|
|
практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
Обмен веществ может изучаться на разных уровнях (уровень всего организма, клеточный уровень и т.д.) и различными методами. Основные методы, которые применяют в КДЛ, приведены в таблице.
Метод.
|
Сущность метода.
|
Приборы.
|
Примеры.
|
Фотоэлектро
Колориметрический.
|
Сравнение интенсивности окраски исследуемого раствора с окраской раствора, концентрация которого известна (стандартного раствора).
|
Фотоэлектро
колориметр (ФЭК).
|
Определение общего белка, глюкозы, ТАГ в сыворотке и плазме крови.
|
Спектрофото
метрический
|
Определение количества вещества в растворе или твердой среде по измерению светопоглощения волн строго определенной длины.
|
Спектрофото
Метр.
|
Определение количества ионов Nа, К и т. д. В сыворотке и плазме крови.
|
Потенциометрический.
|
Измерение разности потенциалов между парой подходящих электродов, погруженных в анализируемый раствор.
|
Потенциометр.
|
Определение рН крови.
|
Электро-
форез.
|
Разделение смеси, состоящей из молекул несущих заряд, на составные компоненты.
|
|
Определение количества белковых фракций, изоферментов, в сыворотке и плазме крови.
|
Хроматография.
|
Разделение смесей на составные части с помощью адсорбентов (твердых, жидких, газов, гелей)
|
Хроматограф.
|
Определение количества липопротеидов в сыворотке и плазме крови.
|
В настоящее время в КДЛ для проведения биохимических анализов используют специальные полуавтоматические или автоматичесие анализаторы, которые могут определять от одного до нескольких десятков исследований.
В научных лабораториях, для изучения работы организма используют и другие, более современные методы исследований, например использование изотопов, электронная микроскопия, ультрацентрифугирование и др.
1.6.Международная система единиц измерения
в лабораторных исследованиях.
Международная система единиц (СИ) как единая система для всех отраслей науки, техники и производства была принята в 1960 г. XI Генеральной конференцией по мерам и весам. XXX сессия Всемирной Ассамблеи здравоохранения, состоявшейся в 1974 г., рекомендовала принять СИ во всех областях медицины, включая практическое здравоохранение.
В основу СИ положена метрическая система. Международная система включает основные физические величины.
Величины.
|
Единица.
|
Наименование.
|
Обозначение.
|
Русское.
|
Международное.
|
Длина.
|
Метр
|
м
|
М
|
Масса.
|
Килограмм
|
кг
|
кg
|
Время.
|
Секунда
|
с
|
S
|
Сила тока.
|
Ампер
|
А
|
A
|
Количество вещества.
|
Моль
|
Моль
|
мol
|
Термодинамическая температура.
|
кельвин
|
К
|
К
|
Наряду с основными единицами в СИ входят и их производные, которые образуются из основных в соответствии с правилами СИ.
Для упрощения работы можно использовать приставки и множители для образования десятичных кратных и дольных единиц.
Приставки.
|
Обозначение.
|
Множители.
|
Русское.
|
Международное.
|
Мега
|
м
|
м
|
10
|
Кило
|
к
|
к
|
10
|
Гекто
|
г
|
h
|
10
|
Дека
|
да
|
da
|
10
|
Деци
|
д
|
d
|
10
|
Санти
|
с
|
c
|
10
|
Милли
|
м
|
m
|
10
|
Микро
|
мк
|
mk
|
10
|
Нано
|
н
|
n
|
10
|
Пико
|
п
|
p
|
10
|
Существует следующая соразмерность:
Масса. 1 кг = 1 000 г = 1 000 000 мг = 1 000 000 000 мкг.
Объем. 1 л = 10 дл (децилитр) = 100 сл (мантилитр) = 1000 мл = 1 000 000 мкл. Запомните: 1 мл = 1,028 см3.
Количество вещества. 1 моль = 1 000 ммоль = 1 000 000 мкмоль.
Время. 1 ч = 60 мин = 1800 с. 1 мин = 60 с.
Результаты биохимических исследований должны выражаться только в основных единицах или их производных:
Концентрация вещества с известной молекулярной массой в биологических жидкостях (кроме мочи) следует выражать в молях или его долях на литр (моль/л, ммоль/л, мкмоль/л, нмоль/л и т.д.).
В тех случаях, когда молекулярная масса вещества не известна или не может быть определена (в смеси), результат определения нужно выражать в единицах измерения массы на литр (г/л, мг/л и т.д.).
