Задание с какой целью доставлен исследуемый материал в лабораторию Ответ
 Скачать 2.77 Mb.
|
|
ЗАДАНИЯ Составьте схему бактериологического исследования на холеру. Какой из используемых тестов идентификаций вибрионов нужно использовать, если культуры не агглютинируются О-холерной сывороткой? ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ Бактериологическое исследование при подозрении на холеру заключается в выделении чистой культуры и ее идентификации на основании морфологических, культуральных, биохимических свойств, лизабельности специфическими фагами антигенной структуры. Исследование производят поэтапно, интервалы между этапами анализа должны быть максимально сближены, что дает возможность получить ответ в наиболее короткие сроки. ПЕРВЫЙ ЭТЛП. Исследуемый материал подвергают бактериоскопии и засевают питательные среды па жидкие и плотные для выделения чистой культуры, В качестве жидких питательных сред чаще всего используют щелочную 1% пептонную воду. Посевы желательно производить в большие объемы первой жидкой среды накопления, Первую и вторую жидкие среды накопления инкубируют в термостате 5-6 часов, посевы на плотных средах-10- 12 часов. При высеве плотные среды рекомендуется МПА селективной средой ТCBS. ВТОРОЙ ЭТАП: Через 6 часов инкубации изучается рост на первой среде накопления. Холерные вибрионы вследствие интенсивного роста на малопитательной среде щелочной реакции опережают рост сопутствующей флоры, дают гомогенную муть и скапливаются на поверхности среды в виде нежной, голубоватой, просвечивающейся пленки, в Которой вибрионы могут быть в чистой культуре. С первой среды накопления производят бактериоскопию окрашенных по Граму мазков, исследуют на подвижность и ставят ориентировочную реакцию агглютинации с О-холерной сывороткой. Производят пересев с первой среды накопления на которую- в пробирки с 5-10 мл 1% пептонной воды, а также сеют на чашке с простыми и селективными средами. Характерный рост в виде нежной, голубоватого цвета пленки на 1% воде, характерная морфология (грамотрицательные, изогнутые, очень подвижные палочки), а в некоторых случаях положительная ориентировочная реакция агглютинации с пленки дают возможность поставить предварительный диагноз через 6-12 часов от начала исследования. ТРЕТИЙ ЭТАП: (Через 10-12 часов от начала исследования). На этом этапе изучают рост на второй среде накопления и на чашке с посевом нативного материала. Со второй среды накопления проводят те же исселедования, которые на втором этапе были выполнены с первой среды накопления. Материал из второй пептонной воды накопления засевают на чашки с плотными средами, На чашках выбирают колонии, типичные или подозрительные для холерного вибриона. На простом щелочном МПА холерный вибрион дает круглые, гладкие, плоские, голубоватые, просвечивающие в проходящем слете, гомогенные с ровным краем колонии диаметром 1-2 мм, Консистенция колоний маслянистая, они легко снимаются и эмульгируются. На ТСBS через 10-18 часов колонии вибрионов плоские, окрашены в желтый цвет на фоне голубовато-серой среды. Сопутствующая флора на ТСBS в эти сроки. как правило, не растет. Рекомендуется брать для исследования не менее 5 подозрительных колоний. Из наиболее подозрительных колоний готовые мазки окрашивают по Граму, изучают морфологию, а также подвижность на раздавленной капле. Ставят ориентировочную реакцию аrтлютинации, отсевают на лактозо-сахарозную среду. скошенный щелочной МПА, а также в пробирку бульоном, Лактозо-сахарозную среду. скошенный агар инкубируют 10-12 часов, а пробирку с бульоном 3- часа при 37С. С молодой бульонной культурой ставят развернутую реакцию агглютинации с типовыми сыворотками, проверяют сахаролитические свойства для определения группы Хейберга посев на сахарозу, маннозу, арабинозу) и фаголизабельность с фагами С и Эль-Тор-2, что дает возможность в случае положительных результатов поставить днагноз через 18-24 часа от начала исследования. . ЧЕТВЕРТЫЙ ЭТАП: (Через 24-28 часов от начала исследования). Учет развернутой реакции фаголизиса и разложения сахаров, Холерные вибрионы ферментируют с образованием кислоты сахарозу и маннозу. Арабиноза остается без изменений. На основании этих тестов можно выдать ответ о выделении холерного вибриона. На четвертом этапе исследуют чашки, засеянные с пептонной воды по той же схеме, по ко- торой