Федеральное агенство по здравоохранению и социальному развитию

• Название: Федеральное агенство по здравоохранению и социальному развитию
• Анкор: Rabochaya_tetrad_Mikrobiologia_2_1.doc
• Дата: 13.04.2017
• Размер: 1.05 Mb.
• Имя файла: Rabochaya_tetrad_Mikrobiologia_2_1.doc
• Тип: Документы; #4774
• Категория: Биология. Ветеринария. Сельское хозяйство
• страница: 12 из 20

ТЕМА: КАМПИЛОБАКТЕРИОЗЫ, ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗ, ОТЧЕТ ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Обсудить морфологические и биологические свойства возбудителей кампилобактериозов и хеликобактериоза.

2. Разобрать и освоить методы диагностики этих заболеваний

3. Разобрать бактериальные препараты, используемые для диагностики, профилактики и терапии данных заболеваний.

4. Выяснить и оценить уровень знаний студентов по микробиологической диагностике бактериальных инфекций.бактериоза.
ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ
Кампилобактериозы

1. Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса.

Кампилобактериоз - зооантропанозная бактериальная инфекция, вызываемая м/о рода Campylobacter, которая характеризуется острым началом, лихорадкой, интоксикацией, преимущественным поражением ЖКТ в виде энтеритов и энтероколитов, а также развитием некоторых не кишечных форм.

В структуре острых кишечных инфекций кампилобактериозы встречаются в 3-8%. Острые кишечные инфекции кампилобактерии вызывают в 20-30 % случаев в ассоциации с другими микроорганиз­мами (сальмонеллами и др).

2. Характеристика возбудителя:

2.1 Классификация

2 гр. по Берджи. Род Campylobacter (Campyla— изогнутые) относится к груп­пе аэробных или микроаэрофильных подвижных спирально изогну­тых грамотрицательных бактерий. Род открыли в 1963 г. Он представлен 13 видами, 3 из которых являют­ся патогенными для человека - C.jejuni, С.fetus, C.coli. Наибольшее значение в патологии человека имеет С. jejuni. Реже встречаются С. fetus и С. coli. Ранее отнесенный к данному роду С. pylori выделен в род Helicobacter.

2.2 Морфологические и тинкториальные свойства.

Тонкие вибриоидные клетки, имею­щие один или более витков спирали. Спо­ры не образуют. Подвижные, совершают характерное винтовое дви­жение с помощью одиночных жгутиков, расположенных на одном или обоих полюсах клетки. Грамотрицательные.

2.3 Культуральные свойства.

Хемоорганотрофы не требовательны к питатель­ному субстрату (обычно используют кровяные, мясные, печёночные среды с антибиотиком), микроаэрофилы, термофилы (37-44^оС). На жидких питательных средах образуют равномерное помутнение с выраженным осадком, на плотных средах рост через 2-4 дня образуют прозрачные, округлые колонии с ровными краями, 2-8мм в диаметре.

2.4 Биохимические свойства.

Не сбраживают углеводы. Для получения энергии используют аминокислоты, а не углеводы. Оксидазо - и каталазоположительные, уреазоотрицательные.

2.5 Токсигенные свойства.

Продуцирует энтеротоксины (функ­циональные блокаторы), нарушающие водно-солевой обмен через образование цАМФ, аналогично энтеротоксинам Е. coli и V. cholerae. При разрушении кампилобактеров освобождается эндотоксин. Опи­саны цитотоксины, вызывающие гибель чувствительных клеток толстого кишечника, вызывая дизентериеподобные изменения.

2.6 Антигенные свойства.

Кампилобактеры содержат О-, К- и Н-антигены. В на­стоящее время выделено свыше 55 О-серогрупп кампилобактеров.

2.7 Резистентность.

В пищевых продуктах, водопроводной и сточной воде, моче при комнатной и пониженной температурах сохраняются 1-5 недель. Чувствительны к нагреванию более 50^оС, действию прямого солнечного света и УФ, высыханию, высоким и низким значениям рН среды, также чувствительны к рабочим концентрациям дезрастворов.

2.8 Патогенность для животных.

Вызывают энтериты у с/х. животных, С. jejuni встречает­ся при абортах овец.

3.Патогенез и эпидемиология.

