Бактериальной клетки. Основные морфологические формы бактерий и методы их изучения. Принципы классификации бактерий по Берджи
 Скачать 3.01 Mb.
|
|
суперкапсид. Антигены. ВГВимеет сложное антигенное строение. В состав вириона входят четыреантигена: - HBsAg – поверхностныйантиген ; -двасердцевинныхантигена:HBcAg(core)антигени HBeAg (антиген инфекционности); -HBx Ag – считается,что он связан с развитием первичной гапатоцеллюлярнойкарциномы. HBsAg - это протективный антиген – гликопротеин. Он содержит S, M , L белки, все они входят в состав суперкапсида вириона. HBsAg содержит группоспецифическую антигенную детерминанту (а) и две пары типоспецифических детерминант (d\y, w \r ), их комбинации дают 8 основных подтипов вируса гепатита В. Детерминанта (а) обеспечивает перекрестное формирование иммунитета ко всем подтипам вируса. Подтипы вируса гепатита В важны как эпидемиологические маркеры при изучении распространенности вируса. S - белок ( средний) ответственен за адсорбцию вируса на рецепторах гепатоцитов. М – белок (большой) играет роль в морфогенезе вируса и в выходе вируса из клетки. Резистентность . ВгВ обладает значительной устойчивостью к температуре. При комнатной температуре он сохраняет жизнеспособность в течение трех месяцев, в замороженном состоянии годами. Сохраняет свои инфекционные свойства после повторного замораживания и оттаивания. Его инфекционность полностью утрачивается при автоклавировании при 120 0 С в течение 45мин. Эпидемиология . Гепатит В – антропонозное заболевание. Восприимчивость людей высокая. Источником инфекции являются больные любыми формами гепатита В и вирусоносители. Вирус обнаруживается в различных секретах организма: в сыворотке крови, слюне, сперме, менструальной крови, вагинальном секрете, слезной жидкости, поте, моче, ликворе. Основной механизм передачи вируса – кровно-контактный. Вирус может передаваться естественными путями – половым или от матери ребенку (во время беременности, при родах и через грудное молоко). Возможна горизонтальная передача при пользовании общими предметами обихода. Парентеральный путь передачи осуществляется при переливании крови, при использовании медицинских инструментов контаминированных вирусами. Вирусы передаются при внутривенном введении наркотиков. Таким образом, к группам риска по заражению парентеральным гепатитом В относятся : гомосексуалисты, проститутки, наркоманы, доноры, дети, рождающиеся от матерей-носителей ВГВ. Патогенез. Парентеральный механизм заражения обеспечивает его попадание в кровяное русло, вирусемию и далее гематогенный занос в печень. Течение гепатита В и его исход зависит от вида взаимодействия вируса с гепатоцитом ( продуктивный или интегральный тип взаимодействия). При продуктивном типе взаимодействия развивается острая фаза гепатита, имеющая циклическое течение: - инкубационный период ( 1 – 6месяцев); - продромальный (безжелтушный ) период от 1 - 5 дней до 1месяца; - разгар заболевания (желтушный период) – 1 – 4 недели; - реконвалесценция от 2 до 12месяцев. - Вирус после инфицирования попадает в кровь и сразу заносится в печень. Происходит проникновение вируса в гепатоциты и последующей репродукцией. Сам вирус не вызывает гибель пораженных клеток (не обладает прямым цитопатическим действием). Он выходит из инфицированных гепатоцитов. Против вируса и его антигенов в крови накапливаются специфические антитела. Заболевание может приобретать хроническое течение и осложняться циррозом печени. При интегративной форме взаимодействия ВГВ с гапатоцитами инфекция проявляется в виде здорового вирусоносительства. Инфицированные клетки продуцируют в большом количестве HBsAg , в тоже время репродукция вирусов не наблюдается. Клинические формы гепатита В подразделяются по типу, течению и тяжести заболевания. По типу инфекции различают субклиническую, стертую, безжелтушную и желтушную формы. У лиц, инфицированных ВГВ , может развиваться гепатит D, осложняющий течение основного заболевания (микст гепатит В+D ). Гепатит D вызывается дельта – агентом, имеющим РНК в качестве генетического материала. Этот агент способен размножаться и поражать печень только в присутствии ВГВ, выполняющего роль помощника. Дельта-агент является сателлитом ВГВ, он использует HBsAg ВГВ для построения собственной внешней оболочки. На пораженные гепатоциты он оказывает прямое цитопатическое действие. Гепатит D – антропонозное заболевание, возбудитель передается только парентерально. Группы риска – люди, получающие повторное переливание крови, наркоманы, гомосексуалисты. При коинфицировании (одновременное заражение ВГВ и