ШПОРА Микробиология. Шпаргалка на экзамен. 24 Классификация антител. Принцип деления антител на классы

• Название: 24 Классификация антител. Принцип деления антител на классы
• Анкор: ШПОРА Микробиология. Шпаргалка на экзамен.rtf
• Дата: 04.02.2017
• Размер: 1.48 Mb.
• Имя файла: ШПОРА Микробиология. Шпаргалка на экзамен.rtf
• Тип: Документы; #2180
• Категория: Биология. Ветеринария. Сельское хозяйство
• страница: 4 из 11

18 Микробиологическая диагностика и профилактика гонореи. 11 Гонококк. Методы диагностики. Острая гонорея, ведущий метод – микроскопический. Из исследуемого материала делают два мазка, один окрашивают по Граму, другой – метиленовым синим. При наличии в мазке гонококков видны грам диплококки, расположенные внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз). При хронической гонорее гонококки нах вне клеток, и имеют атипичную форму в виде шаров или мелких образований. Поэтому для диагностики хронической гонореи применяют серологический метод (РСК, РПГА), бактериологический метод. Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром и др. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением казеина, дрожжевого экстракта и сыворот­ки крови. Посевы инкубируют при 37 "С в атмосфере с повы­шенным содержанием СО2 (не менее 3 %) в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрачные колонии, напоми­нающие капли росы. Подозрительные ко­лонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах "пестрого" ряда (полужид­кий агар с сывороткой и углеводом) или с помощью микро­тест-систем. Гонококки ферментируют только глюкозу с обра­зованием кислоты. Серологический диагноз ставят с помощью РСК. Реакция ставится для обнаружения антител в сыворотке крови больного, с помощью известного антигена, которое представляет собой взвесь убитых гонококков.Учет результата реакции начинают с контрольных пробирок. При наличии гемолиза в контрольных пробирках, о результатах опыта судят по опытной пробирке.

20 Специфическая профилактика и терапия столбняка. Профилактика столбняка складывается из плановой и экстренной. 1 Плановая профилактика – всех детей с 3-х месячного возраста вакцинируют вакцинами: АДС, АКДС, Тетровак в состав которых входит столбнячный анатоксин (обезвреженный экзатоксин) – это активная профилактика (создается иммунологическая память). АДС – адсорбированный дифтерийный и столбнячный анатоксин. АКДС – адсорбированная коклюшно – дифтерийная столбнячная сыворотка (убитые коклюшные палочки – против коклюша – аллергический компанент). Тетровак – убитые коклюшные палочки, дифтерийно - столбнячные анатоксины, вакцина против полиомиелита (убитая). Пентовак – добовляют вирус краснухи. Ревакцинация по каллендарному плану. 2 Экстренная профилактика – при травмах, ожогах, отморажениях. Она складывается: а) Активная профилактика – введение столбнячного адсорбированного анатоксина. б) Пассивная профилактика – введение ПСС (противостолбнячная адсорбированная сыворотка) которая вводится дробно по Безредко в целях профилактики анафилактического шока. Диагностика. При стертой клинически не выраженной форме столбняка столбнячный анатоксин можно обнаружить в крови пациента с помощью биологического метода. Опытную мышь заражают смесью матерьяла + антитоксическая сыворотка. Контрольную мышь заражаем только исследуемым материалом (экзотаксин). Заражение проводят вблизи хвоста. Через 12-24 часа у контрольной мышки наблюдается сокращение околохвостовой мышцы и хвост торчит – начинается восходящий столбняк. У опытной мышки симптомов не наблюдается, за счет нейтрализации экзотоксина. Терапия: для лечения применяют противостолбнячную антитоксическую чыворотку или противостолбнячный иммуноглобулин человека.