К факторам вирулентности относятся жгутики и муциназа, способствующие проникновению в слизистую оболочку тонкой кишки. Обладают умеренной пенетрационной активностью. Их токсичность связана с секрецией энтеротоксинов (функ­циональные блокаторы), нарушающими водно-солевой обмен через образование цАМФ, аналогично энтеротоксинам Е. coli и V. cholerae. При разрушении кампилобактеров освобождается эндотоксин. Опи­саны цитотоксины, вызывающие гибель чувствительных клеток. После колонизации участка тонкой кишки они могут проникнуть в кровя­ное русло, вызывая генерализованную инфекцию, чаще у иммунодефицитных лиц. В патогенезе кампилобактериозных энтеритов преоб­ладают явления диареи или дизентериеподобных состояний. При этом С. jejuni и С. fetus вызывают энтериты у людей. С.fetus чаще встречается у пожилых лю­дей с иммунодефицитами, а также при не кишечных формах кампилобактериоза, вызывая поражение паренхиматозных органов (печень, лёгкие), артрит, менингит и даже сепсис.

Эпидемиология. Зооантропаноз. Зарегистрированы пищевые, молочные и водные вспышки кампилобактериоза, чаще у детей. Кампилобактерии широко распространены и обитают в репро­дуктивных органах, в ЖКТ, ротовой полости человека и некоторых животных.

Передача инфекции происходит алиментарным путем. Возможен и контактно-бытовой путь. При путях передачи инфекции имеют значение: пищевой фактор активен в летнее время, а также при упот­реблении сырого молока, мяса и воды, бытовой фактор - действует в течение всего года, более опасно общение с больными животными, чем с больными людьми, представляют большую опас­ность и реконвалесценты, которые выделяют значительное количе­ство кампилобактерий.

У здоровых лиц кампилобактерии выделяются в 4,4%. Выражена летняя сезонность.

Наиболее высока вероятность заражения при употреблении продуктов птицефабрик и мясокомбинатов. На этих же предприяти­ях и высокая инфицированность персонала, которая происходит в первый год работы. Заболевание, как правило, протекает у этих лю­дей в стертой форме.

Естественная восприимчивость людей высокая.

4.Иммунитет.

При кампилобактериозе наблюдается гуморальный иммунный ответ. Однако образующиеся антитела не обладают выра­женными протективными свойствами.

5. Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: фекалии, кровь.

1.Микроскопический метод мало эффективен, т.к. они могут присутствовать в норме в 15-20% у здорового человека.

2.Бактериологический метод

Посев производят на специальные селективные плотные питательные среды с бриллиантовым зелёным, 5% баранью или лошадиную кровь с антибиотиками, ЖЭКА (железо-эритрин-кровяной агар) в микроаэрофильной атмосфере на 48 часов при 42° С. Идентификация чистой культуры проводится по антигенным и биохимическим свойствам.

3.Серологический метод ретроспективно АТ появляются через 2 недели.

Непрямая РИФ, РСК, р. микроагглютинации, РПГА с парными сыворотками (комплексный Эр кампилобактериозный диагностикум), интервал 10-14 дней.

6. Профилактика и лечение.

Вакцинопрофилактика не разработа­на. Для лечения применяются тетрациклин, гентамицин, макролиды.
Хеликобактериоз

1.Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса.

Род Helicobacter ранее относился к роду Кампилобактер, однако в настоящее время выделен в самостоятельный род. Н. pylori - является возбудителем язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Относится к груп­пе аэробных или микроаэрофильных подвижных спирально изогну­тых грамотрицательных бактерий. 2 гр. по Берджи.

2. Характеристика возбудителя:

2.1 Классификация см. п.1

2.2 Морфологические и тинкториальные свойства.

H.pylori представляют собой мелкие грамотрицательные палочки, лофотрихи или монотрихи.

2.3 Культуральные свойства.

Микроаэрофилы, растут на сложных питательных средах – агар Колумбия и селективные среды с добавлением ванкомицина, полимиксина или триметоприма для подавления сопутствующей микрофлоры. Инкубация посевов при Т-37^оС (33-41) и влажности 98%, состав воздушной среды (5% О₂, 5-10%СО₂, 85-90% N₂ – газогенераторные пакеты), в течении3-10 суток, первые колонии появляются на 3 день, диаметр до 0,5-2мм, в виде “капель росы”, при сплошном росте образуют прозрачную плёнку.