ВГД) чаще всего развивается острый гепатит. При суперинфицировании (наслоение гепатита Д на гепатит В ) развиваются среднетяжелые и тяжелые формы, переходящие в хронический гепатит. После перенесенного гепатита В формируется стойкий специфический иммунитет гуморального и клеточногохарактера). Лабораторная диагностика: 1. Серологическая диагностика. Основой серодиагностики является знание о динамике появления и исчезновения основных маркеров ВГБ. HBsAg является основным маркером заболевания, он появляется в крови в инкубационном периоде, постоянно обнаруживается в безжелтушном и желтушном периодах. К концу первого месяца желтушного периода при остром течении болезни он исчезает из сыворотки крови и при последующей сероконверсии это указывает на выздоровление. В то же время длительное присутствие его после заболевания указывает на развитие хронического гепатита или свидетельствует о бессимптомномвирусоносительстве. Антитела к HВsAg начинают циркулировать через 3 – 4 месяца после исчезновения из крови HBsAg. Они указывают на выздоровление после острого гепатита и сохраняются всюжизнь. HBeAg появляется после HBsAg , максимальная концентрация определяется в конце инкубационного периода и в преджелтушном периоде. С появлением желтухи его количество резко уменьшается и через 2-3 недели отначала заболевания от исчезает. Присутствие HBeAg указывает на активную репродукцию вируса и, следовательно, на высокую инфекционность крови. Если антиген длительно циркулирует в крови, это указывает на формирование затяжной или хронической формыгепатита. Антитела к HBeAg после исчезновения из крови соответствующего антигена и указывают на доброкачественное течение заболевания. HBсAg находится в только в ядрах инфицированных гепатоцитов Антитела к HBсAg циркулируют в крови в преджелтушном периоде и в периоде реконвалесценции. При уменьшении активности репродукции вируса снижается титр антител, их полное исчезновение указывает на клиническое выздоровление. Антитела к HBcAg Ig выявляются как при остром , так и при хроническом гепатите, сохраняются в течение всей болезни и указывают на раннее перенесенный гепатит В (ретроспективная диагностика). 2. Для диагностики используют молекулярно- генетический метод. Специфическая профилактика. 1.Применяют рекомбинантные вакцины, содержащие HBsAg ВГВ : «Комбиотех В», «Энджерикс В», «Эувакс В», «Эбер-биовак НВ». Все вакцины взаимозаменяемые, слабореактогенны. Их трехкратное введение создает у привитых продолжительный и эффективный иммунитет. В рамках национального календаря профилактических прививок используют вакцины: «Бубо-Кок (гепатит В + АКДС) и « Бубо М (гепатит В + АДС-м). Для специфической пассивной профилактики используются препараты иммуноглобулинов с высоким титром антител к HBsAg. Лечение больных острыми и хроническими формами гепатита В применяют этиотропные препараты : - препаратыинтерферона; - аналоги нуклеозидов,иммуномодуляторы. Гепатит С Гепатит С – антропонозная вирсная инфекция, поражающая печень и передающаяся парентеральным, реже половым путем. Вирус гепатита С (ВГС, HCV ) включен в семейство Flaviviridae , родуHepacivirus. Строение вириона . Вирион имеет сферическую форму, его диаметр около 50 нм. Вирион покрыт суперкапсидом, содержащим поверхностные гликопротеины Е1 и Е2, которые отвечают за прикрепление к чувствительной клетке и проникновение в нее. Под суперкапсидной оболочкой расположен капсид икосаэдрической формы , в состав которого входит капсидный белок С. Внутри капсида находится геном вируса – линейная однонитевая плюс РНК, кодирующая 11 белков; - 4 структурных (Е1, Е2, белок С и небольшой интегральный белок Р7 с функцией ионногоканала). -7 неструктурных обладающих ферментативными свойствами. Среди них 6 белков, обозначаемых NS, которые обеспечивают репродукцию вируса; в том числе 2 вирусные протеазs NS2 , NS3 и РНК - полимераза(NS5). F – белок (7 белок) отвечает за считывание генома. Антигены. Различают несколько антигенов, связанных с белками ВГС : - сердцевинный антиген, - гликопротеиновые поверхностные антигены - антигены неструктурных белков. Резистентность. Вирус не слишком устойчив во внешней среде. В инфицированной сыворотке крови он сохраняет жизнеспособность несколько лет. Эпидемиология. Вирусныйгепатит С является одним из самых распространенных инфекционных заболеваний. Источником инфекции являются люди с бессимптомной, манифестной и хронической формой инфекции. У них ВГС обнаруживается в крови, сперме, секрете шейки матки. Основной механизм передачи - парентеральный. Реже половой, вертикальный, совсем редко бытовой. Такие