I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
 Скачать 5.14 Mb.
|
35. Молекулярно-генетическое разнообразие вирусов. Варианты стратегии РНК-геномных вирусов.Геном ДНК-содержащих вирусов: 1- нитевая линейная (парвовирус) 2- нитевая линейная (вирус герпеса) 2-нитевая кольцевая (папилломавирус) 2-нитевая кольцевая с дефектом одной цепи (вирус гепатита В) Геном РНК-содержащих вирусов: 1-нитевая линейная + (полиовирус) 1-нитевая линейная – (парагрипп) 1- нитевая линейная фрагментированная – (вирус гриппа) 2- нитевая линейная фрагментированная (ротавирусы) Общая стратегия для всех вирусов – репродукция есть 3 варианта:  1 вариант – ДНК-геномные вирусы – типичный путь синтеза белка, некоторые вирусы даже используют полимеразы клеток 2 вариант – РНК-геномные вирусы – тут 3 типа стратегий: Самый простой: РНК вируса и роль матричной РНК, и ДНК, то есть полимеразы не нужны. Такие вирусы называют плюс-нитевые Двухступенчатый процесс – минус-нитевые РНК-вирусы – имеют в своем составе РНК- зависимую РНК-полимеразу Трехступенчатый процесс – как правило, фермента РНК зависимой ДНК-полимеразы (=ревертаза) в клетке нет, поэтому есть у вируса – это ретровирусы - пример ВИЧ – плюс- нитевые диплоидные РНК-вирусы. В цитоплазме пораженной клетки с РНК синтезируется ДНК вируса Атипичные вирусы и вирусоподобные объекты: 1. Дефектные вирусы – это вирусы, которые не могут сами воспроизводится без вируса- помощника (дефект в гене репликации) – пример вирус гепатита Д (=дельта-вирус) – ему нужен вирус-хозяин – своего рода паразит вируса гепатита Б (образует в процессе развития много лишних суперкапсидов, в которые залезает дельта-вирус, в результате чего активируется и переводит гепатит в очень злокачественную стадию) 2. Псевдовирионы – ложные вирусы тоже не реплицируются. если заглянуть внутрь, под капсид, то там вместо вирусной НК находится ДНК клетки-хозяина – патогенной функции не несут и со временем исчезают 3. Вироиды – патогены растений – они очень малы и не кодируют белки вообще, но реплицируются (механизм не установлен), только собравшись в три части вызывают патологический процесс в растении 36. Методы культивирования вирусов. Способы бактериальной деконтаминации биосубстратов перед вирусологическим исследованием.Индикация = неспецифическое обнаружение факта вирусного инфицирования – это выявление свойственных вирусам биологических свойств и их взаимодействие с клетками-мишенями Цитопатический эффект (полная дегенерация, образование симпласта – многоядерных гигантских клеток, круглоклеточная дегенерация, пролиферативный тип – несколько слоев клеток – онковирусы), бляшкообразование Образование включений Гемагглютинация Интерференция: если вирусы не способны вызывать видимых дегенеративных проявлений со стороны клеток, то клеточные культуры параллельно заражают другими вирусами, способными вызывать ЦПД (вирусы краснухи, крымской геморрагической лихорадки) Гибель куриного эмбриона Проявление инфекции и гибель животного Идентификация = установление вида или типа вируса – с помощью иммунологических реакций или молекулярно-биологических методов РИФ (экспресс-диагностика), иммунная электронная микроскопия, ИФА, иммуноблотинг, РИА, ПЦР, ДНК-гибридизация Вирусы не культивируются на искусственных питательных средах, даже самых богатых, потому что они молекулярно-генетические паразиты живых клеток 1. В культурах клеток, в основном в перевиваемых КК (напр, клетки HeLa, Henrietta Laks, ум. в 1951 г.) – сначала использовали одноразновые трипсинизированные клетки (выживали один цикл), которые помещали в жидкую среду, содержащую АБ, аминокислоты) Клетки HeLa – злокачественные многоразовые клетки. Получены от женщины (31 год) с раком шейки матки, перед смертью брали материал из опухоли и обнаружили, что они очень хорошо растут ин витро, то есть их можно пересевать как бактерии. С помощью этих клеток сделали вакцины от полиемиелита, гепатита Б и другие открытия 2. В куриных эмбрионах (вирус гриппа для создания вакцин, лучше всего размножается в аллантоисных оболочках – затем собирают вирус из аллантоисной жидкости и создают условия якобы эмбрион выносит курица) 3. В организме восприимчивых животных (вирус клещевого энцефалита – новорожденные мышата, самый ранний способ, но не во всех случаях животное можно заразить) 4. Среда 199 - культивирование первинно-трипсинизированных и перевиваемых культур клеток Цели: диагностика, получение вакцин, научные |