ШПОРА Микробиология. Шпаргалка на экзамен. 24 Классификация антител. Принцип деления антител на классы
 Скачать 1.48 Mb.
|
|
16 Способы стерилизации лабораторкой посуды. Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Предназначен для суховоздушной стерилизации стеклянной лабораторной посуды и других жаростойких материалов (чашки Петри, пробирки, пипетки и др.). Термическая стерилизация предметов - обработка насыщенным водяным паром под давлением. Паровой стерилизации подвергают изделия из текстиля (белье, вату, бинты, шовный материал), из резины, стекла, некоторых полимерных материалов, питательные среды, лекарственные препараты. | 9 Способы определения чувствительности выделенной культуры к антибиотикам. Наиболее простым является метод бумажных дисков. Последние представляют собой небольшие кружки фильтровальной бумаги, пропитанные определённым количеством антибиотика. Диски, пропитанные различными антибиотиками, помещают на чашки с МПА, где сделан сплошной посев исследуемой культуры в виде смыва. Степень чувствительности к антибиотикам определяют после инкубации в термостате (сутки) по величине зоны задержки роста вокруг каждого диска. | 11 Механизм окраски микробоя по Граму. В результате фиксации огнем, несколько нарушается структура поверхностной стенки. У Грам+ разрушаются 2-3 слоя пептидогликана (ПГ), и изоставшихся слоев спирт за 30 сек. неуспевает вымыть генцианвиолет, и они остаются окрашены в синий цвет. Если воздействовать спиртом 2-3, то Грам+ можно обесцветить. Грам- стенка в результате фиксации огнем, становится более рыхлой, а спирт является жирорастворителем. Он вымывает краску за 30сек., и поэтому их докрашивают фуксином (красный цвет). | |
| 14 Способы определения наличия у бактерии спор. Окраска по Ожешко – сначала разрыхляют оболочку НСl, нагревают, а затем окрашивают по методу Циля-Нильсена (промыть мазок водой > нанести 5% р-р серной к-ты на 1-2 мин. для обесцвечивания > промыть водой > докрасить мазок водным р-ром метиленового синего в течении 3-5 минут > промыть водой, высушить). Спора окрашивается в красный цвет. | 2 Способы приготовления препаратов для изучения подвижности микробов. Косвенный метод выявления – подвижность бактерий определяют в живом состоянии, в темном поле зрения, в раздавленной или висячей капле. За подвижность отвечают жгутики. | 3 Принцип иммунолюминесцентного исследования материала.. Основан на соединении а/г со специфическими а/т, мечеными флюорохромными красителями. Он используется в качестве диагностического экспресс – метода при многих вирусных инфекциях. | |
| 10 Метод окраски препаратов ио Граму. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтр. бумаги и наливают р-р генцианвиолета на 1-2 мин->снимают бумажку, сливают краску и наливают р-р Люголя на 1 мин(мазок чернеет)->сливают Люголь и действуют спиртом в теч. ½-1 мин->промывают водой->доп. окрашивают фуксином на 1-2 мин(красный) | 13 Способы определения наличия у бактерий капсулы. 1. Окраска по Бурри-Гинсу, капсула не окрашивается. 2. Окраска по Граму – окрашивается слабо. 3. Феномен набухания капсулы под действием антител. 4. Иммунолюменисцентный метод. | 24 Способ получения и цель применения гемолитической сыворотки. Получают путем иммунизации кролика бараньими эритрацитами. Барану вводят а/г > берут у него кровь и иммунизируют кролика. Применяют в РСК. | |
| 14 Общая характеристика механизмов изменчивости вирусов. Интегративный тип взаимодействия (вирогения) характеризуется встраиванием нуклеиновой кислоты вируса в хромосому клетки. Идет изменение генома вируса, т.е. мутации. ДНК вируса, находящаяся в составе хромосомы клетки, называется ДНК-провирусом. При делении клетки, ДНК-провирус несет дополнительную генетическую информацию, в результате чего клетки приобретают ряд новых свойств. Так, встраивание может явиться причиной возникновения ряда аутоиммунных и хронических заболеваний, разнообразных опухолей. При внедрение ретровирусов в рибосомах образуются вирусные белки, сборка и почкование и вирус выходит захватив с собой компоненты клетки, в том числе компоненты клеточной мембраны, что подавляет иммунитет. Идет изменение генома вируса, т.е. мутации. Умеренные фаги (вирус) вступают в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком случае геномом фага называют профаг. Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом) называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, называется лизогенной. Изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага называется фаговой конверсии. Фаги учавствуют в рекомбинативной форме изменчивости – трансдукции. Трансдукция — передача ДНК от бактерии-донора к бактерии-реципиенту при участии бактериофага. Умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов (кульиуральные св-ва, биохимических, токсигеных, антигенных). В основе изменчивости вирусов лежат мутации. Присутствие нескольких типов вирусов в инфицированных клетках, т.е. смешанная инфекция, может приводить к множественной реактивации, рекомбинации, кросс-реактивация; могут и негенетические взаимодействия — комплементация. Множественная реактивация — процесс взаимодействия вирусов с поражением разных генов, в результате которого взаимодействующие вирионы дополняют друг друга благодаря генетической рекомбинации, образуя неповрежденный вирус. Рекомбинация — обмен генетическим материалом между вирусами — возможна в виде обмена генами (межгенная рекомбинация) или участками одного и того же гена (внутригенная рекомбинация). Негенетического взаимодействия вирусов может быть приведена комплементация: при смешанной инфекции стимулируется репродукция обоих участников взаимодействия или одного из них без изменения генотипов вирусов. Обмен генетическим материалом при этом не наблюдается. Если геном одного вируса заключен в капсид другого вируса, этот феномен называется фенотипическим смешиванием, наблюдаемым при смешанной инфекции. Действие вирусов на клетку может привести: 1- трансформация клетки в злокачественную; 2- пролиферация (бородавки) идёт просто размножение; 3- изменение функциональной активности клетки; 4- изменение АГ свойств (клетка становится аутоантигеном); 5- выход дефектного вируса (ню). | 1 Структура и принципы классификации бактериофагов. Бактериофаги (пожиратель) — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис). Морфология. Имеет двунитчатую ДНК с сокращаюмщимся отростком. Форма зависит от типа симметрии капсомера. Если кубический–то форма многогранника, если по спирали то форма палочковидная. Имеют форму головастика или сперматозоида, кубическую и нитевидную формы. Имеющие форму сперматозоида состоят из вытянутой икосаэдрической головки и хвостового отростка . Внутри хвостового отростка имеется полый цилиндрический стержень, сообщающийся отверстием с головкой, снаружи — чехол, способный к сокращению наподобие мышцы. Хвостовой отросток заканчивается шестиугольной базальной пластинкой с короткими шипами, от которых отходят нитевидные структуры — фибриллы. Химический состав . нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и белка. У фагов, имеющих форму сперматозоида, двунитчатая ДНК упакована в виде спирали внутри головки. Белки входят в состав оболочки (капсида), окружающей нуклеиновую кислоту, и во все структурные элементы хвостового отростка. Обнаружены внутренние (геномные) белки, связанные с нуклеиновой кислотой, и белки-ферменты (лизоцим, АТФ-аза), участвующие во взаимодействии фага с клеткой. Резистентность. Ряд дезинфицирующих веществ (фенол, этиловый спирт, эфир и хлороформ) не оказывают существенного влияния на фаги. Высокочувствительны к формалину и кислотам. Инактивация наступает при температуре 65—70 °С, сохраняются при высушивании в запаянных ампулах, замораживании при температуре —185 °С в глицерине. По механизму взаимодействия различают вирулентные и умеренные фаги. При попадании в бактерию по своему взаимодействию могут быть вирулентными ,т.е. попав в клетку идет репродукция вируса и лизис бактерии. Некоторые фаги попав в бактерию не репродуцируются в ней, не вызывая ее лизиса, а их ДНК включается в бактериальную хромосому это называется профаг. А сам фаг назыв. умеренным. А это явление ( биологический симбиоз микробной клетки с умеренным фогом (профагом) назыв. Лизогения, а культура бактерий , содержещий профаг, назыв. лизогенной. Лизогения это когда под действием внеш. факторов профаг выходит из интегрированного состояния и превращается в вирулентный ,т.е. идет репродукция фаговых частиц и лизис. Фаг включается в ДНК (нуклеотид) и может взять кусок ДНК и передать другому – фаговая конверсия ( мощный фактор изменчивости микроорганизмов). По специфичности действия различают поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий, моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида, и типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий. | 2 Механизм взаимодействия бактериофагов с клеткой. По механизму взаимодействия различают вирулентные и умеренные фаги. Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно репродуцируются в ней и вызывают лизис бактерий. Эти фаги адсорбируются на поверхности бактериальной клетки с помощью фибрилл хвостового отростка. В результате активации фагового фермента АТФазы происходит сокращение чехла хвостового отростка и внедрение стержня в клетку. В процессе “прокалывания” клеточной стенки бактерии принимает участие фермент лизоцим, находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага, содержащаяся в головке, проходит через полость хвостового стержня и активно впрыскивается в цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы фага (капсид и отросток) остаются вне клетки. После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной клетке накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового лизоцима и внутриклеточного осмотического давления происходит разрушение клеточной стенки, выход фагового потомства в окружающую среду и лизис бактерии. Один литический цикл (от момента адсорбции фагов до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин. По специфичности действия различают поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий, моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида, и типовые фаги, взаимодействующие с отдельными вариантами (типами) данного вида бактерий. Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они вступают в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому бактерии. В таком случае геномом фага называют профаг. Профаг, не вызывая ее лизиса, передается по наследству от клетки к клетке. Биологическое явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом (профагом) называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг, получила название лизогенной. Это отражает способ ность профага самопроизвольно или под действием ряда физических и химических факторов исключаться из хромосомы клетки и переходить в цитоплазму, т. е. вести себя как вирулентный фаг, лизирующий бактерии. Лизогенные культуры невосприимчивы к повторному заражению близкородственным фагом и приобретают дополнительные свойства, которые находятся под контролем генов профага. Изменение свойств микроорганизмов под влиянием профага получило название фаговой конверсии и касается различных их свойств: культуральных, биохимических, токсигенных, антигенных, чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из интегрированного состояния в вирулентную форму, умеренный фаг может захватить часть хромосомы клетки и при лизисе последней переносит эту часть хромосомы в другую клетку. Если микробная клетка станет лизогенной, она приобретает новые свойства. Таким образом, умеренные фаги являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов. | 12 Особенности репродукции РНК- и ДНК-вирусов. Репродуктивная стадия когда в клетке накапливаются или репродуцируются вирусные частицы, т.е. клетка сама воспроизводит вирусные частицы. Репродукция ДНК –х вирусов идет в ядре, а у РНК-овых идет в цитоплазме на рибосомах. ДНК вир.. Идет адсорбция вируса на мембране , проникновение (эндоцитоз)-виропексис, депротонизация капсида (разрушение мембраны) и получаем ДНК самой клетки и нуклеиновую кислоту вируса. Образуется РНКзависимая полимераза, которая направляется на рибосомы и образует ранние белки. Далее регуляторные и матричные (М) белки они нужны для прохода через мембрану клетки. Далее вирусная ДНК-полимераза, которая идет в ядро, где строительный материал где идет репликация ДНК. У вируса есть белковая оболочка. Клеточная полимераза идет в рибосомы и образуется капсидные белки. Далее идет сборка в цитоплазме из ДНК идут к видоизмененной мембране отптчковываются и забирают свойства нашей мембраны. Вирус прикрывает себя нашими АГ. У РНК-х вирусов зависит от РНК+ и РНК-. РНК+ выполняет функцию информационной, матричной, транспортной. Сначало адсорбция, виролексис (то же самое что ДНК), депротонизация высвобождается РНК+ , которые идут к рибосомам и образуется длинные полипептидные нити. Протеазы делают их короткими. А другое направление: на матрице + образуются “ – “ (минус) это репликативная форма становится двунитчатой + и “– “ и с “ –“ идет репликация на + ниточек. Короткие нити идут в рибосомы образуется РНК-полимераза