же как при гепатите В. Отличия в том, что для инфицирования ВГС требуется большая доза вируса. К группе риска относятся прежде всего шприцевые наркоманы и лица, которым переливают кровь. Инфицирование ВГС иногда происходит в результате трансплантации органов, после процедур гемодиализа и других медицинских процедур. Половой путь передачи имеет меньшее значение и составляет до 10 % инфицированных. Патогенез. ВГС непосредственно попадает в ток крови, оттуда заносится в печень, инфицирует гепатоциты, оказывая цитотоксическое действие. Вирусный белок С, проникнув в ядро клетки, нарушает процессы транскрипции. Некоторые вирусные белки, воздействуя на митохондрии, лишают инфицированную клетку способности к апоптозу, что способствует длительному пребыванию вирусов в организме. Существенное значение в патогенезе гепатита С имеют аутоиммунные процессы. Клинические формы гепатита. Попавший в организм вирус может вызвать острую манифестную или бессимптомнуюформу инфекции. Хронический гепатит С может длится 10-20 лет, но бывают и скоротечные формы. После перенесенного заболевания формируется непрочный, неэффективный иммунитет невысокий по уровню. Лабораторная диагностика . Применяют серологический метод и полимеразную цепную реакцию. Вирусологическое исследование не проводят, так как вирус не культивируется в культуреткани. Серологическая диагностика основана на обнаружении специфических антител в исследуемой сыворотке методом ИФА. Первоначально проводят скрининговое исследование для определения уровня общих антител – анти НСV – total. Используют тест – систему ИФА третьего поколения, в которой в качестве антигена применяют синтетические пептиды. Это ориентировочная реакция и она позволяет установить факт инфицирования. Следующим этапом исследования является определение наличия специфических антител класса Ig V, методом ИФА. Их обнаружение указывает на острую фазу инфекции или обострение хронической формы гепатитаС. В сомнительных случаях в качестве подтверждающего теста применяют иммуноблотинг. Возможно использование ПЦР, которая позволяет обнаружить РНК возбудителя. Количественная ПЦР дает возможность оценить активность инфекционного процесса. Профилактика. Специфическая профилактика отсутствует. Лечение симптоматическое ипатогенетическое. Вопрос 88. ВИЧ – инфекция. Характеристика возбудителя. Микробиологическая диагностика. I. ВИЧ относится к семейству Retroviridae, роду Lentivirus. Это РНК-вирус с уникальным типом репродукции. Сердцевина содержит одноцепочечную РНК. Вирион обычно содержит 2 одинаковые молекулы РНК. В РНК с функциональной точки зрения выделяют две группы генов. Первая группа - кодирует образование всех основных белков. Вторая группа - регуляторные гены (трансактиваторы). К первой группе относятся гены gag, pol, ent и minigene. - Gag (group specific antigen) кодирует синтез структурных белков сердцевины вируса. Это р6, р7, р24. р6 и р7 стабилизируют РНК. р24 – белок капсиднойоболочки. - Pol (polymerase) направляет синтез трех ферментов, необходимых для размножения вируса – обратной транскриптазы (ревертазы), интегразы и протеазы. - Ent (envelope) кодирует синтез оболочечных белков - gp41 и gp120.2 Продукты регуляторных генов не входят в состав вириона, а управляют синтезом «вирусных» белков внутри инфицированных клеток. Действуя раздельно или вместе, они определяют активацию или латенцию. Размеры вириона средние (100-120 нм). Тип симметрии спиральный. Вирион имеет суперкапсидную оболочку, в состав которой входит белок gp120, ковалентно связанный с двумя гликопротеинами gp41 – это основные протективные антигены вируса; gp120 – это прикрепительный белок, обеспечивает проникновение вируса в клетку; gp41 – белок слияния. ВИЧ не размножается в культуре обычных клеток, а только в культуре лимфоцитов. ВИЧ инфицирует те клетки, которые имеют на поверхности определенные СD4-рецепторы и хемокиновые рецепторы CCR5 и CXCR4. Одной из главных мишеней ВИЧ являются мононуклеарные лимфоциты – СD4 Т- хелперы, кроме них СD4 рецепторы имеют макрофаги и клетки ЦНС. В цитоплазме пораженных клеток осуществляется первый этап жизненного цикла. 1. Обратная транскрипция, т.е. синтез двухцепочечной ДНК на матрице РНК при участии фермента ревертазы –RT. 2. Образующаяся провирусная ДНК проникает в ядро клетки, где с помощью фермента интегразы встраивается в состав одной из хромосом клетки хозяина. 