Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Дифференциально-диагностический метод окраски по ГрамуНаиболее употребительной среди дифференциальных методов является окраска по Граму. При этом методе выявляется способность бактерий удерживать краситель (грамположительные бактерии) или обесцвечиваться в спирте (грамотрицательные бактерии), что связано с различиями в химическом составе и структуре их клеточных стенок. Для выполнения окраски по Граму надо приготовить следующие растворы. Карболовый раствор генцианового фиолетового или кристаллического фиолетового: 1) красителя 1 г, 96% спирта 10 мл, кристаллической карболовой кислоты 2 г, дистиллированной воды 100 мл (растирают в ступке краситель с карболовой кислотой до консистенции кашицы, прибавляют небольшими порциями спирт и окончательно разводят водой, сливают в бутыль, оставляют на сутки, затем фильтруют) или 2) насыщенного (4,8%) спиртового раствора красителя 10 мл, 2% карболовой воду 100 мл. Фуксин Пфейффера. См. разведенный фуксин. Раствор Люголя (в модификации Грама): йодида калия 2 г, дистиллированной воды 10 мл, йода кристаллического 1 г. Смесь хорошо укупоривают, оставляют на сутки, после чего добавляют дистиллированной воды 300 мл. Техника. На фиксированный мазок накладывают кусочек фильтровальной бумаги, и на нее наливают карболовый раствор генцианового фиолетового на 0,5-1 мин. Сливают краситель и, не смывая, наливают раствор Люголя на 1 мин. Сливают раствор Люголя и прополаскивают препарат в 95% спирте в течение 0,5-1 мин, пока не перестанет отходить краситель. Промывают водой. Дополнительно окрашивают разведенным фуксином в течение 0,5-1 мин. Краситель сливают, препарат промывают и высушивают. Видоизменение окраски Грама по А. И. СиневуЗаготовляют полоски фильтровальной бумаги, пропитанной 1% спиртовым раствором кристаллического фиолетового и высушенной. Техника.
Микроскопическая картина. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в розово-красный (рис.14). Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробовВ связи с высоким содержанием липидов эта группа бактерий плохо прокрашивается обычными растворами анилиновых красителей, поэтому для их окраски используют либо концентрированные красители при условии прогревания мазка, либо флуорохромы. В последнем случае для изучения препарата используют люминесцентную микроскопию. Окраска по Цилю-НильсенуНаиболее употребительный метод окраски микобактерий туберкулеза. Для увеличения степени проницаемости бактериальной клетки препарат окрашивают фуксином Циля при подогревании. Окрашенные кислотоустойчивые микроорганизмы затем не обесцвечиваются слабыми растворами минеральных кислот и спиртами. Техника. 1. Фиксированный мазок покрывают фильтровальной бумагой и наливают фуксин Циля. Затем, удерживая препарат пинцетом, подогревают его в пламени горелки до отхождения паров. Повторяют манипуляцию 2-3 раза, добавляя по мере необходимости краску. После охлаждения снимают бумагу и промывают водой. 2. Препарат обесцвечивают 5% раствором серной кислоты, затем тщательно промывают водой. 3. Окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего в течение 3-5 минут, промывают водой, высушивают и микроскопируют. Мазок, окрашенный по Цилю-Нильсену, вместо докраски метиленовым синим можно протравливать насыщенным раствором пикриновой кислоты (по Шпенглеру). Микроскопическая картина. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в розово-красный цвет, другие формы приобретают синюю окраску (рис.15). Флуорохромирование аураминомТехника. Фиксированный препарат окрашивают смесью аурамина 00 (0,12 г), карболовой кислоты (5 мл), дистиллированной воды (до 100 мл). Краситель наливают на мазок, подогревают на пламени до появления паров. Через 10 мин препарат промывают водой и обесцвечивают 15 с солянокислым спиртом. Препарат промывают и подсушивают на воздухе. Микроскопическая картина. Туберкулезные микобактерии флуоресцируют золотисто-желтым цветом. |