Федеральное агенство по здравоохранению и социальному развитию
 Скачать 1.05 Mb.
|
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 9 Дата _________________ТЕМА: ТУБЕРКУЛЕЗ. ДИФТЕРИЯ. ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА
 Mycobacterium tuberculosis (окраска по методу Циля-Нильсена)
Mycobacterium tuberculosis (окраска аурамином)
Стерильная Измененная  Вывод:
Corynebacterium diphtheriae (метод Грама) (метод Нейссера) (метод Леффлера)
 Среда Бучина Среда Клауберга
Стерильные Измененные Проба Пизу Проба Закса Проба Пизу Проба Закса Вывод:
Вывод:
Туберкулин Вакцина БЦЖ Агглютинирующая дифтерийная сыворотка Токсин Шика АКДС-вакцина АДС-анатоксин АД-анатоксин Сыворотка противодифтерийная лошадиная антитоксическая ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮТУБЕРКУЛЕЗ 1. Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Название болезни происходит от ее характерного патоморфологического признака – специфической гранулемы или туберкулемы (очаг хронического воспаления, выглядит как небольшой бугорок, от лат. tuberculum). Слово туберкул впервые употребил в ХVI веке Ф. Сильвий при описании поражений легких у людей, умерших от чахотки. В качестве самостоятельного понятия термин туберкулез стали использовать в XIX веке после того, как Ж. Бейль и Р. Лаэннек доказали, что образование туберкулов является непременным спутником болезни. Догадки о заразности туберкулеза зародились в далеком прошлом, но только в 1868 году Ж.-А. Вильмену удалось воспроизвести заболевание у животных при заражении мокротой от больных туберкулезом. Но только в 1882 году Р. Кох потвердил его инфекционное начало. Возбудителями туберкулеза у человека являются Mycobacterium tuberculosis (более 90% всех случаев), M. bovis (5%), M. africanum (около 3%, главным образом среди населения стран тропической Африки). M. tuberculosis открыт Р. Кохом в 1882 г. 2. Характеристика возбудителей: 2.1. Классификация 21 группа по определителю Берджи (грамположительные неспорообразующие палочки), род Mycobacterium, 3 подгруппы: I (не растущие на питательных средах) – M. leprae (возбудитель лепры (проказы)) II (тонкие палочковидные клетки, кислотоустойчивые, аэробные, медленнорастущие (более 7 суток), свободноживущие или паразиты) – 15 видов:
III (быстрорастущие (менее 7 суток), непатогенные или условно-патогенные) – 32 вида (M. smegmatis, M. phli и др.). 2.2. Морфологические и тинкториальные свойства Прямые или слегка изогнутые палочки. В состав микобактерий входят липиды (10 – 40%), миколовая, фтионовая, туберкулостеариновая и другие жирные кислоты. Структурный скелет клеточной стенки микобактерий представляет собой два ковалентно связанных полимера – миколат арабиногалактазана и пептидогликан, к которому присоединены белки, полисахариды, липиды. Такой сложный химический комплекс с высоким содержанием липидов придает клеткам микобактерий туберкулеза ряд характерных свойств: устойчивость к кислотам, щелочам, спирту, а также гидрофобность. Для окраски туберкулезных палочек применяют метод Циля-Нильсена.В культурах встречаются зернистые формы, ветвящиеся, зерна Муха (шаровидные кислотоподатливые, легко окрашиваются по Граму). Возможен переход в фильтрующиеся и L-формы. Не имеют жгутиков, неподвижны, спор и капсул не образуют, грамположительные. 2.3. Культуральные свойства Для культивирования в лабораторных условиях используют специальные питательные среды, содержащие яйца, глицерин, картофель, аспарагин, витамины, соли. Чаще всего применяют плотную питательную среду Левенштейна-Йенсена и синтетическую жидкую питательную среду Сотона. Размножаются медленно: в оптимальных условиях время генерации составляет около 15 ч, тогда как бактерии многих других родов делятся через каждые 20 – 30 мин. Рост можно обнаружить через 2 – 3 недели и позднее (до 2 – 3 мес.), особенно в первых генерациях. На плотных питательных средах образуют морщинистые сухие колонии с неровными краями, в жидких питательных средах на поверхности образуется нежная пленка, которая утолщается и падает на дно, среда при этом остается прозрачной. 2.4. Биохимические свойства M. tuberculosis в отличие от M. bovis образует никотиновую кислоту и восстанавливает нитраты в нитриты, M. tuberculosis и M. bovis в отличие от других микобактерий теряют каталазную активность при нагревании до 68°С. 2.5. Токсигенные свойства Не образуют эндо- и экзотоксины. 2.6. Антигенные свойства Протеины, полисахариды, липиды (воск Д, мураминдепептид, фтионовая кислота – прямое повреждающее действие на ткани), фосфатиды. Имеются общие и специфические антигены у M. tuberculosis, M. bovis и других микобактерий. Для вирулентных штаммов характерно наличие корд-фактора – гликопептида, состоящего из трегалозы и димиколата (разрушает митохондрии клеток, нарушает функцию дыхания). 