изучались чаши с посевом нативного матернала. Из посевов на лактозо-сахарозную среду отбирают культуры, ферментирующие сахарозу без газа и не разлагающие лактозу. Чистые культуры, выросшие на этой среде и на косом агаре, идентифицируются по вышеуказанным признакам (сахаролитические свойства, фаголизабельность специфическими фагами, аrглютинация типовыми сыворотками). По мере роста изучают оставшиеся посевы. Объем исследований по идентификации культур может быть различным в зависимости от того, необходимо ли ее провести только до вида V. cholerae (что является достаточным для практических лабораторий) или дать более детальную характеристику культуры с определением биотипа (Эль-Тор, классический). серотипа (Инаба. Огава) и фаготипа. Сроки выполнения исследования могут быть различными и зависят как от обсемененности исследуемого материала. так и от используемых питательных сред. Положительный ответ через 12-36, отрицательный - 24-48 часов. 2. Обязательным тестом является постановка реакции фаголизиса с типовыми фагами С (Мукерджи-IV) и Эль-Тор-2 определенные группы Хейберга (изучение сахаролитических свойств по отношенню к сахарозе, маннозе и арабинозе). ЗАДАНИЕ № 164 В инфекционное отделение города С. поступил ребенок Сережа К., 10 лет, с профузным поносом и рвотой и с симптомами обезвоживания (сухая кожа со сниженным тургором, охриплость голоса, цианоз, задержка мочеиспускания). В лабораторию особо опасных инфекций, которая проводила диагностику всех острых кишечных инфекций в этом городе, направлен исследуемый материал; рвотные массы. В рвотных массах обнаружены грамотрицательные подвижные, слегка изогнутые палочки. В этот период в городе отмечалась неблагоприятная эпидемическая ситуация по форме 30. ЗАДАНИЯ 1. Какой метод диагностики уже использовался и какое можно сделать предварительное заключение? 2. Составьте схему лабораторной диагностики указанной острой кишечной инфекции. ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1,1. Проводилось бактериоскопическое исследование рвотных масс. 1.2. Предварительное заключение- в рвотных массах обнаружены вибрионы. 2. При острой кишечной инфекции, в случае обнаружения в исследуемом материале вибрионов, используется бактериологический метод. 2.1. Исследуемый материал засевают в 1 щелочную 1% пептонную воду и чашки с щелочным МПА (можно использовать селективные среды Монсура и ТСВS). 2.2. Пептонную воду с посевом нативного материала выращивают 6 часов, чашки 12 часов (селективные среды 18-20 часов). 2.3. Через 6 часов изучают рост на 1 пентонной воде, В случае появления нежной, голубоватой пленки готовят мазки, один из них окрашивают по Граму; другом изучают подвижность (без окраски): обязательная постановка реакции агглютинации на стекле с О-холерной сывороткой. 2.4. Пересев на 2 щелочную 1% пептонную полу и чашки с щелочным МПА. 2.5. Через 12 часов от начала исселедования изучение роста на 2 пептонной воде и колоний, выросших на чашках с посевами нативного материала. 2.6. 2 пептонная вода: изучение морфологии в окрашенных мазках и подвижности, реакция агглютнации на стекле с О-холерной сывороткой. 2.7. Отбирают мелкие, прозрачные, слегка выпуклые, блестящие с голубым оттенком колонии (не менее 5 колоний) и отсевают на лактозо-сакарозную среду, щелочной скошенный МПА и мясо-пептонный бульон для выделения чистой культуры и окончательной идентификации. 2.8. Через 10-12 часов после инкубации в термостате изучают изменения в лактозо-сахарозной среде: производят посев в углеводный ряд, состоящий из лактозы, сахарозы и арабиннозы; определяют фаголизабельность фагами С и Эль-Тор 2: способность гемолизировать эритроциты барана. Такая схема идентификации позволяет определить хемовар и биовар вибрионов. 2.9. Определение серотипа заключается в постановке развернутой реакции агглютинации с типовыми сыворотками Инаба, Огава. 2.10. Предварительное заключение выделенной культуре можно сделать через 6-12 часов, окончательное через 36-48 часов. ЗАДАНИЕ № 165 Тов. С. оформлялся на работу в кафе на должность технолога по приготовлению холодных закусок. Для установления, не является ли он бактерионосителем патогенных энтеробактерий, в баклаборатории СЭС проводилось микробиологическое исследование кала методом копрокультуры. ЗАДАНИЯ 1. Какие питательные среды необходимо использовать для выделения бактерий-возбудителей кишечных инфекций? 