Выведение различных веществ с мочой выражается в долях моля за сутки (если относительная молекулярная масса известна) или в единицах массы за сутки (если относительная молекулярная масса неизвестна).
Плотность веществ указывается в г/л, клиренс в мл/с.
Единицей выражения активности ферментов является «катал» (кат), кат/л = моль/(с*л), мкат/л = ммоль/(с*л), мккат/л = мкмоль/(с*л). В старых методиках еще используют величину измерения активности ферментов МЕ/л= мкмоль/(мин*л).
Для перевода из одних единиц измерения в другие существуют коэффициенты пересчета, например:
нкат/л = 0,06 * мкмоль/(мин*л) или нкат/л = 0,06*МЕ/л.
мкмоль/(мин*л) = 16,67 * нкат/л.
Ранее принятые единицы количества вещества мг% можно пересчитать: 10* мг% = г/л, 17,104*мг% = мкмоль/л, 0,0555*мг% = ммоль/л.
1.7.Техника безопасности при работе в лаборатории.
Правила по охране труда и ТБ направлены на предупреждение опасных и вредных производственных факторов, связанных с особенностями работы в лаборатории, основные из них следующие:
Химические факторы – возникают при работе с реактивами.
Физические факторы – возникают при работе с приборами и аппаратами.
Биологические факторы – возникают при работе с инфицированным биологическим материалом.
В лаборатории нужно соблюдать следующие общие требования:
Работать только в спецодежде – халате, колпачке и сменной обуви.
Приступать к работе только после вводного инструктажа и первичного инструктажа на рабочем месте. Повторный инструктаж проводится не реже 1 раза в 6 месяцев.
Перед работой внимательно ознакомиться с методикой проведения анализа и в соответствии с этим подготовить свое рабочее место.
Перед работой следует убедиться в том, что:
правильно уяснена методика,
правильно подготовлены приборы и оборудование,
взятые вещества соответствуют методике анализа,
все расставлено так, чтобы было удобно достать, не вставая с места, и самое необходимое находится в пределах оптимальной рабочей зоны, соответствующей размаху согнутой в локтевом суставе руки.
Работать только на закрепленном месте.
Рабочее место содержать в чистоте, не загромождать его не нужными предметами.
Во время работы соблюдать тишину, порядок и чистоту.
Не допускать торопливости, невнимательности, беспорядочности и неряшливости.
Не покидать рабочее место во время проведения анализа, не оставлять без присмотра включенные приборы.
Запрещается выполнять работы не связанные с непосредственной работой в лаборатории.
Соблюдать правила ТБ при работе с кислотами, щелочами, летучими и ядовитыми веществами, инфицированным материалом, нагревательными приборами.
Соблюдать правила противопожарной безопасности.
Не наклоняться близко над склянками с реактивами (правильно нюхайте!).
Работать с реактивами только над столом.
Пипетировать вещества только пипеткой с грушей или дозатором.
Запрещено выливать вещества в канализацию, для этого предусмотрены специальные банки.
Не пробовать на вкус в лаборатории любые вещества, даже если они кажется вам знакомыми.
В лаборатории запрещается принимать пищу!
После работы обязательно вымыть руки с мылом!
После работы убрать все приборы и реактивы по местам, выключить все электроприборы, закрыть форточки, краны водоснабжения и протереть рабочий стол.
Уметь оказывать первую медицинскую помощь.
Профилактика профессиональных заражений, связанных с работой с инфицированным материалом, является одной из важнейших задач в работе лаборанта. Меры профилактики сводятся к максимальному предотвращению контактов кожи и слизистых оболочек с кровью и другими биологическими жидкостями, для чего необходимо придерживаться следующих правил:
Работать в спецодежде: халате, шапочке, сменной обуви, резиновых перчатках. При угрозе разбрызгивания крови работать в очках, маске, клеенчатом фартуке.
Повреждения на коже (порезы, царапины) перед работой нужно обязательно заклеить лейкопластырем.
Запрещается пипетирование биологического материала ртом. Обязательно нужно использовать автоматические пипетки или резиновые груши.
Запрещается есть, пить, курить и пользоваться косметикой на рабочем месте.
В случае загрязнения рук кровью их следует немедленно обработать тампоном, смоченным 1 % раствором хлорамина или 70 % раствором спирта в течение 2 минут, а затем вымыть проточной водой с мылом и протереть индивидуальным полотенцем.