2.4 Биохимические свойства.

Глюкозу не ферментирует, не образует индол.

Продуцируют уреазу, каталазу и оксидазу, ко­торые используют для идентификации этих бактерий.

2.5 Токсигенные свойства

Токсичность связана с цитотоксином, действующим на эпителиальные клетки, токсином, нару­шающим межклеточные контакты, и с ЛПС.

2.6 Антигенные свойства

Изучены не полностью. Известно о наличии О- и Н- Аг, а также поверхностных белковых Аг (определяют типоспецифичность).

2.7 Резистентность

(см. кампилобактер)

2.8 Патогенность для животных

Является представителем нормаль­ной микрофлоры животных.

3. Патогенез и эпидемиология.

К факторам вирулентности хеликобактеров относят их способность к движению и участие в проникно­вении в слизистую оболочку. Фермент уреаза при разрушении моче­вины до аммиака и СО₂ приводит к образованию газовой оболочки, защищающей от кишечного сока. Хеликобактеры продуцируют фосфолипазы, разрушающие фосфолипиды. Их токсичность связана с цитотоксином, действующим на эпителиальные клетки, токсином, нару­шающим межклеточные контакты, и с ЛПС. Кроме того, на поверх­ности клеток образуются белки теплового шока, которые рассмат­ривают как реакцию на стресс. Это приводит к аутоиммунному воспалению и образованию язв в желудке и двенадцатиперстной кишке. Н. pylori выделяются в 80% случаев язвенных гастритов.

Пути передачи человеку окончательно не выяснены. По-видимому, люди заражаются алиментарным путем.

4. Иммунитет.

При хеликобактериозе наблюдается гуморальный иммунный ответ. Однако образующиеся антитела не обладают выра­женными протективными свойствами.

5. Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал: биоптаты поражённого участка кишечника, обнаружение HP в кале, в слюне или транссудате десен.

1.Экспресс-диагностика:

ПЦР, иммуноблотинг;

2. Микроскопический метод - выявление HP в биоптате при окраске по Романовскому-Гимзе, по Граму (Г- изогнутые палочки).

3. Бактериологический метод. Дорого.

Выделение культуры HP – растут на сложных питательных средах – агар Колумбия и селективные среды с добавлением ванкомицина, полимиксина или триметоприма для подавления сопутствующей микрофлоры. Инкубация посевов при Т-37^оС (33-41) и влажности 98%, состав воздушной среды (5% О₂, 5-10%СО₂, 85-90% N₂ – газогенераторные пакеты), в течение 3-10 суток, первые колонии появляются на 3 день, диаметр до 0,5-2мм, в виде “капель росы”, при сплошном росте образуют прозрачную плёнку.

Идентификация по морфологии и биохимической активности, опре­деляют уреазную активность биоптата в жидкой или гелеобразной среде, содержащую субстрат, буфер и индикатор.

4. Серологический метод:

- реакция связывания комплемента (РСК)

- реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

- метод иммуноферментного анализа (ИФА);

6. Профилактика и лечение.

Для лечения используют полусинте­тические пенициллины, аминогликозиды, фторхинолон.
ДОМАШНЕЕ ЗАДАНИЕ К ЗАНЯТИЮ № 11

Свойства возбудителей, патогенез, диагностика, специфическая профилактика и терапия следующих инфекций: газовая гангрена, столбняк, ботулизм, чума, сибирская язва, бруцеллез, туляремия, дифтерия, туберкулез, менингококковая инфекция, гонорея, стафилококковая инфекция, стрептококковая инфекция, сифилис, лептоспироз, боррелиозы (возвратные тифы, болезнь Лайма), инфекция, вызванная бактероидами, кампилобактериозы, хеликобактериозы.


ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №12. ДАТА________________

ТЕМА: Урогенитальные инфекции (хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, гарднереллез).
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Дать определение урогенитальных инфекций (УГИ).

2. Разобрать характеристику возбудителей урогенитальных инфекций.

3. Обсудить особенности персистенции микроорганизмов в репродуктивных органах человека.

4. Разобрать методы диагностики УГИ (окраска по Граму, по Романовскому - Гимзе, РИФ, биохимические тесты, ИФА).