18 Основные отличия вирусных болезней от бактериальных. 1) бактерии выделяют токсины и ферменты. А вирус ничего не выделяет , он разрушает наши клетки и интоксикация нашими клетками. 2) имеет место вирусомия (вирус в крови), а при бактер. инф. редко ( брюшной тиф). 3) при воздействии вир. наши клетки могут стать аутоантигенами, а при бак. редко (ревматизм). 4) при вир. – подавление иммунитета- осложнение резидентами, т.е. апортунистические. Пример: корь, стоматиты, отиты, гломелуронефриты. 5) лечение. При вир. антибиотики не помагают. Препараты: ИФ, ремонтадин, который не даёт вирусу раздеться, т.е. депротонизация.

15 Отличия живой системы от неживой. Определение и формула жизни. Жизнь, одна из форм существования материи,закономерно возникающая при определённых условиях в процессе её развития.Организмы отличаются от неживых объектов обменов веществ, раздражимостью,способностью к размножению, росту, развитию, активной регуляцией своего состава ифункций, к разл.формам движения, приспособляемостью к среде и т.п.ДНК-ДНК-РНК-белок-функция=жизнь.Этап ДНК-ДНК отвечает за воспроизводство, т.е. размножение = генотипическая изменчивость. Этап РНК-белок-функция=реализация генетической информации в замкнутой системе,рост и проявление своих свойств =фенотипическая изменчивость: модификация, диссоциация, регуляторная изменчивость.

10 Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика Холеры. Из материала (рвотные массы, фекалии, вода) делают экспресс-диагностику: 1 – ПЦР (наход чужеродную ДНК). 2 – РИФ (обраб материал О1 люминисцентной сывороткой). Из этого же материала – бактериологический метод: РИС. Идентификация: 1 – Подвижность в темном поле зрения. 2 – Биохимическая активность. 3 – О1-агглютинация и определение сероваров. 4 – Определение биоваров – чувствительны к бактериофагам и к полимексину, способны склеивать куриные эритроциты. При отсутствии агглютинации можно разрушить капсулу из муцина нагреванием или использовать биологический метод (Исаева-Пфейффера) – выявление бактериолизинов. В брюшную полость морским свинкам вводят неизвестную бактериальную культуру. Одной свинке туда же вводят сыворотку. Затем из брюшной полости берут экссудат и в течении 1-2 часов смотрят в темном поле зрения. Сначала вибрион теряет подвижность, затем лизируются, т.к у свинки много комплемента – идет реакция бактериолиза. Специфическая профилактика: 1 – Убитая вакцина Огава и Инаба. 2 – Живая авирулентная вакцина. 3 – Холероген анатоксин.

17 Морфологические культуральные и биохимические свойства гонококков. Факторы вирулентности. Вызывает гонорею и бленорею (поражение эпителия роговицы). Морфологич хар-ка: Гр , бобовидной диплококк, окружены микрокапсулой, жгутиков не имеют, спор не образуют. Для гонококков хар-но наличие пили. Культуральные св-ва: требователен к культивированию. Он аэроб и требует наличие человеческого белка (чел сыворотка, асцитическая жидкость), лучше растут при содержании 5-10% СО₂, из углеводов ферментируют только глюкозу. Антигенные св-ва: неоднородные, антигенная структура гонококков изменчива. Факторы вирулентности: капсула, пили, s-IgA-протеаза, гиалуронидаза, эндотоксин, в кл стенки имеется белок I и II с которым связывают явление незавершенного фагоцитоза. Источник – больной с острой хронической формой. Путь передачи – половой. Иммунитет – антимикробный, типоспецифический, не стойкий. Профилактика – всем новорожденным закапывают в глаза 1% азотнокислое серебро или сульфацил натрия. Взвесь убитых гонококков используют для вакцинотерапии хронической гонореи.

