Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
 Скачать 1.57 Mb.
|
Метод Бурри-ГинсаТехника. На середину предметного стекла наносят капельку туши и смешивают ее петлей с каплей культуры. Делают мазок ребром покровного стекла, дают высохнуть и микроскопируют. На черном фоне видны неокрашенные микробы, капсулы. Мазок, окрашенный тушью по Бурри, фиксируют сулемой, метиловым спиртом или на пламени. После промывания водой красят 5-10 мин карболовым раствором тионина или фуксина и вновь промывают, а затем высушивают. Микроскопическая картина. Бактерии фиолетовые или красные. Фон черный. Капсулы неокрашенные (рис.17). Способ МихинаТехника. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 2-3 минут при подогревании (до появления паров). Затем краску быстро смывают водой и мазок высушивают фильтровальной бумагой. Микроскопическая картина. Капсулы – светло-розовые, бактерии – темно-синие. Способ ОльтаТехника. Мазок окрашивают 2-3 % водным раствором сафранина в течение 1-3 минут с последующим быстрым смыванием водой. Раствор сафранина готовят перед употреблением, растворяя краску в горячей воде с последующим фильтрованием. На мазок наносят каплю воды, накрывают покровным стеклом, а на него помещают каплю иммерсионной жидкости. Микроскопическая картина: капсулы – бледно-желтого, а бактерии – коричневого цвета. Способ КауфманаТехника. Мазок окрашивают метиленовым синим Леффлера в течение 2-3 минут. Краску смывают водой и мазок погружают в 0,25% водный раствор протаргола или 0,5% раствор азотнокислого серебра на 3-4 минуты, затем окрашивают карболовым раствором фуксина, разведенным 1:20, в течение 5-10 секунд, промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина: капсулы – темно-красные, бактерии – темно-синие. Способ РебигераТехника. Препарат фиксируют формалином, причем фиксация происходит одновременно с окраской. Для этого готовят раствор: 15-20 г генцианвиолета растворяют в 100 мл 40% формалина; дают раствору постоять несколько часов и фильтруют. Окрашивают нефиксированный мазок указанным раствором в течение 15-20 секунд, быстро промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина: капсулы – красновато-фиолетовые, бактерии – темно-фиолетовые. Способ ИонеТехника. Фиксированный мазок окрашивают 2% водным раствором метилвиолета (или генцианвиолета) в течение 1-2 минут при подогревании. Краску быстро смывают небольшим количеством воды, мазок в течение 10 секунд обрабатывают 2% раствором уксусной кислоты, промывают водой и высушивают. Микроскопическая картина: капсулы – розовато-фиолетовые, бактерии – темно-фиолетовые. Окраска по АнтониТехника. Мазок красят (без фиксации!) на холоду 1% водным раствором кристаллического фиолетового 2 мин. Затем промывают 20% водным раствором серной кислоты и высушивают фильтровальной бумагой. Микроскопическая картина. Бактерии окрашиваются в темно-синий цвет, капсулы – в сине-фиолетовый. Окраска по ГиссуТехника. Препарат, фиксированный любым способом, кроме жара, красят 5% водным раствором генцианового фиолетового, подогревая до появления паров. Мазок промывают 20% водным раствором медного купороса и сушат. Микроскопическая картина. Бактерии и капсулы окрашиваются в фиолетовый цвет различной интенсивности. Окраска жгутиков Это одна из наиболее трудных процедур в бактериологической технике, так как жгутики очень легко повреждаются при приготовлении препарата. Поэтому здесь требуется особая тщательность работы. Стекла для препаратов должны быть абсолютно чисты и обезжирены. Обычно работают с новыми покровными стеклами, которые предварительно кипятят в течение 10 мин в хромовой смеси (двухромовокислого калия 20 г, воды 200 мл, серной кислоты 20 мл; приливать в указанном порядке). После кипячения стекол хромовую смесь сливают, промывают стекла 5 мин в слабом растворе едкого натра, после чего обильно промывают водой, ополаскивают спиртом и хранят в спирте (во время промывания не касаться стекол руками). Перед употреблением стекла вынимают из спирта чистым пинцетом и удаляют спирт обжиганием (ничем не вытирать!). Исследуемая культура должна быть не старше 12-18 ч. Материал берут осторожным прикосновением петли к культуре и вносят в пробирку с несколькими миллилитрами водопроводной воды, погружая петлю в воду и держа ее неподвижно некоторое время. Повторяют это 2-3 раза, пока не получится тонкая, лишь слегка опалесцирующая взвесь. Полученной взвеси дают постоять 15-20 мин в термостате для равномерного распределения микробов в воде. Затем платиновой петлей переносят каплю на покровное стекло. Если стекло достаточно чисто, капля принимает правильную круглую форму, легко расплывается и быстро высыхает на воздухе без подогревания. Препараты фиксируют на огне и окрашивают специальными способами, причем перед окраской обрабатывают протравой, которая усиливает действие краски. |