Федеральное агенство по здравоохранению и социальному развитию
 Скачать 1.05 Mb.
|
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 7 Дата _________________ТЕМА: ЧУМА. СИБИРСКАЯ ЯЗВА. ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА
 Yersinia pestis (окраска метиленовым синим)
О К1 К2   Вывод: ____________________________________________________________
Bacillus anthracis (окраска по методу Грама)
(малое увеличение)
(окраска по методу Ожешко)
 О К Вывод:__________________________________________________________
Люминисцирующие противочумные антитела Суспензионные противочумные антитела Агглютинирующая противочумная сыворотка Чумной фаг Живая чумная вакцина EВ Сибиреязвенная сыворотка, меченная ФИТЦ Суспензионные противосибиреязвенные антитела Преципитирующая противосибиреязвенная сыворотка Антраксин Живая сибиреязвенная вакцина СТИ Сибиреязвенный иммуноглобулин лошадиный ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮЧума 1. Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Чума – особо опасная инфекция. Летальность достигает 70 – 80%. Самые древние сведения о заболевании «черная смерть», «черная болезнь» датированы VII веком до н. э. (древние писания, упоминания греческого историка Геродота и обнаруженное в 1938 году массовое захоронение на Ближнем Востоке). Древнеримский историк и поэт Публий Тацид описывал эпидемию чумы в Риме в 68 году. VI век – эпидемия чумы в Византии. XIV век – эпидемия чумы охватила Европу и к 1348 году унесла жизни четвертой части ее населения. Эпидемии чумы повторялись и в последующие столетия. Возбудитель чумы Yersinia pestis открыт только лишь в 1874 году французским ученым А. Иерсеном и японским ученым С. Китазато. С 1920 по 1989 гг. чумой заболело 3639 человек, из них 1300 человек в России, 73% от всех заболевших погибло. Различают следующие клинические формы чумы (Руднев Г.П., 1938):
Известна фарингеальная форма чумы (эпидемия во Вьетнаме в 60 – 70-х годах) – клинически напоминает острый тонзиллит с поражением передних шейных лимфатических узлов, обусловлено заглатыванием или вдыханием чумного микроба (наблюдали у вьетнамских женщин, среди которых сохранился обычай искать друг у друга головных вшей и блох и давить их зубами). 2. Характеристика возбудителя: 2.1. Классификация 5 группа по определителю Берджи (факультативные анаэробные грамотрицательные палочки), семейство Enterobacteriaceae, род Yersinia, вид Y. Pestis. К этому роду также относятся Y. еnterocolitica (возбудитель энтероколита) и Y. рseudotuberculosis (возбудитель псевдотуберкулеза), Y. intermedia, Y. ruckeri, Y. frederiksenii, Y. kristensenii. У возбудителя чумы известно 3 эковара: Y. antiqua (Африка, Азия), Y. medievalis (Центральная Азия), Y. orientalis (распространен повсеместно). 2.2. Морфологические и тинкториальные свойства Короткие с закругленными концами палочки, имеющие бочкообразную форму, спор не образуют, жгутиков не имеют, неподвижны, образуют капсулу (в организме животных и людей, на сывороточном и кровяном агаре при 37°С), грамотрицательные, легко воспринимают анилиновые красители, окрашиваются биполярно. Трехслойная цитоплазматическая мембрана придает клетке овоидную форму со вздутиями по бокам и закруглениями на концах, средний слой отличается способностью абсорбировать красители на полюсах клетки. 2.3. Культуральные свойства Факультативные анаэробы, гетеротрофы, нетребовательные к питательным средам, растут в широком диапазоне температур (5 – 37°С), на плотных питательных средах образуют мелкие блестящие колонии по типу битого стекла, а затем R-формы колоний, плоские с неровными краями колонии желтого или серого цвета, напоминающие кружевной платочек, на жидких питательных средах образуют хлопья, иногда образуют пленку со спускающимися нитями, напоминающими сталактиты и рыхлый осадок при встряхивании (у старых культур). 2.4. Биохимические свойства Ферментируют ряд сахаров с образованием кислоты, не расщепляют мочевину, продуцируют фибринолизин (связан с микробной клеткой, имеет сходство с активаторами плазминогена) и плазмокоагулазу, участвуют в повышении проницаемости тканей, кодируются плазмидой. Образуют два бактериоцина – пестицин 1 – мономерный цитоплазматический белок, фермент N-ацетил-глюкозаминидаза (у чувствительных бактерий не подавляет синтеза ДНК, РНК и белка, а гидролизирует муреинлипопротеины, что приводит к образованию нежизнеспособных, но осмотически стабильных сферопластов) и пестицин 2. 