ответы микра. Экзаменационные вопросы по дисциплине микробиология, вирусология
 Скачать 0.55 Mb.
|
|
Экзаменационные вопросы по дисциплине «микробиология, вирусология» 2021 г. 1 раздел Медицинская микробиология, ее задачи, связь с клиническими дисциплинами. Микробиология — наука о микробах, о строении, жизнедеятельности и экологии микробов — мельчайших форм жизни, не видимых невооруженным глазом. Выделились медицинская микробиология, изучающая микробов (бактерий, грибов, вирусов, простейших), патогенных для человека; ветеринарная, изучающая микробов, патогенных для животных; сельскохозяйственная, изучающая микробов — вредителей растений; морская, изучающая микробов — обитателей морей, океанов и других водоемов; в последнее время выделилась космическая микробиология, изучающая представителей микромира, населяющих космическое пространство. Медицинская микробиология, как и всякая наука, делится на общую (по методам и уровню исследования) и частную (по объекту исследования). Общая медицинская микробиология подразделяется на морфологию, физиологию, биохимию, генетику, экологию и эволюцию микробов, а частная — на бактериологию, вирусологию, микологию и протозоологию. Микробиология — весьма разветвленная наука, имеющая связи со многими другими биологическими и медицинскими дисциплинами, прежде всего клиническими (инфекционные болезни, хирургия, внутренние болезни, акушерство и гинекология, заболевания мочеполовой системы и др.), медико-профилактическими (эпидемиология, гигиена, экология), а также фундаментальными науками (молекулярная биология, генетика, иммунология, биохимия). Особенно тесно микробиология связана с иммунологией, которая зародилась в ее недрах. Основные методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД бактериоскопический метод: первичного сифилиса, острой мужской гонореи, туберкулеза, лепры, возвратного тифа; вирусоскопический метод – обнаружение вирусов в исследуемом материале с помощью электронного микроскопа. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ метод: бактериологический метод – посев материала от больного с подозрение на бактериальную инфекцию на искусственные питательные среды с целью обнаружения и идентификации возбудителя.(холеры, брюшного тифа, дизентерии, туберкулеза ); вирусологический метод – заражение материалом от больного с подозрением на вирусную инфекцию куриного эмбриона (для диагностики гриппа), культур клеток (для диагностики аденовирусной инфекции, полиомиелита), лабораторного животного (для диагностики клещевого энцефалита, бешенства). Затем проводят идентификацию вируса; микологический метод – посев материала от больного с подозрением на грибковую инфекцию на соответствующие питательные среды с последующей идентификацией плесневых и дрожжеподобных грибов. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД(от лат. serum – сыворотка и logos – учение) – определение в сыворотке крови больного антител к конкретному возбудителю инфекционного заболевания. Используют для диагностики бруцеллеза, туляремии, ВИЧ-инфекции др. АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД–определение состояния повышенной чувствительности (аллергии) макроорганизма к микробным аллергенам. Для диагностики инфекционных заболеваний используют следующие кожно-аллергические пробы: при туберкулезе – проба Манту с туберкулином; при бруцеллезе – проба Бюрне с бруцеллином; при туляремии – проба с тулярином; при сибирской язве – проба с антраксином. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ: Полимеразная цепная реакция (ПЦР). С помощью ПЦР в исследуемом материале определяют специфический участок его нуклеиновой кислоты (НК). Этот фрагмент становится матрицей для многократного увеличения его копий (амплификация), что впоследствии дает возможность визуально учесть реакцию. Для проведения ПЦР необходимы ДНКполимераза или РНК-полимераза и специфический праймер. Праймеры – это синтетические олигонуклеотиды, комплементарные фрагменту НК определяемого микроорганизма. В настоящее время этот метод широко применяется для диагностики ВИЧинфекции, вирусных гепатитов, хламидийной инфекции и др.; Метагеномные исследования. Метагеномика – изучает генетический материал (метагеном) сообществ микроорганизмов в совокупности. Цель метагеномики – получение и анализ всех геномов для установления видового состава и метаболических взаимосвязей в микробном сообществе. Такой метод генетической идентификации позволяет определить фенотипическую