду. Перед употреблением краску разводят 3 частями дистиллированной воды и фильтруют. После промывания препарата водой его 20 секунд обрабатывают раствором Люголя, промывают водой, 2-3 с окрашивают 0,1% раствором сафранина, вновь промывают водой и сушат. Микроскопическая картина. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет. Выявление клеточной стенки бактерий При обычных методах окраски мазков клеточная стенка не окрашивается, поэтому применяют специальные методы с протравами. Метод ПешковаТехника. Препарат фиксируют 15 мин в жидкости следующего состава: 90% спирта 60 мл, хлороформа 30 мл и уксусной эссенции 10 мл. Протравливают 2-5 мин в 10% водном растворе танина. Затем препарат промывают водой, красят 30-60 с фуксином Пфейффера и, не промывая, сушат и микроскопируют. Микроскопическая картина. Клеточная стенка окрашивается в розово-красный цвет. Метод ГутштейнаТехника. Препарат, 1-2 ч фиксированный в жидкости Буэна, 2-3 мин подвергают действию протравы (5-10% водный раствор танина), ополаскивают водой и микроскопируют в капле 0,01% водного раствора кристаллического фиолетового. Микроскопическая картина. Клеточная стенка приобретает фиолетовый цвет. |