2.5. Токсигенные свойства «Мышиный» токсин – белковой природы, состоит из двух компонентов – водорастворимого (поверхностный антиген) и водонерастворимого (соматический О-антиген), входит в состав цитоплазматической мембраны, достаточно прочно связан с бактериальной клеткой, синтез его контролируется плазмидами, обладает антигенными свойствами, блокирует функции клеточных митохондрий печени и сердца, вызывает образование тромбов, вызывает гибель мышей и крыс, но не морских свинок. Эндотоксин – липополисахарид клеточной стенки, вызывает интоксикацию и аллергизацию. 2.6. Антигенные свойства F1-антиген – капсульный антиген, состоит из двух компонентов – гликопротеина и белка, обладает антифагоцитарным действием, кодируется плазмидой. V-антиген – протективный антиген клеточной стенки, регуляторный бифункциональный белок, необходим для кальций-зависимого роста чумного микроба и для максимальной экспрессии генов вирулентности, участвует в процессах иммуносупрессии путем торможения синтеза цитокинов, обладает антифагоцитарным действием, кодируется плазмидой. W-антиген – липопротеин клеточной стенки, играет роль порина, способствующего выходу V-антигена в окружающую среду, обладает антифагоцитарным действием, кодируется плазмидой. Существуют и другие белки вирулентности, сигнализируют микробным клеткам о наличии ионов кальция, изменении температуры, выполняют регуляторные и функциональные функции, образуют поры в клетках-мишенях и способствуют перемещению в них других белков, дают цитотоксический эффект, нарушают агрегацию тромбоцитов. рН-антиген – фимбриоподобная поверхностная структура, образование индуцируется внутри макрофагов, а также in vitro и in vivo при 37°С и рН ниже 6,7 (условия сходные с температурой и средой в фаголизосомах и абсцессах), обладает цитотоксичностью, придает клеткам чумного микроба стабильность в суспензиях, агглютинирует эритроциты, обеспечивают антигенную мимикрию (способны играть роль Fc-рецепторов, связываются с нормальными IgG человека, что приводит к возникновению псевдоиммунных комплексов). Имеются перекрестные антигены с другими иерсиниями и энтеробактериями. 2.7. Резистентность Довольно резистентны: сохраняются на питательных средах – до 25 лет, в трупах – до 1 года, в блохах – до 1 года (даже если блоха погибла), в молоке – до 3 месяцев, в воде – до 1,5 месяцев. Высокочувствительны к дезинфектантам и высоким температурам (при нагревании до 80°С погибают через 5 минут), чувствительна к высушиванию, особенно при резких колебаниях влажности, быстро погибают под действием солнечных лучей, низкую температуру переносят хорошо, в замерзших трупах сохраняется несколько месяцев. 2.8. Патогенность для животных Патогенны для многих животных (более 300 видов) – грызунов, волков, верблюдов, домашнего скота. 3. Патогенез и эпидемиология Чума – острая особо опасная зооантропонозная инфекция с природной очаговостью, резервуар инфекции – грызуны, волки, верблюды, домашний скот, переносчики – блохи (трансмиссивный путь), другие пути передачи: контактный, алиментарный, воздушно-капельный, от человека к человеку передается воздушно-капельным путем только от больных легочной формой. Патогенез и клинические формы чумы зависят от входных ворот инфекции: кожа, слизистые оболочки глаза, ротоглотки, дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта. Однако, независимо от входных ворот инфекции, все формы (кожная, бубонная, кожно-бубонная формы (контактный путь), первичная легочная (аэрозольный путь), вторичная легочная (гематогенное осложнение), первичная септическая, вторичная септическая имеют выраженную тенденцию к генерализации процесса и развитию сепсиса. Происходит адгезия возбудителя (капсула, поверхностные структуры клеточной стенки) на эпителиальных клетках разных органов и тканей, затем инвазия и агрессия (подавление фагоцитарной активности макрофагов за счет антигенов, ферментов и токсинов), проникновение в регионарные лимфоузлы с током лимфы, нарушение активации комплемента, появление геморрагий и некрозов в лимфоузлах, а затем занос возбудителей током крови в печень и селезенку и дальнейшая генерализация процесса. 4. Иммунитет Постинфекционный иммунитет напряженный, практически пожизненный, связан с гуморальными (антителами) и клеточными (фагоцитоз) факторами; поствакцинальный – 6 – 12 мес. Однако известны два случая повторного заражения через 4 и 6 лет после перенесенного заболевания. 