Практическая работа

1. Просмотр и зарисовка мазков, окрашенных по Грамму или метиленовым синим и обнаружение «ключевых клеток».



2. Определение титра антител в парных сыворотках больного (по готовым рядам ИФА).

1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 К+ К–




Ig M

I

Ig G

______________________________________________________________________________
1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 К+ К–




Ig M

II

Ig G


ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ
1. Урогенитальный хламидиоз

1.Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса.

Хламидии — облигатные внутриклеточные паразиты. Первоначально их относили к крупным вирусам. Хламидии обладают РНК, ДНК, имеют клеточную стенку и рибосомы, сходные с клеточной стенкой грамотрицательных бактерий, их рост угнетают антибиотики.

2. Характеристика возбудителя:

2.1 Классификация

9 гр. по Берджи. Порядок Chlamydiales, се­мейство Chlamydiaceae, которое включает 2 рода:

род Chlamydia и Chlamydophila. В настоя­щее время род Chlamydia содержит 3 вида: С. tra­chomatis, C. suis и C. muridarum, а род Chlamydophila6 видов:С. pneumoniae, С. psittaci, С. pecorum, C. abortus, C. caviae и C.felis. С. trachomatis и С. pneumoniae, С. psittaci, C.felis являются возбудителями различных заболеваний человека.

Внутри каждого вида хламидий определяется значительное число сероваров, которые выявляют на основании определения антител, продуцируемых против основного белка клеточной стенки. С. trachomatis считается одним из основных агентов, вызывающих ИППП. Возбудителем мочеполовых хламидиозов является Chlamydia trachomatis серотипов D-K (табл.1).

Таблица 1. ИНФЕКЦИИ, ВЫЗЫВАЕМЫЕ CHLAMYDIA TRACHOMATIS

Серотип	Пол	Инфекция
А-С	Оба пола	Трахома
D-K.	Женщины	Сальпингит, перигепатит
D-K	Мужчины	Уретрит, эпидидимит, простатит
D-K.	Оба пола	Конъюнктивит, артрит, болезнь Рейтера
D-K	Дети	Конъюнктивит, пневмония
L1-L3	Оба пола	Венерический лимфогранулематоз

Биологическое своеобразие хламидий проявляется на фоне комплекса бактериоподобных характеристик: сохранение морфологической сущности на всём протяжении жизненного цик­ла; деление вегетативных форм; наличие клеточной стенки; содержание ДНК и РНК; энзиматическая активность; содержание общего родоспецифического антигена; чувствительность к антибиотикам широкого спектра действия.

2.2 Морфологические и тинкториальные свойства

Грамотрицательные, хорошо окрашиваются по Романовскому-Гимзе, элементарные тельца окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Неподвижны, спор и капсул не образуют.

Хламидии образуют группу прокариотных микроорганизмов с уни­кальным циклом развития, который состоит из смены внутри- и внекле­точной фазы. Основными формами хламидий являются элементарные тельца (внеклеточные неподвижные сферические организмы) и ретикуляр­ные (инициальные) тельца (внутриклеточные формы существования с ти­пичной структурой грамотрицательных бактерий). Промежуточные фор­мы, выявляемые в цикле развития, определяются как переходные или про­межуточные.

2.3 Культуральные свойства

На питательных средах не растут. Используют культуры клеток McCoy, Hela и др., а так же куриные эмбрионы (7-8 дневные).

2.4 Биохимические свойства

Мало изучены.

2.5 Токсигенные свойства

Продуцируют экзо- и эндотоксины, механизм действия которых также мало изучен.

2.6 Антигенные свойства.

Хламидии имеют сложное антигенное строение. Они имеют родоспецифический АГ (ЛПС клеточной стенки), видо- и типоспецифические АГ белковой природы.

18 сероваров Chlamydia trachomatis объединены в 2 биовара: трахома (А-К, Ва, Da и Ia) и лимфогранулёма винерум(LGW серовары L₁,L ₂, L_2а и L₃).

2.7 Резистентность.