2. Перечислите этапы исследования. 3. Обнаружение каких микроорганизмов в испражнениях тов. С. является противопоказанием к работе в сфере общественного питания? 4. Какие микроорганизмы могут быть выделены на этих средах? 5. Составьте схему дальнейшего исследования с целью выделения и идентификации указанных микроорганизмов. 6. Дайте заключение о возможности допуска тов. С. к работе в кафе. ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1.1. Селенитовую или магниевую среды обогащения для оптимального выделения шигелл и сальмонелл. 1.2. Дифференциально-диагностические среды: Плоскирева, висмут-сульфит агар, можно Эндо, Левина. 2.1. Посев исследуемого материала (испражнений) на селенитовую среду обогащения. 2.2. После 18-24 часов инкубации и изменений цвета среды -пересев на одну из вышеуказанных дифференциально-днагностических сред. 2.3. Изучение роста колоний после 18-24 часов инкубации. 2.4. Отсев подозрительных на сальмонеллы или шигеллы колоний на среду Олькеницкого. 2.5. Изучение изменений на среде Олькеницкого через 18-24 часа, определение морфологии культуры в окрашенных мазках, подвижности, агглютинация на стекле либо со смесью дизентерийных сывороток (Зонне, Флекснера) либо с поливалентной сальмонеллезной сывороткой групп АВСДЕ. 2.6. Определенне ферментативной активности в коротком пестром ряду Гисса. 2.7. В случае обнаружения шигелл Флекснера - агглютинация с типовыми сыворотками; в случае выделения сальмонелл сывороткой – агглютинация на стекле с адсорбированными монорецепторными О-и Н-сальмонеллезными сыворотками. 2.8. При обнаружении шигелл – колицинотипирование: сальмонелл – фаготипирование культур. 2.9. Определение спектра чувствительности выделенных культур к антибиотикам, 3. Обнаружение сальмонелл, шигелл энтеропатогенных кишечных палочек является противопоказанием к допуску на работу в сферу общественного питания и водоснабжения. Использованные питательные среды не позволили обнаружить указанных Вами возбудителей кишечных инфекций при троекратном посеве копрокультуры. Поскольку в городе в данный период была неблагоприятная эпидемиологическая ситуация по форме N 30, в лаборатории особо опасных инфекций дополнительно произвели посев испражнений тов. С. на щелочной МПА и щелочную 1% пептонную воду. 4. На указанных средах могут быть выделены холерные и холероподобные вибрионы. При посеве на указанные среды через 6 часов на щелочной 1% пептонной воде появилась нежно-голубоватая пленка, а на чашках с щелочным МПА через 10-12 часов инкубации -рост нежных, прозрачных, гладких, мелких колоний, имеющих голубоватый оттенок при изучении их в проходящем свете. 5.1. Изучение морфологии и подвижности мазках с 1% пептонной воды, постановка РА на стекле с О-холерной сывороткой; пересев на 2 пептонную воду и чашки с щелочным МПА или селективной средой TCBS. 5.2. Изучение морфологии, подвижности и РА с О-холерной сывороткой после 6 часов инкубации 2 пептонной воды. 5.3. Изучение через 12 часов от начала исследования испражнений роста колоний на щелочном МПА и через 20-24 часа среде ТСBS. Приготовление мазков подозрительных колоний, окраска по Граму; определение подвижности в раздавленной капле; реакция агглютинации на стекле с О-холерной сывороткой. Отсев не менее 5 подозрительных колоний на лактозо-сахарозную среду, щелочной скошенный МПА и мясо-пептонный бульон. 5.4. Идентификация выделенной культуры до хемо- и бновара по способности изменять лактозо-сахарозную среду; по ферментативным свойствам в' цветном ряду, состоящем из маннозы, сахарозы и арабинозы; фаголизабельности специфическими фагами С и Эль-Тор 2; способности гемолизировать эритроциты барана, чувствительности к полимиксину. 5.5. Определение серовара выделенной культуры в линейной реакции типовыми сыворотками Инаба, Огава. 6. При обнаружении в испражнениях холерного внбриона (классического, Эль-Тор, НАГ), тов. С. не может быть допущен к работе в кафе, т. к. он является бактерионосителем, Он нуждается в первоочередной санации и подлежит учету в санэпидстанции как возможный источник холеры. ЗАДАНИЕ № 166 Через 3 недели после приезда в очаг, неблагополучный по туларемии, заболел охотник Н. В течние 5 днсй у него были озноб, повышенная температура (38'С), повышенная потливость, головная боль, разбитость, боли в мышцах. При обследовании обнаружены увеличенные шейные лимфоузлы. Предполагая, что у больного туляремия и зная, что ранним методом диагностики этого заболевания является аллергическая проба, врач поставил внутрикожную пробу с туляривом. Через 48 часов в месте введения аллергена появились гиперемия и отек диаметром 1 см. ЗАДАНИЯ 1. Произведите учет этой пробы. 