5. Лабораторная диагностика (на диагностику отводится 36 часов, как для особо опасной инфекции) Исследуемый материал: Зависит от формы инфекции (при бубонной – пунктат из бубона, легочной – мокрота, септической – кровь). Методы диагностики: 1. Экспресс-диагностика ПЦР,РИФ, РПГА, РНТФ. 2. Микроскопический метод Окраска исследуемого материала метиленовым синим. Обнаружение в мазках биполярно окрашенных палочек дает основание для постановки предварительного диагноза. 3. Бактериологический метод Является основным. Возбудитель неприхотлив, растет на простых питательных средах. Культивирование проводится при 28°С (психрофил). I этап: посев исследуемого материала на простые питательные среды: МПБ – пленка со свисающими нитями, по типу сталактитов, со временем обрываются, образуя рыхлый осадок; МПА – мелкие блестящие колонии по типу битого стекла, а затем R-формы колоний, плоские, с неровными краями, напоминающими кружевной батистовый платочек; агар Мартена (бульон из свиных желудков и 1,5 – 2% агар-агара); агар Хоттингера (бульон из свиных поджелудочных желез и 1,5 – 2% агар-агара). II этап: изучение выросших колоний по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам; пересев материала колоний на скошенный агар для выделения чистой культуры. III этап: идентификация чистой культуры:
4. Биологический метод Заражение лабораторных животных (чаще морских свинок и мышей) исследуемым материалом, затем воспроизводится микроскопический (мазки-отпечатки с пораженных органов) и бактериологический методы диагностики. 5. Серологический метод Проводится ретроспективно для подтверждения диагноза (антитела появляются к 5 – 7 суткам). Развернутая РА, развернутая РПГА. 6. Специфическая профилактика и лечение 1. Вакцина живая чумная сухая ЕВ – разработана Жираром и Робиком в 1936 году, содержит живые микроорганизмы чумного вакцинного штамма ЕВ (инициалы девочки, от которой выделен штамм), используется с профилактической целью (накожно, внутрикожно, подкожно, ингаляционно) для создания активного иммунитета по эпидемиологическим показаниям у лиц, проживающих на эндемичной территории и в плановом порядке у лиц, работающих с живыми культурами возбудителя чумы. Ревакцинация через 12 месяцев. 2. Вакцина чумная живая сухая для орального применения – также содержит живые микроорганизмы чумного вакцинного штамма ЕВ (форма выпуска – таблетки). Ревакцинация через 12 месяцев. СИБИРСКАЯ ЯЗВА 1. Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса. Самые древние сведения о заболевании датированы IX веком до н. э. под именем «священного огня» в поэме Гомера «Илиада». Гиппократ и Гален описали это заболевание под именем «антракеза». Нет в мире страны, которая не пострадала бы от сибирской язвы, не стала исключением и дореволюционная Россия. Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis впервые был обнаружен преподавателем французской ветеринарной школы Делафоном в 1838 году, описан французскими медиками Полендером и Давеном независимо друг от друга в 1849 году (в крови животных) и Ф. Брауэлем в 1855 году (в крови человека), выделен Р. Кохом в 1876 году и позднее исследован Л. Пастером. 2. Характеристика возбудителя: 2.1. Классификация 18 группа по определителю Берджи (грамположительные палочки и кокки, образующие эндоспоры), род Bacillus, вид B. anthracis. 2.2. Морфологические и тинкториальные свойства Крупные палочки с обрубленными концами, распологающиеся длинными цепочками, во внешней среде образуют споры, в организме людей и животных и на кровяном агаре образуют белковую капсулу, не имеют жгутиков, неподвижны, грамположительные. 2.3. Культуральные свойства Неприхотливы. На плотных питательных средах образуют R-формы колоний, напоминающие гриву льва или голову медузы Горгоны. На кровяном агаре, в отличие от антракоидов, не дают гемолиза, образуют капсулу. На МПБ – придонный рост. 2.4. Биохимические свойства Обладают сахаролитическими и протеолитическими свойствами, разжижают желатин «елочкой». 2.5. Токсигенные свойства Белковый токсин – протективный антиген, летальный и отечный фактор, по механизму действия подобен цитотоксинам и функциональным блокаторам. 2.6. Антигенные свойства Соматический О-антиген – группоспецифический, полисахарид, термостабилен, не разрушается при кипячении и длительно сохраняется во внешней среде, используется в реакции Асколи (1877), капсульный антиген – видоспецифический, полипептид, участвует в адгезии бактерий на чувствительных клетках макроорганизма, обладает антифагоцитарным действием. 2.7. Резистентность Во внешней среде образуют споры, сохраняющиеся в почве в течение многих десятилетий. 