Хламидии неустойчивы во внешней среде, чувствительны к действию высокой температуры и быстро инактивируются при высушивании. Инактивация наступает при 50°С через 30 мин, при 70°С — через 10 мин, при 90°С — через 1 мин. Низкая температура (-20°С) способствует длительному сохранению инфекционных свойств возбудителя. Хламидии быстро инактивируются эфиром (через 30 мин) или фенолом (0,5%-ный раствор в течение 24 ч). Они высокочувствительны к 70%-ному этанолу, раствора лизола (2%-ного), нитрата серебра (0,05%-ного), калия йодата (0,1%-ного), калия перманганата (0,5%-ного), перекиси водорода (25%-ного), хлорамина (2%-ного).

2.8 Патогенность для животных

В естественных условиях для животных не патогенны. Chlamydia trachomatis является исключительно паразитом человека.
3. Эпидемиология и патогенез.

Инфекции, вызываемые Chlamydia trachomatis, являются наиболее частыми среди заболеваний, передаваемыми половым путём, в промышленно развитых странах.

Заражение хламидиозом происходит половым путём. Механизм передачи инфекции реализуется при половых контактах. Пик частоты развития инфекций половых путей, вызванных С. trachomatis, приходится на лиц в возрас­те от 17 до 25 лет. Внеполовой путь передачи хламидийной инфекции (че­рез загрязненные инфицированным отделяемым руки, бельё) существенного значения не имеет.

Число асимптомных случаев инфекции вызываемых Chlamydia trachomatis, у молодых мужчин и женщин достигает от 5 до 20%.

Цикл развития хламидий начинается после прикрепления элементар­ных телец к чувствительной клетке (хламидии тропны к цилиндрическому эпителию), за которым следует проникновение организма в везикулы фагоцитов. Метаболически инертные элементарные тельца подвергаются морфологическим изменениям, превращаясь в большие ретикулярные тельца. Эти последние, в свою очередь, обладают активным метаболизмом, делятся бинарно внутри расширяющейся эндосомы, которая принимает вид микроколонии, известной под названием хламидийных включений. После периода развития и деления ретикулярные тельца реорганизуются, превращаясь в форму инфекционных элементарных телец. Цикл развития заканчивается, если происходит полный лизис клетки или экзоцитоз хламидий, позволяющий элементарным тельцам инициировать новый инфекционный цикл. Продолжительность полного цикла развития хламидий составляет от 48 до 72ч, в зависимости от хара­ктеристик инфицирующего штамма, клетки-хозяина и условий окружаю­щей среды. Подобно многим облигатным внутриклеточным паразитам, хламидии способны изменять нормальные защитные механизмы клетки-хозяина. Эндоцитированные хламидий разъединяются внутри фагосомы во время внутриклеточной стадии цикла развития. Ингибирование слияния фагосом с лизосомами клетки-хозяина позволяет этим организмам раз­множаться внутриклеточно и выживать. Ингибирование слияния обуслов­лено поверхностными антигенами хламидий и зависит от присутствия жизнеспособных хламидийных элементарных телец.

Хламидии обладают облигатным внутриклеточным жизненным циклом, успешно преодолевая препятствия для проникновения в клетку хозя­ина, существования и размножения в ней, а также выживания в период neрехода из клетки в около клеточную среду. Повторяющиеся эпизоды инфекции несомненно стимулируют иммунный ответ хозяина и усиливают степень патологических повреждений. Однако, неясно, только ли реинфекция или также присутствие изменен­ных, трудно выявляемых форм персистирующих хламидий приводит к naтологическим изменениям.

Хламидийная инфекция у мужчин и женщин проявляется после инку­бационного периода, продолжительность которого составляет от 5 до 30 дней (в среднем 21 день). Урогенитальный хламидиоз не имеет специфических клинических проявлений и патогномоничных симптомов, обычно протекает торпидно, мало- или асимптомно. Урогенитальная хламидийная инфекция наиболее часто принимает подострую, хроническую или персистентную формы. Первоначальным очагом инфекции наиболее часто явля­ется слизистая уретры у мужчин и канала шейки матки у женщин. Клини­ческая картина заболевания зависит от времени с момента инфицирова­ния, локализации поражения и выраженности местных и общих реакций макроорганизма. Общепринятой клинической классификации заболевания не существует. Различают свежий и хронический урогенитальный хлами­диоз, имеют место случаи носительства хламидийной инфекции. У значи­тельного числа больных хламидиоз сочетается с другими заболеваниями, передаваемыми половым путём.