Главная страница

клинбиохметод. Лекции по клинической биохимии караганда 2003 удк 616 577 (075. 8) Рецензенты


Скачать 0.78 Mb.
НазваниеЛекции по клинической биохимии караганда 2003 удк 616 577 (075. 8) Рецензенты
Дата13.10.2021
Размер0.78 Mb.
Формат файлаdoc
Имя файлаклинбиохметод.doc
ТипЛекции
#246814
страница2 из 32
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   32

1.2 Ферменты мочи


Начало исследованию активности ферментов в моче положил Wohlgemuth, предложивший в 1908 г. тест определения активности -амилазы мочи с целью диагностики острого панкреатита. В настоящее время в моче обнаружено около 40 ферментов, однако большое клинико-диагностическое значение приобрело определение активности лишь немногих из них.

Ферменты мочи могут иметь различное происхождение. Часть из них попадает в мочу из плазмы крови путем гломерулярной фильтрации. Фильтрационный барьер в почечном клубочке трехслойный: первый слой представляет собой фенестральный эндотелий капилляров клубочка, имеющий поры диаметром 60–100 нм, местами прикрытые и не прикрытые диафрагмой; второй слой составляет базальная мембрана клубочка, толщиной 320–340 нм – основной барьер, определяющий избирательность процесса фильтрации; третий слой – это покрывающий капилляры эпителий. Он образован подоцитами, между ножками которых имеются затянутые диафрагмами фильтрационные щели шириной 20–30 нм.

Эффективность фильтрационного барьера зависит от филь-трационной способности каждого слоя в отдельности, а также от скорости кровотока вдоль его внутренней поверхности (в условиях нормального кровотока поры шириной 7 нм закрыты более крупными молекулами – макромолекулами) и электрического заряда молекул. В норме в мочу попадают ферменты с молекулярной массой менее 70 кД – -амилаза, лизоцим, рибонуклеаза, а также небольшое количество низкомолекулярных форм микросомной аминопептидазы и высокомолекулярных ферментов – аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, кислая фосфатаза, лейцинаминопептидаза, лактатдегидрогеназа, малатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза. При патологических условиях фильтрации в моче обнаруживается активность многих других как высоко-, так и низкомолекулярных ферментов.

Для определения состояния гломерулярной фильтрации достаточно оценить активность холинэстеразы (ХЭ) в моче, так как этот фермент в почечной ткани практически отсутствует. В норме фермент в моче не содержится, поскольку не проходит через гло-мерулярный фильтр (молекулярная масса 348 кД). Выявлена связь между экскрецией ХЭ с мочой и селективной протеинурией у больных с нефротическим синдромом, а также достоверное повышение активности ХЭ в моче при смешанной форме гломерулонефрита. К числу тех ферментов, которые проходят через гломерулярный фильтр и частично реабсорбируются в почечных канальцах, относится альфа-амилаза. Поэтому ее активность в моче коррелирует с реабсорбционной способностью эпителия проксимального отдела нефрона.

В клубочках почек найдено лишь небольшое содержание ферментов. Считается, что наибольшее количество их поступает в мочу из проксимального отдела нефрона. Так, например, установлено, что около 50% ЛДГ поступает в мочу из проксимального отдела нефрона, 18% – из дистального, 21% – из мозгового вещества и только 5% – из почечного тельца.

Повышение в моче активности тех или иных ферментов отражает повреждение или повышение проницаемости мембран почечных канальцев. В зависимости от глубины повреждения в мочу выделяются ферменты, имеющие различную субклеточную локализацию. При незначительном нарушении почечной ткани в моче возрастает активность ферментов, связанных преимущественно с плазматической мембраной, при выраженной деструктуризации повышается активность цитоплазматических и лизосомальных ферментов. Значительное увеличение активности митохондриальных ферментов в моче соответствует некрозу клеток почечной ткани. Активность ГГТП мочи особенно тесно коррелирует с активностью патологического процесса в ткани почек, так как этот фермент частично локализован в плазматической мембране, а частично – в комплексе Гольджи.

Большую группу составляют ферменты, попадающие в мочу из плазмы крови, других клеток и тканей. Среди них ферменты:

а) клеток крови – в лейкоцитах содержатся кислая фосфатаза, лактатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза,  -глюкуронидаза, а в эритроцитах – преимущественно лактатдегидрогеназа;

б) опухолевых клеток: богаты  -глюкуронидазой, альдолазой, лактатдегидрогеназа,  -глутаминтранспептидазой и щелочной фосфатазой (определение активности этих энзимов в моче используется для диагностики опухолей, хотя практически ни один из них до сих пор не оправдал себя как надежный маркер опухоли);

в) бактерий, содержащих в большом количестве каталазу и  -глюкуронидазой (степень бактериурии не коррелирует с уровнем ферментурии).

В настоящее время определение активности ферментов в моче используют для:

  • распознавания типа повреждения нефрона при почечной и внепочечной патологии;

  • констатации отторжения почечного трансплантата;

  • оценки токсического действия лекарств на почки;

  • диагностики латентной (скрытой) нефропатии на основании регистрации увеличения экскреции ферментов с мочой после приема лизосомотропных веществ;

  • улучшения распознавания инфекционных заболеваний почек и мочевого пузыря;

  • выявления нефроптоза;

  • диагностики опухолей почек.

По данным большинства авторов, при заболеваниях почек отсутствует тесная корреляция между активностью ферментов в плазме (сыворотке) крови и моче, выявление их в моче оказывается значительно более информативным, чем определение активности в крови.

Фермент, определение активности которого пригодно для диагностики поражений почек, должен находиться в почечной ткани, но практически отсутствовать в нижнем отделе мочевыводящих путей; иметь достаточно высокую молекулярную массу в отличие от таковой ферментов других органов. Желательно, чтобы было минимальным влияние на его активность компонентов мочевого осадка и мочевой микрофлоры. К тому же он не должен терять активность при хранении; в моче не должно находиться ни активаторов, ни ингибиторов определяемых ферментов.

Гиперферментурия встречается как при соматических, так и при онкологических заболеваниях.

Надежность лабораторных исследований во многом зависит от условий сбора и хранения мочи. Для сбора мочи предлагались разные интервалы времени – 24, 8, 4ч, большинством авторов признан оптимальным промежуток 3 ч, так как за этот срок активность ферментов в собранной моче изменяется в меньшей степени. С целью устранения влияния на экскрецию ферментов с мочой циркадных ритмов рекомендуется собирать утреннюю порцию мочи (6–9 ч). Оказалось сложным определить, в каких именно единицах следует выражать активность ферментов мочи для того, чтобы уменьшить искажающее результаты влияние диуреза. Предлагалось выражать активность ферментов в единицах, соотнесенных либо с объемом пробы мочи, либо со временем сбора ее (12 или 24 ч). Наиболее достоверные результаты получены при выражении ферментативной активности, отнесенной к 1 г креатинина, так как концентрация последнего в моче коррелирует со степенью гломерулярной фильтрации. Активность ферментов в значительной мере зависит от рН мочи, колеблющегося даже в физиологических условиях.

Для сохранения ферментативной активности в моче ее оставляют стоять 3 ч при температуре 4°С, затем центрифугируют для осаждения солей, доводят рН до 7,0 и добавляют глицерин (30 мл/л). Оказалось, что такие ферменты, как НАГ, ААП, ГГТ и ЛДГ, сохраняют активность в моче постоянной при температуре -20°С в течение года.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   32


написать администратору сайта