23 Морфологические, культуральные и биохимические свойства возбудителя Газовой гангрены. Факторы вирулентности. Возбудителями газовой гангрены являются Clostridium perfringens, Cl novyi, Cl septicum, Cl histolyticum. Морфологические свойства: Cl perfringens – Гр+ палочка, образует капсулу, жгутиков нет, образует субтерминальные споры. Cl novyi – Гр+ палочки, капсулы не образует, есть жгутики, образует терминальные или субтерминальные споры. Cl septicum и Cl histolyticum – Гр+ палочка, капсулы не образует, есть жгутики, образует субтерминальные споры. Культуральные свойства: все 4 возбудителя культивируются на жидких и плотных питательных средах в анаэробных условиях. Cl perfringens образует круглые плоские колонии, Cl novyi – пушистый комок с уплотнением в центре, Cl septicum – колючки, Cl histolyticum – плотные зернышки. Биохимические свойства: Cl perfringens расщепляет гликоген с образованием СО₂, Cl histolyticum имеет протеолитические ферменты. Факторы вирулентности: Все 4 возбудителя имеют -токсин, который обладает летальным, гемолитическим, некротическим свойствами.

26 Микробиологическая диагностика бруцеллеза. Острая стадия – (бак. метод) длится до 40 дней. Исследуемый матерьял: кровь, моча. Исследуемый матерьял > печеночный бульон > каждые 7 дней высевают на печеночный агар > ЧК > идентификация: 1приготовлен мазок. 2чувствительность к анилиновым красителям. 3биохимическая активность – выделение сероводорода (suis). 4р-ция агглютинации. Серологический метод становится положительным начиная с 10-15 дняболезни. Титр а/т уменьшается в процессе выздоровления. Ставят р-цию агглютинации Райта Хеддельсона на стекле. Реакция Райта ставится при разведении сыворотки 1:100 – 1:800, диагностикумом Райта (смесь убитых 3-х видов бруцел). Реакция Райта положительна 1:800, человек болен бруцеллезом. При массовом обследование людей на заболевание ставим реакцию Хеддельсона с неразведенной сывороткой в разных объемах. Для того, чтобы реакция была видимой, диагностикум подкрашивают. При положительной пробе Хеддельсона, ставят реакцию Райта.

19 Морфологические, культуральные и биохимические свойства возбудителя Столбняка. Факторы вирулентности. Возбудитель столбняка – Clostridium tetani. Морфологические свойства: Гр+ палочка, перитрих, образует терминально расположенную круглую спору. Культуральные свойства: строгий анаэроб. При выращивании на жидких питательных средах продуцирует сильный экзотоксин. На плотных питательных средах формирует прозрачные или слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью. Биохимические свойства: обладает слабыми протеолитическими свойствами, углеводов не расщепляет. Антигенная структура: по Н-антигену (жгутиковый) Сl. Tetani делят на 10 сероваров. О-антиген – общий для всего вида. Факторы вирулентности: основной фактор вирулентности – экзотоксин, состоящий из тетанолизина (вызывает гемолиз) и тетаноспазмина (поражает нервную систему).

21 Морфологические, культуральные и биохимические свойства возбудителя Ботулизма. Факторы вирулентности. Возбудитель – Clostridium botulinum. Морфологические свойства: Гр+ палочки, образуют субтерминально расположенные споры и имеют вид теннисной ракетки. Перитрихи, капсулы не образуют. Культуральные свйства: строгий анаэроб. Растет при температуре 25-35 при рН 7,2-7,4. На кровяном агаре образует небольшие прозрачные колонии, окруженные зоной гемолиза. В столбике сахарного агара колонии имеют вид пушинок или зерен чечевицы. Очень устойчива – выдерживает кипячение до 20 часов. Биохимические свойства: большой набор сахаролитических и протеолитических ферментов. Антигенные свойства: для идентификации важен экзотоксин; различают 7 сероваров возбудителя ботулизма (A,B,C,D,E,F,G), наиболее распространены A,B,Е. Факторы вирулентности: Экзотоксин, обладающий нейротоксическим и гемагглютинирующим действием.