2.7. Резистентность Самые устойчивые из неспорообразующих. В окружающей среде микобактерии длительное время сохраняют свою жизнеспособность: в высохшей мокроте – в течение нескольких недель, на предметах, окружающих больного (белье, книги) – более 3 месяцев, в почве – до 6 месяцев, в воде – более года, длительно сохраняются в молочных продуктах. К действию дезинфицирующих веществ более устойчивы, чем другие бактерии, требуются более высокие концентрации и более длительное время воздействия для их уничтожения, при кипячении погибают мгновенно, чувствительны к воздействию прямого солнечного света, однако выдерживают инсоляцию в течение 1 часа. Устойчивы ко многим антибиотикам. 2.8. Патогенность для животных M. tuberculosis патогенна для морских свинок, M. bovis – для кроликов, мышей, крупного рогатого скота, свиней. 3. Патогенез и эпидемиология Источник инфекции: в естественных условиях возбудители туберкулеза обитают в организме своих хозяев – людей и некоторых животных (крупный рогатый скот, свиньи), при активно протекающем процессе они выделяют микобактерий в окружающую среду. Более 80% населения инфицируется в раннем возрасте; наиболее распространен воздушно-капельный путь заражения, при котором возбудители проникают в организм через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки пищеварительного тракта или поврежденную кожу. Наиболее часто встречается туберкулез легких, реже внелегочные формы туберкулеза (кожи, костей, суставов, почек и других органов). В зоне проникновения и размножения микобактерий возникает специфический воспалительный очаг – инфекционная гранулема (первичный эффект), затем развивается специфический воспалительный процесс в регионарных лимфатических узлах и наблюдается сенсибилизация организма (первичный туберкулезный комплекс). В большинстве случаев первичный очаг рассасывается, пораженный участок кальцинируется и рубцуется; в первичном очаге и лимфатических узлах микобактерии могут сохраняться многие годы, иногда в течение всей жизни (длительная персистенция возбудителя в организме связана с L-трансформацией возбудителя, а также с широким применением вакцины БЦЖ); при неблагоприятных условиях может наступить активация и генерализация процесса. 4. Иммунитет На фоне первичного инфицирования организма микобактериями формируется нестерильный иммунитет (устойчивость организма к суперинфекции, но возможность активации и генерализации процесса). Постинфекционный и поствакцинальный иммунитет ненапряженный: антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов, выявляемые с помощью различных серологических реакций, не оказывают ингибирующего действия на возбудителя и не отражают его напряженности. Важное значение в формировании иммунитета имеет аллергия, которая развивается по типу ГЗТ (защитная роль ГЗТ проявляется в ограничении размножения микобактерий, фиксации их в очагах инфекции, образовании инфекционных гранулем). 5. Лабораторная диагностика Исследуемый материал: Зависит от формы инфекции (при легочной – мокрота, при других – гной, ликвор, моча). Методы диагностики: В исследуемом материале очень мало возбудителей, поэтому проводят обогащение материала (концентрацию возбудителя в меньшем объеме исследуемого материала):
1. Экспресс-диагностика ПЦР 2. Микроскопический метод Окраска нативного исследуемого материала по Цилю-Нильсену (кислотоустойчивые бактерии – красные, кислотонеустойчивые – синие). Окраска нативного и обогащенного материала люминесцирующими красителями (аурамином) (патогенные микобактерии – золотисто-оранжевые, атипичные формы – зеленые, непатогннные – грязно-серые). Обогащение исследуемого материала проводится центрифугированием (осадок микроскопируется) или методом флотации. Обнаружение в мазках микобактерий дает основание для постановки предварительного диагноза. 3. Бактериологический метод Является обязательным. I этап: посев обогащенного исследуемого материала, предварительно обработанного кислотой и нейтрализованного щелочью (т.к. микобактерии кислотоустойчивы) на питательные среды: среда Сотона (солевой раствор, глицерин, аспарагин) – рост в виде морщинистой пленки с ароматическим запахом; среда Левенштейна-Йенсена (суспензия свежих яиц, аспарагин, картофельная мука, глицерин); среда Финна (источник азота – глютамат натрия); среда «Новая» (источник азота – гликокол). В плотные питательные среды добавляют малахитовую зелень для подавления роста сопутствующей микрофлоры, поэтому среды имеют нежно-зеленую окраску. Инкубация при 37°С до 4 мес., первый учет роста через 14 – 25 дней – для M. tuberculosis, через 24 – 40 дней – для M. bovis. II этап: изучение выросшей культуры по культуральным (вирулентные культуры микобактерий растут в виде R-форм с образованием слабого розовато-желтого пигмента, атипичные микобактерии и сапрофиты – в виде R-форм с образованием ярко-розового или ярко-желтого пигмента), морфологическим (наличие у патогенных микобактерий корд-фактора) и тинкториальным свойствам. Пересев на скошенный агар для выделения чистой культуры не производим, т.к. культура уже чистая (все некислотоустойчивые бактерии погибли при обработке исследуемого материала кислотой). III этап: идентификация чистой культуры
1. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis и M. bovis от других микобактерий: если культуры прогреть при 68°С, то каталазная активность M. tuberculosis и M. bovis теряется, в отличие от других микобактерий; 2. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis от M. bovis: ниациновая проба (ниациновый тест, проба Кона) – M. tuberculosis в отличие от M. bovis способна синтезировать никотиновую кислоту (в среду Соттона добавляют 1 мл 5% хлорамина и 1 мл цианистого калия, в присутствии никотиновой кислоты образуется ниацин – желтое окрашивание среды); 3. Тест, позволяющий отличить M. tuberculosis от M. bovis: M. tuberculosis в отличие от M. bovis способна восстанавливать нитраты в нитриты. 4. Биологический метод Производят заражение лабораторных животных исследуемым материалом от больного (к M. tuberculosis чувствительны морские свинки; к M. bovis – кролики). Учет через 3 – 4 месяца. 5. Метод кожно-аллергических проб Проба Манту (в основе лежит гиперчувствительность замедленного типа – антителнезависимая). Проводится внутрикожно с аллергеном (туберкулин). Туберкулин – очищенный белок из микобактерий туберкулеза – ППД-Л (пурин-протеин-дериват Линниковой) в количестве 2 ЕД. Учет через 72 часа. Различают отрицательную, нормэргическую (5 – 16 мм) и гиперэргическую реакцию. Об инфицировании судят по виражу туберкулиновой пробы (учет по туберкулиновому ряду в динамике). 6. Ускоренный метод диагностики Метод Прайса (метод микрокультур). На стекло наносится обогащенный исследуемый материал, предварительно обработанный кислотой и нейтрализованный щелочью, вертикально погружается в цитратную кровь на 10 - 14 дней, затем сушится, фиксируется, окрашивается по Цилю-Нильсену. В иммерсионный микроскоп видны микобактерии в виде кос или нитей войлока, благодаря наличию у патогенных микобактерий корд-фактора. 6. Специфическая профилактика и лечение Вакцины БЦЖ и БЦЖ-М – содержат живые микобактерии аттенуированного штамма, полученного А. Кальметтом и М. Гереном длительным пассированием возбудителя туберкулеза бычьего типа на картофельно-глицериновой среде с добавлением желчи (культура со сниженной вирулентностью была получена через 13 лет после 230 пересевов), используют с профилактической целью (внутрикожно) для создания иммунитета с ГЗТ в плановом порядке. В РФ вакцинируются все новорожденные на 5 – 7 день жизни; ревакцинация проводится только детям с отрицательной туберкулиновой пробой в 6 – 7 лет и в 14 – 15 лет. ДИФТЕРИЯ 1. Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Возбудитель дифтерии впервые был описан Э. Клебсом в 1883 г. и выделен A. Леффлером в 1884 г. До 80-х годов дифтерия считалась практически побежденной детской инфекцией, но в 1998 году зарегистрировано 1436 заболевших, в 1999 – 873, средняя многолетняя заболеваемость (5 лет) – 131 случай. Согласно классификации МКБ-10 выделяют дифтерию глотки, носоглотки, гортани, кожи и другие. В зависимости от распространенности процесса принято различать следующие формы: локализованная (1 анатомическая область), распространенная (2 смежных и более анатомических областей), токсическая (субтоксическая, I, II, III степени, гипертоксическая), комбинированная. По степени тяжести: легкая, средней степени тяжести, тяжелая. 2. Характеристика возбудителя: 2.1. Классификация 20 группа по определителю Берджи (грамположительные неспорообразующие палочки), включает 36 родов, род Corynebacterium, включает 20 видов, из них 6 патогенных для человека: C. pseudodiphtheriae, C. ulcerans, C. minitissima, C. xerosis (конъюнктивиты),C. vaginale (вагиниты), C. diphtheriae (возбудитель дифтерии). C. diphtheriae включает 3 биовара – gravis, mitis, intermedius. 2.2. Морфологические и тинкториальные свойства Небольшие палочки с булавовидными утолщениями на концах, где располагаются метахроматические включениями полифосфатной природы, превышающие поперечный размер клеток (зерна волютина). Располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок (V). Зерна волютина выявляются при окраске уксуснокислой синькой, которая окрашивает только включения, не затрагивая цитоплазму (методы Нейссера и Леффлера). Имеют микрокапсулу, имеют пили, неподвижны, не имеют жгутиков, не образуют спор, грамположительные. 