идет синтез белковых структур. Идет сборка. Уходят через мембрану, испорченную М-белками. Ретровирусы (ВИЧ, онкогенные вир.) имеют фермент обратную транскриптазу. Она + . Обладают способностью встраиватся в хромосому клетки хозяина. РНК превращается в ДНК. Вирус попал в клетку путем слияния мембран, освобождается РНК+ (обратная транскриптаза), каторая на матрице РНК строит ДНК (минусовую). Клетка достраивает ДНК нормальную, которая направляется в ядро и клеточные ферменты разрезают и встраивают вирусную ДНК в хромосом клетки. Клеточные ферменты образуют РНК+ , матричную вир. РНК и в рибосомах идёт синтез белковых структур (М, структурные и не структурные белков, шипы). Выход почкованием и захват кл. мембраны (фрагменты). РНК”-“. Унего РНК фрагментарная. Поступает в кл. слиянием мембран. Выход РНК- , кот. ничего не умеет делать. Образуется РНК+ , кот. идет в рибосомы, образуются структурные и не структурные белки это 1-е направление. 2-е направление: с помощью клеточной полимеразы где учавствует клеточная РНК-полимераза из + будут строится “-“ нити. Сборка. Отпочкование. Возможны мутации: где образуются с “-“ на + и идет из хромосом образуются ДНК полимеразы. |
| 10 Вирус – существо или вещество? Это мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только один тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК). Они отличаются особым способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки и затем происходит их сборка в вирусные частицы. Вирусы, являясь облигатными внутриклеточными паразитами, размножаются в цитоплазме или ядре клетки, нет клеточной структуры, нет метаболизма, это закрытая система, оболочка не проницаема, нет роста, не чувствительны к антибиотикам(значит не живая), способны образовывать кристаллы (св-во не живой материи). Вирус является примитивным живым организмом. Потому что он размножается, т.е. воспроизводит потомство (воспроизводство клеткой той информации кот. заложена вирусной нуклеин. кл.), имеет обмен веществ кот. связан с обменом веществ зараженных клеток. Вирус обладает наследственностью,кот. свойственена всем живым организмам, кот. обусловлена нуклеиновыми кислотами. Вирус как живое существо обладает изменчивостью, мутациям, приспособляемостью, к меняющимся условиям окр. среды. Признаком живой системы является наличие генов регуляторов: ген+ активное воспроизведение, ген- (минус) гасит их, ген+ - ( плюс, минус)– вялотекущий процесс. Может существовать в 2-х формах: внеклеточная (покоющаяся) и внутриклеточная (размножающаяся). Внеклеточные вирионы (это вирусная частица) не обнаруживает никаких признаков жизни, попав в организм вирионы проникают в чувствительные к ним клетки и переходят из покоющихся в размножающуюся форму. | 17 Особенности взаимодействия ретровирусов с клеткой. Ретровирусы (ВИЧ, онкогенные вир.) имеют фермент обратную транскриптазу. Она + . Обладают способностью встраиватся в хромосому клетки хозяина. РНК превращается в ДНК. Вирус попал в клетку путем слияния мембран, попадают 2-е нити РНК. 2-е нити не нужны. Вирусная РНКаза разрушает одну нить, осталась одна. Вриус РНК зависимая ДНК полимераза на матрице РНК строит одну нить ДНК. ДНК-полимераза достраивает 2-ю нить, получаем нормальную 2-х нитчатую ДНК, которая отправляется в ядро. ДНК вируса встраивается –вирогения - идет латантная стадия, после чего репродуктивная стадия. Клеточная ДНК-зависимая РНК-полимераза начинает строить + нити РНК. В рибосомах образуются вирусные белки, сборка и почкование и вирус выходит захватив с собой компоненты клетки, в том числе компоненты клеточной мембраны, что подавляет иммунитет. Идет изменение генома вируса, т.е. мутации. Для встраивания с хромосомой клетки необходима кольцевая форма двунитчатой вирусной ДНК. ДНК вируса, находящаяся в составе хромосомы клетки, называется ДНК-провирусом. При делении клетки, сохраняющей свои нормальные функции, ДНК-провирус переходит в геном дочерних клеток, т.е. состояние вирогении наследуется. ДНК-провирус несет дополнительную генетическую информацию, в результате чего клетки приобретают ряд новых свойств. Так, встраивание может явиться причиной возникновения ряда аутоиммунных и хронических заболеваний, разнообразных опухолей. Под воздействием ряда физических и химических факторов ДНК-провирус может исключаться из клеточной хромосомы и переходить в автономное состояние, что ведет к репродукции вируса. |