24 Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и терапия Газовой гангрены. Диагноз газовой гангрены ставят на основании клиники. Ускоренная диагностика газовой гангрены: раневое отделяемое засевают на среды Китта-Тароцци, молоко и среду Вальсен-Блера. При наличии Clostridium perfringens через 6 часов молоко створаживается и сгусток разрывается. Среда Вальсен-Блера чернеет и разрывается из-за образования СО₂. На среде Китта-Тароцци наблюдается помутнение и в

мазке определяют Гр+ палочки, расположенных попарно. Профилактика: правильная хирургическая обработка ран, соблюдение асептики и антисептики при операциях. Для активной иммунизации применяют анатоксины против газовой гангрены в составе секстанатоксина. Прививки проводят по специальным показаниям (военнослужащие). Терапия: антитоксическая сыворотка, которой обкалывают рану при являются Clostridium perfringens, Cl novyi и Cl septicum..

25 Морфологические культуральные и биохимические свойства возбудителей бру­целлеза . Факторы вирулентности. Вовбудителями являются: 1 Brucella melitensis (источник мелкий рогатый скот). 2 B. bovis (крупный рогатый скот). 3 B. suis (источник свиньи). Морфологические свойства – это грам-, овоидные палочки. B. bovis микроаэрофил (требует наличия 10% СО2). Спор и капсул необразует и не имеет жгитиков. Больной чел для окружающих не заразен. Культуральные свойства: требовательна, растет на печеночных и сывороточных средах (долго). Биохимические св-ва. Не образуют протеолитических ферментов, обладают слабой сахаролитической способностью. Вызывают гидролиз аминокислот, белков с образованием аммиака и сероводорода. Факторы вирулентости: факторы инвазивности, незавершенный фагоцитоз, гиалуронидаза, эндотоксин.

15 Способы стерил-и в м/б. I. Физ. методы. Возд-е высоких t*. Высокая t* обладает микробицидным д-ем благодаря способности вызывать денатурацию Б. Стерил. сухим жаром в сушилъно-стерил. шкафу (пени Пастера) основана на бактерицидном д-вии нагретого до 165—170 °С воздуха в течение 45 мин. Сухим жаром стерил. стекл. посуду (чашки Петри, пробирки, пи­петки и др.). Автоклавирование — стерил. перегретым водяным паром (при повыш. давлении) в паровом стерилизаторе (автоклаве). Многие пит. среды, перевязочный матери­ал, белье стерил. при давл. 1 атм в течение 15—20 мин, пит. среды с У — при 0,5 атм в течение 15 мин, а обеззараживание инфицир. материала про­изводят при 1,5—2 атм в течение 20—25 мин. Стерил. текучим паром осуществ. в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Данный способ стерил. основан на а/б действии пара в отношении вегет. клеток. Он приме­няется в тех случаях, когда стерилизуемый материал не выдер­живает высокой t*, напр. пит. среды с витаминами, У. Тиндализация — это дробная стерил. материалов при 56—58 °С в течение 1 ч 5—6 дней подряд. Применяется для стерил. легко разрушающихся при высокой t* в-в (сыворотка крови, витамины и др.). Прокаливание в пламени спиртовки применяют ограниченно, напр. для стерил. бактериол. петель, игл, пинцетов. Возд-е ионизирующих излучений. Микробицидное д-е ионизирующих излучений основано на их способности вызывать повреждения в молекуле ДНК. Для сте­рил. одноразовых мед. Инстр. и бактери­ол. оборудования, обычно применяют стерил. гамма-излучением. II. Механич. методы. Основаны на фильтровании через спец. мембранные фильтры с малым размером пор, способные механически задерживать м/о. В лаб.практике широко применяют бумажные и полимер­ные фильтры. Фильтрование ис­пользуют для стерил. жидких материалов, не выдержива­ющих нагревания (сыворотка крови, растворы антимикробных препаратов, компоненты пит. сред для бактерий и культур клеток), для получения бактериальных токсинов и других продуктов жизнедеятельности бактерий. III. Химические методы. Основаны на обработке объекта хим.веществами и способными обеспечить полное уничтожение микрофлоры. Хи­м. стерил. обычно применяют для обработки различных приборов и инстр. многоразового использо­вания, чувствительных к высоким t* (фиброоптические приборы, мед. имплантаты и др.).