3. Следующий этап жизненного цикла происходит в ядре клетки: под действием ферментов клетки синтезируется РНК на матрицепровирусной ДНК ВИЧ. Перемещаясь в цитоплазму часть молекулы РНК выступает в качестве матрицы для синтеза вирусных белков. В состоянии латентного провируса ВИЧ может находиться до 10-15 лет без проявления клинических симптомов заболевания. Лиц, содержащих ВИЧ в латентном состоянии, называют ВИЧ-инфицированными. Активация провируса приводит к репликации вируса и развитию клинических проявлений инфекции. В одной инфицированной клетке может образовываться несколько сотен новых вирионов. ВИЧ – антропоноз. У больных ВИЧ обнаруживается в крови, сперме, во влагалищной слизи. Пути передачи – половой, парентеральный. Основные проявления ВИЧ-инфекции и СПИДа связаны с развитием оппортунистических заболеваний, к которым относятся инфекции (пневмоцистная пневмония, токсоплазмоз, гепатиты В и С и др.), опухоли (саркома Капоши, злокачественная лимфома), неврологические нарушения. 3 Процесс формирования иммунодефицита в ходе ВИЧ-инфекции носит весьма сложный характер и определяется не только механизмами ослабления иммунных реакций, но и главным образом нарушением связей между отдельными звеньями иммунной системы, что в конечном счете приводит к ее полной несостоятельности в отношении защиты от инфекций. Вопрос о механизмах ВИЧ-индуцированного иммунодефицита – один из центральных в науке оВИЧ-инфекции. Диагностика 1. Серодиагностика –ИФА. 2. Иммуноблотинг. 3. ПЦР. Одно из важнейших достижений в диагностике (и лечении) ВИЧ-инфекции последних лет – разработка количественных тестов для определения содержания вирусных частиц в плазме крови (ПЦР) – содержание РНК в 1 мл плазмы называется вирусной нагрузкой и составляет от нескольких единиц до 107 копий РНК иболее. Лечение Одна из основных проблем фармакотерапии ВИЧ-инфекции заключается в том, что на данном этапе развития науки не существует даже предположительного способа полной элиминации ВИЧ из инфицированных клеток. Все известные способы лечения позволяют лишь ограничить размножение вируса и тем или иным путем компенсировать иммунодефицит. Высокоактивная антиретровирусная терапия (ВААРВТ) – комбинированная терапия тремя или более различными препаратами, подавляющими активность ВИЧ. Ее целью является полное подавление репликации ВИЧ. Препараты антиретровирусной терапии: I. Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы –НИОТ(тимидин). II. Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы –ННИОТ. III. Ингибиторы протеазы – ИП (ритонавир,нельфинавир). IV. Ингибиторы слияния вирусной и клеточноймембран. Ралтегравир (исинтресс) – первый ингибитор интегразы Вопрос 89. Химиотерапия вирусных инфекций. Химиотерапия вирусных инфекций — это особая проблема. Успехи в поиске эффективных противовирусных терапевтических препаратов пока не столь значительны как в области противомикробных средств. Трудность заключается в создании препаратов, избирательно подавляющих репродукцию вируса и не затрагивающих процессы жизнедеятельности клеток и всего организма в целом. Большинство ингибиторов вирусспецифических процессов, тесно связанных с метаболизмом, энергетическим обменом и ферментативными реакциями в клетке, практически всегда оказывают токсическое воздействие и на нее. Именно это считают главным объяснением того, что до сих пор не найден «волшебный препарат» против всех вирусов. Как правило, имеющиеся в терапевтической практике препараты обладают довольно низкой эффективностью, и то в случае применения на ранней стадии болезни. Они имеют узкий спектр действия (в лучшем случае, в пределах одного семейства) и к ним быстро формируется резистентность у патогенных вирусов. Тем не менее это направление интенсивно развивается, хотя каждый новый препарат появляется не скоро. Поиск антивирусных препаратов идет по двум направлениям: направленный поиск и скрининг. В первом случае предпринимаются попытки использовать известные свойства химических соединений для целенаправленного воздействия на тот или иной этап репродукции вируса, т. е. изучение идет от предполагаемого механизма действия к препарату. Второй путь опирается на испытанный веками «метод тыка» — скрининг (отбор, просеивание), предполагая вылавливание активных препаратов среди широкого спектра химических соединений различного класса. Скрининг призван научно использовать случай. Поиск идет от препарата, а механизм, как полагают, приложится после. На первом этапе выявляется степень ингибирования репродукции вирусов; на втором — токсическое действие отобранных препаратов на нормальные клетки; на третьем определяется минимальная концентрация препарата, не оказывающая токсического действия на клетки; на последнем этапе проводится дальнейшее изучение отобранных препаратов. |