2.3. Культуральные свойства Требовательны к питательному субстрату, нуждаются во многих аминокислотах, углеводах, минеральных солях. Обычно культивируются на свернутой сыворотке крови и на кровяном агаре с теллуритом калия. На плотных питательных средах образуют два типа колоний: gravis – темно-серого цвета в виде цветков маргаритки и mitis – черные, мелкие, гладкие, блестящие. 2.4. Биохимические свойства Уреазаотрицательные (не расщепляют мочевину), каталаза- и цистиназаположительные. Образуют ферменты патогенности – гиалуронидазу, нейраминидазу, фибринолизин. 2.5. Токсигенные свойства Секретируют гистотоксин, состоящий из двух субъединиц: токсического полипептида (образование контролируется бактериальными tox-генами) и транспортного полипептида, ответственного за доставку токсического компонента к клеткам-мишеням (образование контролируется генами фага, лизогенизировавшего клетку – только лизогенные клетки могут секретировать гистотоксин). 2.6. Антигенные свойства К-антиген – позволяет дифференцировать возбудителей на серовары; антиген клеточной стенки – полисахарид, группоспецифичный, дает перекрестные серологические реакции с микобактериями и нокардиями. 2.7. Резистентность Переносят высушивание, поэтому в окружающей среде сохраняют жизнеспособность до 5 месяцев. Чувствительны к дезрастворам – в 5% растворе карболовой кислоты погибают через 1 минуту. 2.8. Патогенность для животных Непатогенны для животных. 3. Патогенез и эпидемиология Источник инфекции – люди, в зеве которых локализуется возбудитель дифтерии. Заражение происходит воздушно-капельным, реже контактным путями. Факторы вирулентности возбудителя дифтерии (микрокапсула, пили) способствуют прикреплению бактерий к эпителиоцитам миндалин, реже гортани, трахеи, полости носа, конъюнктивы глаза, половых органов, раневых поверхностей, затем происходит колонизация эпителиоцитов, что сопровождается возникновением воспалительного процесса, секретируется гистотоксин. Фиксация гистотоксина происходит на рецепторах мембран мышечных клеток сердца, паренхимы сердца, почек, надпочечников, нервных ганглиев, при этом блокируется синтез белка на рибосомах, что приводит к гибели клеток. Возбудитель локализуется в клетках гортани. Гистотоксин, ингибируя трансферазу II, инициирует синтез крупных белков типа фибрина, развивается фибринозно-некротическое воспаление с образованием пленок, лимфаденита и отеков, что может привести к асфиксии. 4. Иммунитет Постинфекционный иммунитет: антитоксический – напряженный – обусловлен высоким уровнем антител к токсинам в сыворотке крови; антитела к бактериям – агглютинины, преципитины и другие – не обладают протективными свойствами; поствакцинальный – антитоксический. 5. Лабораторная диагностика Исследуемый материал: Слизь из зева, носоглотки, соскоб с конъюнктивы, фрагменты фибринозной пленки. Методы диагностики: 1. Экспресс-диагностика ПЦР, ИФА. 2. Микроскопический метод Диагностически значим, благодаря характерной морфологии и расположению возбудителей в исследуемом материале. Небольшие палочки с булавовидными утолщениями на концах, где располагаются метахроматические включениями полифосфатной природы, превышающие поперечный размер клеток (зерна волютина). Располагаются под углом друг к другу в виде римских пятерок (V), в отличие от ложнодифтерийных бактерий и дифтероидов, у которых зерна волютина не располагаются по полюсам палочки, а сами бактерии располагаются в виде частокола или спичек в коробке. Зерна волютина выявляются при окраске уксуснокислой синькой, которая окрашивает только включения, не затрагивая цитоплазму (метод Нейссера – желто-коричневая цитоплазма и синие зерна волютина; метод Леффлера – голубая цитоплазма и темно-синие зерна волютина). Используется люминисцентная микроскопия с окраской корифосфином. При этом зерна волютина дают красное свечение, цитоплазма – зеленое. 3. Бактериологический метод Является основным. Ставится с целью определения токсигенности штамма. I этап: посев исследуемого материала на плотные питательные среды: кровяной агар с теллуритом калия: коринебактерии дифтерии способны восстанавливать теллурит калия до металлического теллура, образуют два типа колоний: биовар gravis – темно-серого цвета в виде цветков маргаритки и биовар mitis – черные, мелкие, гладкие, блестящие, биовар intermedius встречается редко; среда Бучина (хинозольная среда, дифференциально-диагностическая) – коринебактерии дифтерии образуют колонии ярко-синего цвета, ложнодифтерийные бактерии и дифтероиды – бледно-голубые или бесцветные. II этап: изучение колоний, выросших на плотных питательных средах; пересев материала колоний на скошенный агар (среда Ру – свернутая лошадиная сыворотка) для выделения чистой культуры бактерий. III этап: идентификация чистой культуры бактерий:
