Микра методичка. Методические указания к практическим занятиям по микробиологии с иммунологией и вирусологией для студентов

• Название: Методические указания к практическим занятиям по микробиологии с иммунологией и вирусологией для студентов
• Дата: 04.05.2021
• Размер: 1.32 Mb.
• Имя файла: Микра методичка.pdf
• Тип: Методические указания; #201488
• страница: 14 из 14

in vitro. Для этой цели чаще всего применяют реакцию бласттрансформации. Она основана на способности малых лимфоцитов при культивировании их in vitro превращаться под влиянием митогенного стимула в бластные формы, проявляющие при этом большую митогенную активность. В качестве митогенного стимула могут быть использованы аллогенные антигены гистосовместимости (микст-культура лимфоцитов - MLC) или некоторые субстанции растительной или бактери-

90 альной природы. Среди митогенов выделяют митогены для Т-лимфоцитов (ФГА и Кон А), и митогены для В-лимфоцитов (ЛПС клеточной стенки бактерий и PWM – из растения фитолаки).
Оценка Т-клеточной системы иммунитета (клеточный иммунитет)
1. Определение общего числа лимфоцитов.
2. Определение числа зрелых Т-лимфоцитов (CD3) и их субпопуляций – хелперов (CD4) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8).
3. Определение реакции Т-лимфоцитов на ФГА (Т-митоген) в реакции бласттрансформации (РБТЛ).
4. Определение соотношения CD4/ CD8.
5.Постановка кожных проб ГЗТ.
6. Дополнительные уточняющие методы:
- определение CD25 (рецептор ИЛ-2) и HLA-DR на Т-лимфоцитах
- исследование продукции цитокинов (γ-интерферона, ИЛ-2,-4,-6 и ФНО);
- определение пролиферативного ответа на специфический антиген в РБТЛ;
-определение готовности клеток к апоптозному антигену Fas-CD95, находяшемуся на Т-хелперах, на CD8-лимфоцитах имеется Fas-лиганд–FasL.
Оценка В-клеточной системы иммунитета (гуморальный имунитет)
1.
Определение числа В-лимфоцитов (CD20 или CD19).
2.
Определение количества неспецифических иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG, IgE) методом радиальной иммунодиффузии (реакция Манчини).
3.
Определение циркулирующих в крови иммунных комплексов.
4.
Определение функциональной активности лимфоцитов с помощью реакции бластной трансформации лимфоцитов на В-клеточный митоген (LPS, PWM)
5.
Дополнительные уточняющие методы:
- определение количества специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG, IgE);
- определение продукции интерлейкина-6;
- определение секреторного IgA.
Показатели системы комплемента
Определение компонентов комплемента (C1q, C1, C3, C4, C5 и др.) в сыворотке крови и функциональной активности комплемента (СН50).
Система фагоцитов (нейтрофилов).
1. Определение числа нейтрофилов.
2. Опреление фагоцитарного числа (процент клеток, участвующих в фагоцитозе) и индекса фагоцитоза
(число микробов, захваченных одной клеткой).
3. Определение бактерицидности фагоцитов.
4. Дополнительные уточняющие тесты:
- определение активности хемотатксиса фагоцитов;
- опреление способности нейтрофилов к адгезии к пластику и наличия клеток с адгезивными молекулами CD11/ CD18.
ДЕМОНСТРАЦИИ:
1. Микропрепараты реакции бласттрансформации лимфоцитов
2. Реакция Манчини на стеклах с агарозным гелем для определения разных классов иммуноглобулинов.
3. Наборы вакцинных препаратов; наборы иммунных сывороток, гаммаглобулинов (лечебных и диагностических). Набор аллергенов.
4. Наборы эубиотиков, бактериофагов, цитокинов.
5. Таблицы, схемы, рисунки.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА:
1. Микроскопия препаратов с реакцией бласттрансформации

91 2. Учет реакции радиальной иммунодиффузии (р.Манчини) для определения уровня различных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови.
3. Оценка иммунного статуса по готовым бланкам иммунограммы больных.
4. Знакомство с наборами вакцинных препаратов, иммунных сывороток, иммуноглобулинов, аллергенов, неспецифических иммуномодуляторов.
5. Знакомство с препаратами эубиотиков, бактериофагов, цитокинов.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1.
Что такое иммунный статус человека, какие показатели его характеризуют?
2.
В каких случаях изучают иммунный статус?
3.
Иммунодефицитные заболевания: принципы классификации, этиология и патогенез их развития.
4.
Аутоиммунные заболевания: причины возникновения, применение иммунологических методов для их диагностики
5.
По каким маркерам можно отличить Т- и В-лимфоциты?
6.
Что такое антигены дифференцировки (CD-антигены), каково их практическое значение в клинической иммунологии, как их определить?
7.
Что такое мембранные иммуноглобулины, для каких клеток они характерны и как их определить?
8.
Как определить функциональную активность Т- и В-лимфоцитов in vitro и in vivo?
9.
Что такое реакция боласттрансформации?
10.
Какие митогены применяются в клинической иммунологии и с какой целью? (Классификация и примеры).
11.
Как оценивается функциональная активность В-звена иммунной системы?
12.
В чем суть реакции радиальной иммунодиффузии (р. Манчини) и с какой целью она ставится ?
13.
Каковы принципы иммунокоррекции первичных и вторичных иммунодефицитов?
14.
Что такое вакцины (классификация) и каковы принципы их получения?
15.
В каких случаях применяются лечебные вакцины?
16.
Что такое химическая вакцина?
17.
Каковы принципы получения генно-инженерных вакцин?
18.
В каких случаях используется такой метод их получения?
19.
Что такое анатоксин, как он получается и для чего применяется?
20.
Что такое адъюванты, для чего они применяются, каков механизм их действия?
21.
Что такое «адъювантная» болезнь, в каких случаях она может возникать?
22.
Что такое «календарь прививок», какие вакцины при этом применяются?
23.
Что такое «коллективный» иммунитет, как он создается и какое это имеет значение для предупреждения инфекционных заболеваний?
24.
Какими недостатками обладают современные вакцины и каковы пути их устранения?
25.
Как получить иммунные сыворотки и для чего они применяются?
26.
Что такое гомологичные и гетерологичныке гаммаглобулины, как они получаются, для чего используются?
27.
Какие осложнения могут возникать у пациента после введения гетерологичных сывороточных препаратов и как их избежать?
28.
Какие препараты применяются для неспецифической иммунокоррекции и каков механизм их действия?

92