Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения

• Название: Виды микроскопии назначение и принципы применения
• Анкор: Общая микробиология.doc
• Дата: 12.12.2017
• Размер: 1.57 Mb.
• Имя файла: Общая микробиология.doc
• Тип: Литература; #11046
• страница: 34 из 40

Схема титрования антигена

Ингредиент, мл	Номер пробирки
	1	2	3	4	5	6
Антиген в основном разведении	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	0,05
Изотонический раствор натрия хлорида	0,5	0,6	0,7	0,8	0,9	0,95
Комплемент (рабочая доза)	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5

Термостат при температуре 37ºС в течение 1 ч

Гемолитическая система

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

Термостат при температуре 37ºС в течение 1 ч
Проведение основного опыта РСК. Общий объем ингредиентов реакции – 2,5 мл, объем рабочей дозы каждого из них – 0,5 мл. В первую пробирку вносят сыворотку в соответствующем разведении, антиген и комплемент, во вторую – сыворотку в соответствующем разведении, комплемент и изотонический раствор натрия хлорида (контроль сыворотки), в третью – антиген, комплемент и изотонический раствор натрия хлорида (контроль антигена). Одновременно готовят гемолитическую систему, смешивая по 2 мл гемолитической сыворотки в тройном титре (по отношению к указанному в инструкции) и 3% взвеси эритроцитов барана (по отношению к исходному объему крови). Пробирки выдерживают в термостате при температуре 37ºС в течение 1 ч, затем в первые 3 пробирки (первая система) добавляют по 1 мл гемолитической системы (вторая система). После тщательного смешивания ингредиентов пробирки вновь помещают в термостат на 1 ч при температуре 37ºС.

Схема проведения основного опыта РСК

Номер системы	Ингредиент, мл	Номер пробирки
		1 Опыт	2 Контроль сыворотки	3 Контроль антигена
1	Исследуемая сыворотка в разведениях 1:5, 1:10, 1:20, 1:40 и т.д.	0,5	0,5	–
	Антиген (рабочая доза)	0,5	–	0,5
	Комплемент (рабочая доза)	0,5	0,5	0,5
	Изотонический раствор натрия хлорида	–	0,5	0,5

Термостат при температуре 37ºС в течение 1 ч

2

Гемолитическая система (гемолитическая сыворотка в тройном титре + 3% взвесь эритроцитов барана)

1,0

1,0

1,0

Термостат при температуре 37ºС в течение 1 ч
Результаты реакции учитывают предварительно – после извлечения пробирок из термостата и окончательно – после пребывания их в течение 15-18 ч в холодильнике или при комнатной температуре.

При окончательном учете интенсивность реакции выражают плюсами: (++++) – резко положительная реакция, характеризующаяся полной задержкой гемолиза (жидкость в пробирке бесцветная, все эритроциты оседают на дно); (+++, ++) – положительная реакция, проявляющаяся усилением окраски жидкости вследствие гемолиза и уменьшением количества эритроцитов в осадке; (+) – слабо положительная реакция (жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов). При отрицательной реакции (–) наблюдается полный гемолиз, жидкость в пробирке имеет интенсивно розовую окраску (лаковая кровь).

Предложен ряд модификаций РСК, отличающихся повышенной чувствительностью и меньшим объемом используемых ингредиентов. Так, например, при вирусологических исследованиях объем ингредиентов для РСК на холоде – 1 мл. Для капельной РСК берут 1 каплю сыворотки + 1 каплю антигена + 1 каплю комплемента + 2 капли гемолитической системы.

Реакция связывания комплимента нашла самое широкое распространение в микробиологической и серологической диагностике.

С помощью РСК обнаруживают комплементсвязывающие антитела в сыворотке крови больных сифилисом, сапом, хронической гонореей, риккетсиозами, вирусными заболеваниями и др.

Особый интерес РСК представляет для клинической иммунологии. Реакцию применяют для выделения различных субпопуляций лимфоцитов, для выявления антигенов HLA на тромбоцитах, перевиваемых лимфобластах, фибробластах, опухолевых клетках и тромбоцитоспецифических антигенов, а также соответствующих антител.