4. Серологический метод Проводится для определения напряженности иммунитета (для решения вопроса о ревакцинации) – РПГА (если реакция идет в титре 1:50 – антитоксический иммунитет напряженный; если 1:10, 1:20 – антитоксический иммунитет ненапряженный, необходима ревакцинация). 5. Метод кожно-иммунологических проб Проводится для определения напряженности антитоксического иммунитета (для решения вопроса ревакцинации). Проба Шика (в основе лежит гиперчуствительность немедленного типа – антителзависимая). Используется токсин Шика (гистотоксин). Токсин Шика вводится в кожу предплечья, учет пробы по диаметру зоны гиперемии и отека: менее 2 см – антитоксический иммунитет напряженный; более 2 см – антитоксический иммунитет ненапряженный (необходима ревакцинация). 6. Специфическая профилактика и лечение 1. Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая (АКДС-вакцина) – содержит взвесь инактивированных возбудителей коклюша, дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроксиде алюминия для создания депо и усиления иммунного ответа (адъювантные свойства адсорбента), используют с профилактической целью (внутримышечно) для создания активного иммунитета в плановом порядке. 2. Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный (АДС-анатоксин) – содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроксиде алюминия для создания депо и усиления иммунного ответа (адъювантные свойства адсорбента), используют с профилактической целью (внутримышечно) для создания активного иммунитета в плановом порядке. 3. Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигенов жидкий (АДС-М-анатоксин) – содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроксиде алюминия; препарат содержит в 6 раз меньше дифтерийного и в 2 раза меньше столбнячного анатоксинов, чем АДС-анатоксин. 4. Анатоксин дифтерийный очищенный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигена жидкий (АД-М-анатоксин) – содержит дифтерийный анатоксин, адсорбированный на гидроксиде алюминия; препарат содержит дифтерийного анатоксина столько же, что и АДС-анатоксин. Вакцинация в РФ проводится в плановом порядке.
5. Д.Т.КОК (Пастер-Мерье, Франция) – содержит столбнячный и дифтерийный анатоксины и инактивированных теплом возбудителей коклюша, адсорбированные на гидроксиде алюминия. 6. ТЕТРАКОКК (Пастер-Мерье, Франция) – содержит столбнячный и дифтерийный анатоксины, инактивированных теплом возбудителей коклюша и инактивированную полиомиелитную вакцину (вирусы полиомиелита I, II, III типов), адсорбированные на гидроксиде алюминия. 7. Д.Т.ВАКС (Пастер-Мерье, Франция) – содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроксиде алюминия. 8. ИМОВАКС Д.Т.АДЮЛЬТ (Пастер-Мерье, Франция) – содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на гидроксиде алюминия. 9. Д.Т.ПОЛИО (Пастер-Мерье, Франция) – содержит столбнячный и дифтерийный анатоксины и инактивированную полиомиелитную вакцину (вирусы полиомиелита I, II, III типов), адсорбированные на гидроксиде алюминия. 10. Сыворотка противодифтерийная лошадиная очищенная концентрированная жидкая – содержит антитела к экзотоксинам возбудителя дифтерии (антитоксины); получают путем гипериммунизации лошадей дифтерийным анатоксином (экзотоксин, лишенный токсигенных свойств, но сохранивший антигенные и иммуногенные свойства, в результате воздействия 0,3 – 0,5% раствора формалина при температуре 37° - 40°С в течение 28 – 40 дней, с последующей адсорбцией на гидроксиде алюминия), сыворотку очищают от балластных веществ методом ферментативного гидролиза «Диаферм-3», используют для экстренной профилактики для создания пассивного иммунитета и лечения дифтерии. Вводится внутримышечно дробно по методу Безредко (для профилактики анафилактического шока), при положительной внутрикожной пробе вводить только по жизненным показаниям. Доза вводимой сыворотки зависит от формы заболевания – от 15000 МЕ при локализованной форме до 150000 МЕ – при гипертоксической форме. ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 9
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №10. ДАТА________________ TEMA: СИФИЛИС, ЛЕПТОСПИРОЗ, БОРРЕЛИОЗЫ (возвратные тифы, болезнь Лайма). ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: 1. Обсудить морфологические и биологические свойства возбудителей сифилиса, лептоспироза и боррелиозов. 2. Разобрать и освоить методы диагностики этих заболеваний. 3. Разобрать бактериальные препараты, используемые для диагностики, профилактики и терапии данных заболеваний. ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА
О К   Вывод: _____________________________________________________________________
Вывод: _____________________________________________________________________ ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ Классификация извитых форм бактерий. Все извитые бактерии по классификации Берджи объединены в первые 3 группы: 1 гр. Спирохеты - тонкие спиралевидные бактерии, подвижные, с внутриклеточно расположенным аппаратом движения. Большинство из них являются свободноживущими. Некоторые обитают в полостях человека и животных. Включают 8 родов. Основные роды, патогенные для человека: Borrelia, Leptospira, Treponema. 2 гр. Аэробные/микроаэрофильные, подвижные, спиралевидные/извитые грамотрицательные бактерии. Включают 16 родов. Для человека основные патогенны роды: Campylobacter, Helicobacter. 3 гр. Неподвижные грамотрицательные изогнутые бактерии. Непатогенны для человека. 1. Сифилис Сифилис — хроническая венерическая болезнь, характеризующаяся поражением кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, костей и нервной системы, отличается волнообразным течением со сменой периодов обострения, скрытыми периодами. Возбудитель сифилиса открыт Ф. Шаудином и Э. Гофманом в 1905 г. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: отделяемое шанкра, пунктат л/у, кровь 1.Экспресс-диагностика ИФА, РИФ, ПЦР. 2.Микроскопический метод Окраска по Романовскому-Гимзе и используют метод тёмнопольной микроскопии для выявления подвижных трепонем. При микроскопическом исследовании бледные трепонемы имеют вид тонкой спирали с 8—12 равномерными завитками. В тёмном поле зрения можно наблюдать поступательное вращение трепонемы вокруг оси, ротационное и сгибательное. Важным признаком является излом в средней части ("приглаженный утюгом"), что отличает возбудителя сифилиса от других трепонем. 3.Серологический метод Все лабораторные серологические тесты можно разделить на две группы: нетрепонемные тесты и трепонемные тесты. Нетрепонемные тесты (НТТ) используются в качестве отборочных, они недороги, позволяют обследовать большое количество больных. К ним относятся РП, РСК (р.Вассермана). Все нетрепонемные тесты на сифилис, применяемые в настоящее время, представляют собой реакции флоккуляции (продукт выпадает в виде хлопьев), в которых в качестве антигена используются кардиолипиновый АГ из бычьих сердец. Трепонемные тесты (ТТ) обычно не применяются для отбора, так как они технически сложны и дороги по сравнению с нетрепонемными. Трепонемные тесты применяются для подтверждения результатов отборочных реакций. Здесь используются: непрямая РИФ, РИТ со специфическим АГ (шт. Никольса), РПГА, иммуноблотинг. 6. Специфическая профилактика и лечение. Вакцинопрофилактика не разработана. Лечение проводится антибиотиками (пенициллин и др.). Антибиотико-резистентные штаммы трепонем практически не регистрируются. 2. Лептоспироз 1.Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Лептоспироз (синонимы: болезнь Васильева - Вейля, инфекционная желтуха, покосно-луговая лихорадка, водная лихорадка и др.) - зоонозное природно-очаговое заболевание, вызываемое микроорганизмами рода Leptospira(т.е. нежная тонкая спираль), характеризующееся наличием лихорадки, интоксикации, мышечных болей, а при тяжелом клиническом течении - поражением почек, печени, геморрагического и менингеального синдромов. Резервуаром инфекции - дикие и синантропные грызуны, домашние и промысловые животные. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: кровь, ликвор, моча. 1.Экспресс-диагностика РИА, ИФА, РИФ, ПЦР. 2.Микроскопический метод Микроскопию проводят в темном поле. Кровь берут для бактериоскопии в первые 3 дня заболевания при высокой температуре тела, мочу- с 7-8 дня до 3 мес. от начала болезни и ликвор при менингеальном синдроме. Имеет вторичные завитки на концах (вытянутая S), не всегда можно обнаружить. 3.Бактериологический метод На плотных питательных средах не растут. Посев делают на жидкие среды: Фервота-Вольфа, Терских и др., культивируют при 28оС до месяца, с ежедневным просмотром в тёмном поле капли питательной среды. Идентификация в РАЛ (реакция агглютинации-лизиса)с лептоспирозным антигеном (живая 7-10 дневная культура основных сероваров лептоспир) 4.Биологический метод заражают лабораторных животных (морских свинок) мочой, кровью, цереброспинальной жидкостью и через три дня забивают и обнаруживают лептоспиры в тёмном поле. 5.Серологический метод - основной Реакция микроагглютинации с живыми культурами лептоспир(13 серогрупп) - живым лептоспирозным диагностикумом. Для исследования берут парные сыворотки. Диагностический титр 1/100. Важно нарастание титра в 4 и более раз, не ранее 14-17 дня болезни. Также для определения АТ используют РПГА, непрямую РИФ, ИФА, РСК. 6.