2. Что собой представляет тулярия? 3. Можно ли, используя данные, изложенные в условии задачи и полученные при постановке аллергической пробы, поставить диагноз «туляремия»? Если нет, то почему? 4. Что нужно предпринять для выяснения этиологии заболевания? ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ 1. Проба положительная, так как положительной она считается при наличии гиперемии и отека диаметром 0,5 см и более. 2. Это взвесь убитых нагреванием при 70° в течение 1 часа туляремийных бактерий вакцинного штамма в физиологическом растворе, содержащем 3% глицерина. В 1 мл препарата 500 млн. бактериальных клеток. 3. Нет, так как проба эта может быть положительной после прививки и перенесенного заболевания. 4. Уточнить: а) не болел ли раньше туляремией; б) не вводили ли ему перед отъездом на работу в данную местность туляремийную вакцину. Провести серологическую диагностику, поставить реакцию агглютинации или непрямую реакцию гемагглютинации Задание 167 Больному который предъявил жалобы на лихорадку сопровождающуюся познабливанием с небольшим потоотделением и у которого при осмотре был обнаружен увеличенный малоболезненный с четкими контурами лимфатический узел (бубон) врач поставил аллергическую пробу с тулярином и взял кровь для реакции агглютинации. Через 48 часов он пришел к заключению что заболевание вызвано Francisella tularensis Вопрос: Какие результаты исследований позволили врачу прийти к выводу что человек болен туляремией? Ответ: Положительная аллергическая проба (припухлость и покраснение более 0,5 см) и положительная реакция агглютинации с туляремийным диагностикумом в разведении 1:100 Задание 168 Обследовав больного К который предъявил жалобы на высокую температуру головную боль боли в мышцах и у которого отмечались резкий отек век гиперемия конъюнктив бубон в околоушной области слева врач поставил диагноз “глазо-бубонная форма туляремии” и направил отделяемое из конъюнктивы глаза в лабораторию особо опасных инфекций. Исследуемый материал посеяли на свернутую желточную среду ввели подкожно белой мыше и приготовили из него мазок. Животное погибло на 5-й день после введения материала на питательной среде к этому времени роста не было а в мазках обнаруживались мелкие грамотрицательные колонии Вопрос: Являются ли полученные результаты исследования подтвержденным тому что заболевание вызвано Francisella tularensis? Ответ: Да так как в мазке обнаружены грамотрицательные мелкие палочки. То что нет роста на средах тоже в какой-то степени подтверждает предположение о том что в исследуемом материале находятся возбудители туляремии. Полученные культуры непосредственно от больного почти всегда дают отрицательные результаты Вопрос: Какими последующими исследованиями можно доказать что лабораторное животное погибло от туляремии? Ответ: Вскрыть животное доказать из органов сделать мазки-отпечатки и посев на свернутую яичную среду. Полученную культуру подвергнуть микроскопическому бактериологическому и биологическому исследованиям Задание 169 У больного врач заподозрил бубонную форму туляремии (температура 39,5 головная боль боли в икроножных мышцах вскрывшийся малоболезненный бубон) и решил выделить из гноя микробов и установить их видовую принадлежность Вопрос: В какого типа лаборатории можно провести исследование? Ответ: В лаборатории особо опасных инфекций. Бактериологическая работа с возбудителем должна проводиться с обязательным соблюдением режима безопасности регламентированной соответствующими инструкциями Вопрос: Какой материал можно взять от больного на исследование? Ответ: Гной Вопрос: В чем особенность бактериологического метода исследования на туляремию? Ответ: Выделить культуру туляремийного микроба из организма больного непосредственными высевами удается исключительно редко. Бактериологическое подтверждение диагноза может получено лишь путем заражения материалом взятым от больного чувствительных к инфекции лабораторных животных с последующим выделением от этих животных и идентификацией возбудителя |