принадлежность микроорганизмов, и степень родства организмов БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД – обнаружение возбудителя путем заражения материалом от больного лабораторных животных. Используют для диагностики ботулизма, бешенства. Размеры и основные формы бактерий. По размеру бактерии подразделяют: мелкие (1-3 мкм); средние (3-6 мкм); крупные (> 6 мкм). Основные формы бактерий: Шаровидные – кокки. Палочковидные. Извитые. КОККИ (в зависимости от взаиморасположения в мазке кокки подразделяют): микрококки (от греч. micros – малый) – в мазке располагаются одиночно; диплококки (от греч. diplos – двойной) – в мазке располагаются попарно. - бобовидной формы: гонореи, менингококковой инфекции. - ланцетовидной формы: крупозной пневмонии; тетракокки (от греч. tetra – четыре) – располагаются в мазке по четыре; сарцины (от греч. sarcio – связываю) – располагаются пакетами по 8-16 клеток: Тетракокки и сарцины, как правило, не вызывают заболеваний у человека. стрептококки (от греч. streptos - цепочка) – располагаются в мазке цепочкой: скарлатины, рожи, ревматизма и урологическим инфекциям; анаэробной инфекции; стафилококки (от греч. staphylе – виноградная гроздь) – в мазке располагаются гроздьевидными скоплениями: гнойно-септической патологии; урологическим инфекциям. ПАЛОЧКОВИДНЫЕ: неспорообразующие палочковидные бактерии: Psеиdomonas aeruginosa – синегнойная палочка, возбудитель госпитальной инфекции; Escherichia coli – кишечная палочка, нормальный симбионт толстого кишечника; Vibrio choleraе – возбудитель холеры (изогнутые в виде запятой палочки). спорообразующие палочковидные бактерии. - бациллы – диаметр споры меньше диаметра клетки, поэтому спора не деформирует клеточную стенку: сибирской язвы (спора располагается центрально); - клостридии (от лат. closter – веретено) – диаметр споры превышает диаметр клетки, поэтому спора деформирует клетку: Clostridium perfringens – возбудитель газовой гангрены. Спора располагается центрально, клетка имеет форму веретена;  Clostridium tetani – возбудитель столбняка. Спора располагается терминально, что придает клетке сходство с барабанной палочкой; Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма. Спора располагается субтерминально, что придает клетке сходство с теннисной ракеткой. ИЗВИТЫЕ: спириллы (от греч. speira – завиток) – бактерии, имеющие изгибы, равные одному или двум оборотам спирали. При микроскопии имеют форму буквы S или крыльев летящей чайки: сапрофит; кишечного кампилобактериоза; ,хронического гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, рака желудка; спирохеты – (греч. speira - завиток, chaite – волосы) имеют штопорообразную форму. Отличаются друг от друга по характеру первичных и вторичных завитков. Первичные завитки – изгибы самой цитоплазмы, вторичные завитки образуются при движении спирохет. Медицинское значение имеют три рода спирохет: трепонемы – имеют мелкие равномерные первичные завитки: Treponema pallidum – возбудитель сифилиса. боррелии – имеют крупные неравномерные первичные завитки и заостренные концы: Borrelia recurrentis – возбудитель эпидемического возвратного тифа; Borrelia duttoni – возбудитель эндемического возвратного тифа; Borrelia burgdorferi – возбудитель болезни Лайма. лептоспиры – имеют мелкие тесно прилегающие друг к другу первичные завитки, крючкообразно загнутые концы и крупные вторичные завитки, придающие микробам S- или С-образную форму: Leptospira interrogans – возбудитель лептоспироза. К БАКТЕРИЯМ ТАКЖЕ ОТНОСЯТ: АКТИНОМИЦЕТЫ (от греч. actis – луч, mykes – гриб) – ветвящиеся палочковидные бактерии. Отличительный признак – способность образовывать мицелий из тонких нитевидных ветвящихся клеток (гифов), что придает им сходство с грибами. Размножаются путем фрагментации мицелия на палочки и кокки. Большинство актиномицетов – сапрофиты, обитают в почве. Некоторые из них являются продуцентами антибиотиков. Патогенные виды (Actinomyces israelii) вызывают у человека актиномикоз – хронический гнойновоспалительный процесс различной локализации. МИКОПЛАЗМЫ – не имеют клеточной стенки, поэтому могут быть разнообразной формы от кокковидной до нитевидной. Имеют малые размеры (0,11,2 мкм). Mycoplasma pneumoniaе – возбудитель атипичной пневмонии. РИККЕТСИИ – мелкие короткие палочки, могут быть разнообразной формы от кокковидной до нитевидной: Rickettsia typhi – возбудитель эндемического сыпного тифа; ХЛАМИДИИ – самые мелкие бактерии сферической формы (менее 