Специфическая профилактика и лечение. Есть убитая лептоспирозная вакцина содержит культуры основных 4 серогрупп лептоспир, распространённых в пределах России, убитых нагреванием и консервированных формалином. Применяется для профилактики лептоспирозов в эндемичных очагах инфекций. Вакцинацию проводят по эпид. показаниям с 7 летнего возраста, иммунитет в течение 1 года. Специфическая терапия - противолептоспирозный воловий гамма-глобулин. Неспецифическая терапия - антибиотики широкого спектра действия. Лептоспиры чрезвычайно чувствительны к пенициллину. 3.Боррелиозы. 1гр по Берджи – тонкие подвижные извитые бактерии без жгутиков, с внутриклеточно расположенным аппаратом движения. Род Borrelia включает 21 вид, в т. ч возбудителей возвратных тифов и болезни Лайма. А. Возвратные тифы 1.Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Возвратные тифы – это острые инфекционные заболевания с трансмиссивным путём передачи, характеризующееся общей интоксикацией, волнообразной лихорадкой, поражением печени, селезёнки, иногда, желтухой, менингитом и др. органов. Различают:
Лабораторная диагностика. Материал для исследования: кровь, взятая во время приступа. 1.Микроскопический метод является основным Из крови приготавливаются мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе (тонкие, длинные фиолетовые ниточки с неравномерными витками, между форменными элементами). 2.Биологический метод применяется для отличия эпидемического возвратного тифа от эндемического. С этой целью морской свинке вводят кровь больного. Боррелии эндемического клещевого возвратного тифа вызывают заболевание животного через 5-6дней, а эпидемического вшивого - нет. При этом в мазках крови морской свинки обнаруживаются боррелии. 3.Серологический метод Применяются - реакция лизиса, РСК, реакция иммобилизации. 6.Профилактика и лечение. Вакцинопрофилактика не проводится. Для лечения применяют антибиотики: пенициллин, левомицетин и др. Б. Болезнь Лайма (иксодовый клещевой боррелиоз) 1.Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Иксодовые клещевые боррелиозы (Лайм-боррелиоз, болезнь Лайма) – зоонозное природно-очаговое, трансмиссивное, инфекционное заболевание, вызываемое Borrelia burgdorferi и характеризующееся полиморфизмом клинических проявлений с преимущественным поражением кожи, нервной системы, суставов и сердца, склонное к переходу в хроническое рецидивирующее или латентное течение. Анализ истории изучения болезни Лайма с полной уверенностью позволяет в настоящее время утверждать, что ее различные клинические формы были описаны еще десятки лет назад. Так, например, первичные кожные проявления болезни Лайма в виде кольцевидной мигрирующей эритемы описали Афцелиус (1910) и Липшютц (1913), опубликовавшие свою работу под названием " Хроническая мигрирующая эритема" (Eritema chronica migrans). По их наблюдениям на месте присасывания клеща развивалась кольцевидная эритема, которая увеличивалась в диаметре и распространялась эксцентрически, захватывая значительные участки кожи. Заслуга Арвида Афцелиуса состоит в том, что он одним из первых обратил внимание на связь кожных проявлений с укусами членистоногих, и в частности, клещей Ixodes ricinus. До начала 80-х годов болезнь Лайма в США и хроническая мигрирующая эритема в Европе рассматривались как две самостоятельные нозологические единицы с неясной этиологией, несмотря на то, что уже тогда были известны определенные клинические сходства между европейскими и североамериканскими случаями заболеваний. Возбудитель был открыт в 1982 году американским микробиологом Вилли Бургдорфером. Именно это открытие, а затем и идентификация изолированного из Ixodes scapularis эталонного штамма спирохет "В-31"по целому ряду современных иммунологических и микробиологических тестов с последующим выделением спирохет от больных людей, животных и других видов Ixodes в США и Европе привели к заключению об этиологическом единстве клещевого боррелиоза и хронической мигрирующей эритемы. В октябре 1984 года возбудитель получил официальное название Borrelia burgdorferi Болезнь Лайма в нашей стране впервые была верифицирована в 1985 году, и в 1991 г. включена в официальный перечень нозологических форм, имеющихся в России. 2.Характеристика возбудителя. По своим основным свойствам не отличается от возбудителей возвратных тифов. 3.