30 Полимеразоцепная реакция (ПЦР), ИФА. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - основанна на принципе многократного копирования (амплификации) определенного участка ДНК или РНК. ПЦР позволяет выявить малые фрагменты ДНК, характерные для определенного вида микробов, и точно идентифицировать этот вид. Постановка ПЦР включает следующие этапы: 1. Выделение ДНК (РНК) из исследуемого материала. Для этого клетки необходимо лизировать с помощью высокой температуры. Затем отделить ДНК от клеточных обломков и разрушить клеточные нуклеазы. 2. Копирование выделенных участков (копий) нуклеиновых к-от 1. В результате нагревания до 94 -95°С двойная цепь ДНК разделяется на две отдельные цепи. 2. К одноцепочечной ДНК присоединяется праймер. Праймер - это последовательность из 15 - 30 нуклеотидов, комплементарная маркерному фрагменту ДНК (т. е., тому фрагменту, который есть только у определяемого возбудителя заболевания). З.Синтез (элонгация) -достраивание второй цепи ДНК. ДНК-полимераза присоединяет нуклеотиды к праймерам, достраивая двухцепочечные фрагменты ДНК ( при 72°С). Вновь синтезированные фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых цепей в следующем цикле амплификации - это и есть цепная реакция в ПЦР. 3. Определение (детекция) продуктов ПЦР чаще всего проводят при помощи электрофореза. В ре­зультате видна оранжевая полоска на уровне контрольной ДНК. Иммуноферментный анализ (ИФА) — основан на использовании

двух разных по специфич­ности моноклональных антител против двух разных антиген­ных эпитопов в составе искомого антигена. В лунки с иммо­билизованными антителами против одного эпитопа добавляют материал, в котором ищут антиген. В процессе инкубации на твердой фазе образуется комплекс антиген—антитело. Затем лунки отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом антитела против другого эпитопа того же антигена. После повторной инкубации и отмывания от избыт­ка конъюгата антител с ферментом определяют количество свя­завшихся антител по их ферментативной активности в присутст­вии субстрата с индикатором. На стадии выявления иммунного комплекса антиген оказы­вается как бы зажатым между молекулами иммобилизированных и меченых антител, что послужило поводом для широко рас­пространенного в литературе названия "сэндвич"-метод.

5 Способы культивирования вирусов. Методы культивирования вирусов. Для культивирования ви­русов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чув­ствительных лабораторных животных. Культуры клеток. Представляют собой соматические или эмбриональные клетки животных или человека, культиви­руемые в лабораторных условиях. В культурах клеток удается культивировать большинство вирусов, вызывающих заболевания человека.Внутриклеточные паразиты оказывают цитопатическое дей­ствие (ЦПД) на клетки, в которых происходит их репродукция. ЦПД может проявляться деструкцией (лизисом) зараженных клеток, изменением их морфологии (изменением размеров и формы самой клетки, клеточного ядра, появлением вакуолей или включений) и нарушением их функций. Куриные эмбрионы. Пригодны для культивирования хламидии, риккетсии и некоторых вирусов, патогенных для человека. Для получения чистых культур риккетсии, хламидии и ряда вирусов в диагностических целях исполь­зуют 8—12-дневные куриные эмбрионы. К недостаткам данно­го метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона. Для заражения куриных эмбрионов исследуемый материал вводят в аллантоисную и амниотическую полости в желточный мешок куриного эмбриона. Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных, их возраст определяют репродуктивную способ­ность вирусов. Преимущество метода культивирования вирусов в ор­ганизме лабораторных животных перед другими состоит в воз­можности выделения тех вирусов, которые плохо репродуци­руются в культуре клеток или эмбрионе. К его недостаткам относятся высокая вероятность контаминации организма по­допытных животных посторонними вирусами.