клинбиохметод. Лекции по клинической биохимии караганда 2003 удк 616 577 (075. 8) Рецензенты
Скачать 0.78 Mb.
|
1.2 Ферменты мочиНачало исследованию активности ферментов в моче положил Wohlgemuth, предложивший в 1908 г. тест определения активности -амилазы мочи с целью диагностики острого панкреатита. В настоящее время в моче обнаружено около 40 ферментов, однако большое клинико-диагностическое значение приобрело определение активности лишь немногих из них. Ферменты мочи могут иметь различное происхождение. Часть из них попадает в мочу из плазмы крови путем гломерулярной фильтрации. Фильтрационный барьер в почечном клубочке трехслойный: первый слой представляет собой фенестральный эндотелий капилляров клубочка, имеющий поры диаметром 60–100 нм, местами прикрытые и не прикрытые диафрагмой; второй слой составляет базальная мембрана клубочка, толщиной 320–340 нм – основной барьер, определяющий избирательность процесса фильтрации; третий слой – это покрывающий капилляры эпителий. Он образован подоцитами, между ножками которых имеются затянутые диафрагмами фильтрационные щели шириной 20–30 нм. Эффективность фильтрационного барьера зависит от филь-трационной способности каждого слоя в отдельности, а также от скорости кровотока вдоль его внутренней поверхности (в условиях нормального кровотока поры шириной 7 нм закрыты более крупными молекулами – макромолекулами) и электрического заряда молекул. В норме в мочу попадают ферменты с молекулярной массой менее 70 кД – -амилаза, лизоцим, рибонуклеаза, а также небольшое количество низкомолекулярных форм микросомной аминопептидазы и высокомолекулярных ферментов – аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, кислая фосфатаза, лейцинаминопептидаза, лактатдегидрогеназа, малатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза. При патологических условиях фильтрации в моче обнаруживается активность многих других как высоко-, так и низкомолекулярных ферментов. Для определения состояния гломерулярной фильтрации достаточно оценить активность холинэстеразы (ХЭ) в моче, так как этот фермент в почечной ткани практически отсутствует. В норме фермент в моче не содержится, поскольку не проходит через гло-мерулярный фильтр (молекулярная масса 348 кД). Выявлена связь между экскрецией ХЭ с мочой и селективной протеинурией у больных с нефротическим синдромом, а также достоверное повышение активности ХЭ в моче при смешанной форме гломерулонефрита. К числу тех ферментов, которые проходят через гломерулярный фильтр и частично реабсорбируются в почечных канальцах, относится альфа-амилаза. Поэтому ее активность в моче коррелирует с реабсорбционной способностью эпителия проксимального отдела нефрона. В клубочках почек найдено лишь небольшое содержание ферментов. Считается, что наибольшее количество их поступает в мочу из проксимального отдела нефрона. Так, например, установлено, что около 50% ЛДГ поступает в мочу из проксимального отдела нефрона, 18% – из дистального, 21% – из мозгового вещества и только 5% – из почечного тельца. Повышение в моче активности тех или иных ферментов отражает повреждение или повышение проницаемости мембран почечных канальцев. В зависимости от глубины повреждения в мочу выделяются ферменты, имеющие различную субклеточную локализацию. При незначительном нарушении почечной ткани в моче возрастает активность ферментов, связанных преимущественно с плазматической мембраной, при выраженной деструктуризации повышается активность цитоплазматических и лизосомальных ферментов. Значительное увеличение активности митохондриальных ферментов в моче соответствует некрозу клеток почечной ткани. Активность ГГТП мочи особенно тесно коррелирует с активностью патологического процесса в ткани почек, так как этот фермент частично локализован в плазматической мембране, а частично – в комплексе Гольджи. Большую группу составляют ферменты, попадающие в мочу из плазмы крови, других клеток и тканей. Среди них ферменты: а) клеток крови – в лейкоцитах содержатся кислая фосфатаза, лактатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза, -глюкуронидаза, а в эритроцитах – преимущественно лактатдегидрогеназа; б) опухолевых клеток: богаты -глюкуронидазой, альдолазой, лактатдегидрогеназа, -глутаминтранспептидазой и щелочной фосфатазой (определение активности этих энзимов в моче используется для диагностики опухолей, хотя практически ни один из них до сих пор не оправдал себя как надежный маркер опухоли); в) бактерий, содержащих в большом количестве каталазу и -глюкуронидазой (степень бактериурии не коррелирует с уровнем ферментурии). В настоящее время определение активности ферментов в моче используют для: распознавания типа повреждения нефрона при почечной и внепочечной патологии; констатации отторжения почечного трансплантата; оценки токсического действия лекарств на почки; диагностики латентной (скрытой) нефропатии на основании регистрации увеличения экскреции ферментов с мочой после приема лизосомотропных веществ; улучшения распознавания инфекционных заболеваний почек и мочевого пузыря; выявления нефроптоза; диагностики опухолей почек. По данным большинства авторов, при заболеваниях почек отсутствует тесная корреляция между активностью ферментов в плазме (сыворотке) крови и моче, выявление их в моче оказывается значительно более информативным, чем определение активности в крови. Фермент, определение активности которого пригодно для диагностики поражений почек, должен находиться в почечной ткани, но практически отсутствовать в нижнем отделе мочевыводящих путей; иметь достаточно высокую молекулярную массу в отличие от таковой ферментов других органов. Желательно, чтобы было минимальным влияние на его активность компонентов мочевого осадка и мочевой микрофлоры. К тому же он не должен терять активность при хранении; в моче не должно находиться ни активаторов, ни ингибиторов определяемых ферментов. Гиперферментурия встречается как при соматических, так и при онкологических заболеваниях. Надежность лабораторных исследований во многом зависит от условий сбора и хранения мочи. Для сбора мочи предлагались разные интервалы времени – 24, 8, 4ч, большинством авторов признан оптимальным промежуток 3 ч, так как за этот срок активность ферментов в собранной моче изменяется в меньшей степени. С целью устранения влияния на экскрецию ферментов с мочой циркадных ритмов рекомендуется собирать утреннюю порцию мочи (6–9 ч). Оказалось сложным определить, в каких именно единицах следует выражать активность ферментов мочи для того, чтобы уменьшить искажающее результаты влияние диуреза. Предлагалось выражать активность ферментов в единицах, соотнесенных либо с объемом пробы мочи, либо со временем сбора ее (12 или 24 ч). Наиболее достоверные результаты получены при выражении ферментативной активности, отнесенной к 1 г креатинина, так как концентрация последнего в моче коррелирует со степенью гломерулярной фильтрации. Активность ферментов в значительной мере зависит от рН мочи, колеблющегося даже в физиологических условиях. Для сохранения ферментативной активности в моче ее оставляют стоять 3 ч при температуре 4°С, затем центрифугируют для осаждения солей, доводят рН до 7,0 и добавляют глицерин (30 мл/л). Оказалось, что такие ферменты, как НАГ, ААП, ГГТ и ЛДГ, сохраняют активность в моче постоянной при температуре -20°С в течение года. |