Эпидемиология и патогенез. Лайм-боррелиоз (ЛБ) относится к группе природноочаговых зоонозов с трансмиссивным механизмом передачи возбудителей. Географическое распространение болезни Лайма обширно. Она встречается на всех континентах (кроме Антарктиды). На территории России многие регионы, особенно Ленинградская, Тверская, Ярославская, Костромская, Калининградская, Пермская и Тюменская области, а также Уральский, Западносибирский и Дальневосточный регионы считаются высоко эндемичными по иксодовым клещевым боррелиозам. В природных очагах возбудители ЛБ циркулируют между клещами (I.ricinus и I.persulcatus) и дикими животными, и птицами. Половозрелые клещи питаются преимущественно на крупных диких животных, а нимфы и личинки — на мелких. Заражение боррелиями происходит трансмиссивным путем. Восприимчивость человека к боррелиям очень высокая, а возможно и абсолютная. Случаи заболеваний регистрируются среди всех возрастных групп; чаще болеет взрослое трудоспособное население. Инкубационный период при БЛ колеблется от 1 до 30 дней (чаще 7-14). Согласно общепринятому взгляду на течение боррелиозной инфекции выделяют три стадии развития болезни: 1 стадия локальной инфекции с развитием патологического процесса в месте внедрения возбудителей; 2 стадия диссеминации (распространения) боррелии по организму от места его первичного внедрения; 3 стадия органных поражений как результат длительного патогенного воздействия возбудителей на органы и системы. 1 стадия - Локальная инфекция развивается обычно на участке кожи в месте присасывания иксодового клеща. В центре эритемы (в месте первоначального накопления возбудителя) боррелии подвергаются активному воздействию факторов воспаления, они теряют свою подвижность, и их количество уменьшается, результатом чего является снижение явлений местного воспаления с формированием в центре эритемы «просветления». Исследования кожных биоптатов, взятых из разных участков эритемы больных, показывают, что в центре эритемного кольца боррелий практически отсутствуют и, как правило, всегда обнаруживаются по периферии. Появление новых колец гиперемии связывают с новыми генерациями боррелий за счет уменьшения факторов воспаления. Все это приводит к развитию характерной кольцевидной эритемы, которая чаще всего наблюдается у больных ЛБ и отсутствует при других инфекционно-обусловленных воспалительных изменениях кожи. Иногда, видимые проявления локальной стадий инфекции отсутствуют, т.е. нет характерной мигрирующей эритемы. Одной из самых вероятных причин этого является то, что боррелии относительно быстро покидают место своего первичного внедрения, в связи, с чем в коже не возникает местного воспаления. Во II стадии наблюдается распространение боррелии из области очаговых кожных поражений в различные органы с поражением нервной и сердечно-сосудистой систем, опорно-двигательного аппарата, общей инфекционной интоксикацией. Известны случаи, когда у больных первые клинические проявления поражений органов и систем возникают спустя месяцы и даже годы после первичного инфицирования, что свидетельствует о возможности латентного (бессимптомного) периода боррелиозной инфекции. О III стадии Лайм-боррелиоза обычно говорят тогда, когда признаки органных поражений наблюдаются не менее 6 мес. от момента заражения. При этом следует еще раз отметить, что стадийное течение Лайм-боррелиоза является скорее исключением, чем правилом. Довольно часто органные поражения впервые выявляются у пациентов, которые в анамнезе не отмечали ни эритемы, ни факта укуса клеща, т.е. инфицирование прошло для них незаметно. 4. Иммунитет. Постинфекционный иммунитет стойкий продолжительный. 5. Лабораторная диагностика. Исследуемый материал: Кровь, ликвор, синовиальная жидкость, биоптаты кожи.
Окраска мазков крови по Романовскому-Гимзе, серебрение кожных биоптатов по Вартину-Старри.
В результате многолетних эмпирических попыток удалось создать среду (получившую наименование BSK-II), обогащенной аминокислотами, витаминами, альбумином бычьей и кроличьей плазмы и другими веществами, пригодную для изоляции и культивирования возбудителей болезни Лайма. Однако ее изготовление весьма трудоемкий и дорогостоящий процесс. Поэтому бак. метод применяется в специализированных научных лабораториях.
Двухшаговый — ИФА или непрямая РИФ, а потом иммуноблот. ИФА, НРИФ - при обнаружении в сыворотке крови диагностически значимых титров антител(1/20-1/40) или при их 4-кратном увеличении, результат оценивают как положительный, подтверждающий боррелиозную инфекцию. Для исключения возможных ложноположительных результатов первого исследования применяют метод Western-blot, позволяющий обнаружить специфические антитела против определенных антигенов боррелий. 6.Специфическая профилактика и лечение отсутствуют. Лечение антибиотики несколько курсов (доксициклин, пенициллин). ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 10
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №11. ДАТА_____________ |