1,2мкм): Chlamydia trachomatis – возбудитель урогенитального хламидиоза. Морфология плесневых и дрожжеподобных грибов. Роль в патологии. Микроскопические грибы относят к царству Fungi. Это эукариотические микроорганизмы. Они имеют оформленное ядро с ядерной оболочкой и ядрышками, митохондрии, аппарат Гольджи. Микроскопические ПЛЕСНЕВЫЕ ГРИБЫ представляют собой скопления тонких ветвящихся нитей (гифы), формирующие мицелий. Различают субстратный мицелий, погруженный в питательную среду, и воздушный, растущий на поверхности среды. Размножаются при помощи спорообразования. Различают следующие виды плесневых грибов: Мукоровая (одноклеточная) плесень (Mucor) – на концах плодоносящих гиф располагаются шарообразные расширения (спорангии), наполненные эндоспорами. Леечная (многоклеточная) плесень (Aspergillus) – на концах плодоносящих гиф имеются небольшие клетки (стеригмы), на которых располагаются цепочки конидий (эндоспоры), что напоминает льющуюся из лейки воду. Кистевики (Penicillium), многоклеточные грибы, у которых концы плодоносящих гиф имеют вид кисточек. Плесневые грибы – сапрофиты, широко распространенные во внешней среде. Используются как продуценты антибиотиков. Могут вызывать заболевания только у ослабленных людей. ДРОЖЖЕПОДОБНЫЕ ГРИБЫ рода Candida – условно-патогенные микроорганизмы, широко распространены в окружающей среде, являются симбионтами организма человека. Отличаются от истинных дрожжей отсутствием спорообразования. Это крупные округлой или овальной формы клетки. Размножаются почкованием. Род Candida включает около 200 видов. Некоторые представители дрожжеподобных грибов (С.albicans, C.tropicalis и др.) при снижении резистентности макроорганизма могут вызывать микозы (кандидозы) с поражением кожи, слизистых оболочек, внутренних органов. Техника приготовления и окрашивания бактериологического препарата. Принцип простого и сложного методов окраски. Этапы приготовления мазка: Собственно приготовление мазка. Высушивание. Фиксация. Окрашивание. Собственно приготовление мазка: из культуры бактерий, выращенной в жидкой питательной среде: обезжирить предметное стекло; нанести на стекло с помощью бактериологической петли каплю культуры и распределить ее параллельными движениями; из культуры бактерий, выращенной на плотной питательной среде: на обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора, затем внести в эту каплю петлей небольшое количество культуры бактерий с плотной питательной среды и распределить параллельными движениями. Высушивание мазка на воздухе или высоко над пламенем спиртовки (в струе теплого воздуха). Фиксация мазка: жаром, в пламени спиртовки – при изучении формы и расположения бактерий и дифференциации их при окраске сложным методом; химическим методом – при изучении нативных (сохранивших естественную структуру) препаратов от больного (кровь, ликвор, гной и т.д.). В качестве химических фиксаторов чаще используют этиловый и метиловый спирт, а также смесь Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в соотношении 1:1). Цель фиксации: убить микроорганизмы; прикрепить их к предметному стеклу; улучшить их прокрашивание. 6.Виды микроскопии, используемые в медицинской микробиологии. СВЕТОВОЙ МИКРОСКОП. Разрешающая способность 0,2 мкм. Предназначен для изучения формы, размеров и структуры окрашенных клеток. При исследовании микроорганизмов применяют иммерсионный объектив. Его преимущество – с помощью иммерсионного масла устанавливается оптически однородная среда с одинаковым показателем преломления между стеклом и линзой. Благодаря этому все лучи, не преломляясь и не изменяя направления, попадают в объектив, чем достигается более высокая разрешающая способность. В качестве иммерсионного масла обычно используют кедровое или касторовое, показатель преломления которых равен показателю преломления света в стекле. ТЕМНОПОЛЕВОЙ МИКРОСКОП (ультрамикроскоп). Разрешающая способность – 0,02-0,04 мкм. Предназначен для изучения формы, размеров и подвижности живых, неокрашенных бактерий. Темное поле создается с помощью специального конденсора, в котором затемнена центральная часть и таким образом создается боковое освещение. Поэтому в объектив попадают лучи, отраженные от объекта. Увеличение разрешающей способности микроскопа связано с тем, что отраженный луч имеет более короткую длину волны. ФАЗОВО-КОНТРАСТНЫЙ МИКРОСКОП. Разрешающая способность – 0,2 мкм. Предназначен для изучения формы, подвижности и структуры живых неокрашенных бактерий. Имеет специальный набор фазовых объективов и соответствующих им кольцевых диафрагм конденсора. С помощью этого устройства достигается преобразование невидимых фазовых колебаний преломленного луча в видимые амплитудные колебания. ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МИКРОСКОП. Разрешающая способность – 0,2 мкм. Предназначен для экспресс-диагностики вирусных и бактериальных инфекций. Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых ультрафиолетовых (УФ) лучей. Препараты для люминесцентной микроскопии окрашивают специальными люминесцентными красителями – флуорохромами (акридиновый оранжевый, аурамин и др.). В качестве источника УФ-света обычно используют ртутнокварцевую лампу. Под действием УФ-излучения окрашенные клетки начинают светиться красным или зеленым светом. ЭЛЕКТРОННЫЙ МИКРОСКОП. Разрешающая способность – менее 1Å (Å – ангстрем). Предназначен для изучения строения вирусов, бактерий и отдельных макромолекул. Высокая разрешающая способность достигается малой длиной волны электронов. В электронном микроскопе вместо света используют поток электронов в безвоздушной среде. Источником электронов является вольфрамовая нить катода, разогреваемая до высокой (2500-29000С) температуры. Роль оптических линз выполняют электромагниты. Для исследования препаратов в электронном микроскопе применяют специальные пленки, проницаемые для электронов. 7. Окраска по Граму. Механизм окраски. Примеры грамположительных и грамотрицательных бактерий. Окраска по Граму (в модификации Синѐва): на фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генциан-фиолетовым, смачивают водой, окрашивают 2 минуты; снимают бумагу и наносят на мазок раствор Люголя на 1 минуту, затем краситель сливают; обесцвечивают мазок 96о спиртом 10-15 секунд; промывают мазок водой; докрашивают мазок фуксином Пфейффера 30 секунд; промывают мазок водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют. Механизм окраски по Граму. Дифференцировка на грамположительные и грамотрицательные бактерии зависит от строения клеточной стенки, основой которой является пептидогликан. У грамположительных бактерий толщина пептидогликана 500Å, у грамотрицательных – не более 150Å. При окрашивании препарата генциан-фиолетовым, а затем раствором Люголя, образуется комплекс генциан-фиолетовый + йод. Все клетки окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. При обработке спиртом у грамположительных бактерий образовавшийся комплекс не обесцвечивается. Поэтому при окрашивании фуксином Пфейффера они сохраняют сине-фиолетовый цвет. У грамотрицательных бактерий комплекс генциан-фиолетовый + йод обесцвечивается спиртом и при окраске фуксином Пфейффера они приобретают розово-красный цвет. В результате окраски бактерии дифференцируют на грамположительные (сине-фиолетовые) или грамотрицательные (розово-красные). К грамположительным относят все кокки (кроме нейссерий) и спорообразующие бактерии. К грамотрицательным – нейссерии, неспорообразующие бактерии, спириллы. 8. Оболочечные структуры бактериальной клетки, их функции. L-формы бактерий. К оболочечным структурам бактериальной клетки относят капсульный слой, клеточную стенку и цитоплазматическую мембрану. Снаружи многие бактерии имеют КАПСУЛЬНЫЙ СЛОЙ (МИКРОКАПСУЛУ). Это слизистое образование, не превышающее диаметр бактериальной клетки. У некоторых бактерий имеется ИСТИННАЯ КАПСУЛА – слизистый слой, превышающий диаметр бактериальной клетки. Капсула не является обязательной структурой. У большинства бактерий она имеет полисахаридную природу. У некоторых (Bacillus anthracis) – состоит из белка. Большинство бактерий образуют капсулу только в макроорганизме (in vivo): Streptococcus pneumoniaе – возбудитель крупозной пневмонии; Bacillus anthracis – возбудитель сибирской язвы; Clostridium perfringens – возбудитель газовой гангрены; Francisella tularensis – возбудитель туляремии; Yersinia pestis – возбудитель чумы. Некоторые бактерии образуют капсулу в макроорганизме и на питательной среде (in vivo и in vitro): Klebsiella pneumoniaе – возбудитель пневмонии; Klebsiella oxytoca– возбудитель сепсиса, инфекций мочевыводящих путей; Klebsiella granulomatis – возбудитель паховой гранулемы. Функции капсулы: в макроорганизме защищает бактерии от фагоцитоза и действия антител; во внешней среде предохраняет бактерии от высыхания. Капсулу выявляют в окраске по Бурри-Гинсу. В результате окраски бактерии красного цвета, вокруг них бесцветные капсулы на черно-розовом фоне. |