При загрязнении кровью перчаток, их протирают тампоном, смоченным в 3 % растворе хлорамина или 6 % перекисью водорода.
При загрязнении стола кровью, его немедленно протирают дезраствором дважды с интервалом 15 минут.
После работы перчатки дезинфицируют в течении 60 минут в одном из дезинфицирующих растворов.
После работы поверхность рабочего стола обязательно продезинфицировать – промыть ветошью смоченной в одном из дезрастворов.
Лабораторный инструментарий, иглы, капилляры, предметные стекла, кюветы ФЭКа, пипетки, резиновые груши и т.д. после работы должны подвергаться дезинфекции и стерилизации.
Для дезинфекции можно применять следующие растворы:
Хлорамин 3 %.
Перекись водорода 6 %.
Моющий раствор (0,5 % раствор СМС и 6 % перекись водорода).
Осветленный раствор хлорной извести 0,6 %.
Сульфохлорантин 0,5 %.
Дезоксон-1 0,5% и т.д.
В настоящее время в лаборатории могут применяться другие, более современные дезинфицирующие средства.
1.8. Практическая работа
«Правила работы с лабораторным оборудованием».
Цели практической работы:
изучить особенности техники безопасности при работе в биохимической лаборатории;
закрепить умения работать химической пипеткой, мерным цилиндром и др. лабораторной посудой;
закрепить умения готовить растворы приблизительной концентрации.
Задания для самостоятельной работы:
Законспектируйте в тетрадь правила техники безопасности при работе в биохимической лаборатории и правила работы с биологическим материалом в КДЛ.
Оборудуйте рабочее место для практической работы согласно методике работы.
Выполните практическую работу.
Оформите результаты работы в тетради по плану:
Название работы.
Задание к работе.
Рисунок.
Наблюдения, расчеты, уравнения реакций и т.д.
Сделайте вывод по работе.
Ответьте на предложенные вопросы.
Реактивы:
Сульфат меди (сухой).
Гидроксид натрия (сухой).
Серная кислота (конц).
Дистиллированная вода.
|
Оборудование:
Пипетки на 1 и 2 мл.
Пробирки – 5 шт.
Баночка для воды.
Мерный цилиндр.
Химический стаканчик.
Весы и разновесы.
Стеклянная палочка.
Колба.
Фильтр.
Воронка.
|
Задание № 1. Работа с пипетками.
Подготовьте пипетки с резиновой грушей на 1 мл или на 2 мл.
Вспомните, как определяется цена деления мерной посуды.
Подготовьте 5 пробирок и баночку с водой.
Налейте в каждую пробирку по 4 мл воды, используя груши на 1 или 2 мл. Работайте медленно. Помните, в работе лаборанта очень важна аккуратность и точность!
Слейте всю воду из пробирок в мерный цилиндр, и измерь количество воды.
Если воды в цилиндре меньше или больше, чем 20 мл, то повторите всю операцию с самого начала.
Если воды в цилиндре ровно 20 мл, то приступайте к выполнению следующего задания.
Задание № 2. Приготовление растворов.
Произведите расчеты, необходимые для приготовления следующих растворов:
20 мл 5 % раствора сульфата меди.
25 мл 10 % раствора гидроксида натрия.
25 мл 5 % раствора серной кислоты.
Приготовьте один из предложенных растворов.
Напишите алгоритм приготовления растворов приблизительной концентрации.
Ответьте на вопросы:
Какой биологический материал можно использовать для биохимических исследований?
Чем отличается цельная кровь, сыворотка и плазма крови?
Как определить цену деления мерной полсуды (на примере цилиндра или пипетки).
Как правильно работать со спиртовкой и другими нагревательными приборами.
Фильтрование: приборы, правила проведения, промывание осадков.
Правила приготовления растворов приблизительной и точной концентрации.
Правила приготовления и хранения растворов кислот, щелочей и солей.
*На чем основаны методы лабораторных исследований (расскажите с использованием примеров).
*Перечислите основные этапы лабораторных исследований. Какие ошибки возможны на каждом из них? Почему?
*Перечислите правила хранения и транспортировки биологического материала.
*Единицы измерения в лабораторной диагностике. Что обозначает запись: гликемия 5,2 ммоль/л, общий белок 65 г/л.
Раздел 2. Химия биоорганических соединений.
|
|
|
Скачать 1.34 Mb.