2.8. Патогенность для животных Патогенны для многих животных – крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, верблюдов, оленей, мулов, лосей, ланей, косуль, свиней, кабанов, львов, ягуаров, медведей, шакалов, слонов, лис, зайцев, мышей и др. 3. Патогенез и эпидемиология Сибирская язва – острая особо опасная зоонозная инфекция, источником которой являются крупный и мелкий рогатый скот, лошади, верблюды, свиньи, кабаны, лисы и другие животные, передается людям через продукты, приготовленные из инфицированного материала (алиментарный путь), при уходе за больными животными, обработке животного сырья (контактный и аэрозольный пути), через кровососущих насекомых (трансмиссивный путь). Патогенез и клинические формы сибирской язвы зависят от входных ворот инфекции: кожная, легочная, кишечная, вторичная септическая. Происходит адгезия возбудителя (капсульный полипептид) на чувствительных клетках макроорганизма (энтероциты кишечника, эпителиоциты респираторного тракта), затем инвазия (протеазы широкого спектра), далее возбудитель либо проникает в глубокие слои дермы на границе подкожной клетчатки, вызывая образование специфического карбункула – очага геморрагическо-некротического воспаления (кожная форма), либо возбудитель из места внедрения заносится в регионарные лимфатические узлы, в которых развивается воспаление. 4. Иммунитет Постинфекционный иммунитет напряженный, поствакцинальный – 1 год. 5. Лабораторная диагностика Исследуемый материал: Зависит от формы инфекции (при кожной – содержимое карбункула, легочной – мокрота, кишечной – испражнения, септической – кровь). Методы диагностики: 1. Экспресс-диагностика РИФ, РПГА, РП (реакция термокольцепреципитации по Асколи – используется для работы с животными). 2. Микроскопический метод Окраска исследуемого материала по методу Грама, по Ожешко для выявления спор. Обнаружение в мазках грамположительных крупных палочек с обрубленными концами, располагающихся длинными цепочками дает основание для постановки предварительного диагноза. 3. Бактериологический метод Является основным. Возбудитель неприхотлив, растет на простых питательных средах. I этап: посев исследуемого материала на питательные среды: МПБ – плотный осадок; МПА – R-формы колоний, напоминающие гриву льва или голову медузы Горгоны. II этап: изучение выросших колоний по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам; пересев материала колоний на скошенный агар для выделения чистой культуры. III этап: идентификация чистой культуры:
4. Биологический метод Заражение лабораторных животных (чаще морских свинок и мышей) исследуемым материалом, затем воспроизводится микроскопический и бактериологический методы диагностики. 5. Метод кожно-аллергических проб Проводится с аллергеном (в основе лежит гиперчувствительность замедленного типа – антителнезависимая). Антраксин (аллерген) – белково-полисахаридно-нуклеиновый комплекс, полученный в результате гидролиза B. anthracis. Вводится в предплечье, учет по зоне гиперемии и отека: если более 2 см – человек инфицирован, если менее 2 см – не инфицирован. 6. Специфическая профилактика и лечение 1. Вацина сибиреязвенная живая сухая для подкожного и скарификационного применения СТИ – разработана Гинсбургом и Тамариным, содержит живые споры вакцинного штамма СТИ-1, лишенного капсулы и способности вызывать заболевание у людей и животных, используется с профилактической целью (накожно, подкожно) для создания активного иммунитета по эпидемиологическим показаниям и в плановом порядке лицам, занятым убоем, разделкой туш, снятием шкур, сбором, хранением, транспортировкой и обработкой сырья животного происхождения. Ревакцинация через 1 год. 2. Вакцина сибиреязвенная комбинированная жидкая для подкожного применения – содержит смесь живых спор вакцинного штамма СТИ-1 и протективного сибиреязвенного антигена, адсорбированного на гидроксиде алюминия. Ревакцинация через 1 год. 3. Глобулин противосибиреязвенный лошадиный жидкий – содержит антитела против возбудителя сибирской язвы, получают путем гипериммунизации лошадей вакцинным штаммом, затем из сыворотки методом осаждения этанолом при низких температурах выделяют фракции γ- и β-глобулинов, используется для экстренной профилактики для создания пассивного иммунитета и лечения сибирской язвы. Вводится внутримышечно дробно по методу Безредко (для профилактики анафилактического шока), при положительной внутрикожной пробе вводить только по жизненным показаниям. ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 7
|