практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика

• Название: Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
• Анкор: практикум по биохимии Перфильева,Черемнова.doc
• Дата: 23.11.2017
• Размер: 1.34 Mb.
• Имя файла: практикум по биохимии Перфильева,Черемнова.doc
• Тип: Методическое пособие; #10387
• страница: 3 из 19

Значение изучаемой темы:

В разделе «Химия биоорганических соединений» рассматриваются вещества (белки, жиры, углеводы, нуклеиновые кислоты, гормоны), которые играют важнейщую роль в жизнедеятельности организма. Основная цель раздела изучить строение, свойства, классификацию и функции этих веществ. Полученные знания являются основой понимания биохимических процессов, протекающих в организме человека и биохимических методов исследования в КДЛ.

2.1. Практическая работа

«Цветные реакции на белки».

Цели практической работы:

• 
  закрепить знания остроении, классификации и функциях белков:
  
• 
  научиться проводить цветные реакции на белки и аминокислоты.
  

Задания для самостоятельной работы:

1. 
   Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
   
2. 
   Оборудуйте рабочее место для практической работы.
   
3. 
   Выполнитьте практическую работу.
   
4. 
   Оформитьте результаты работы в виде таблицы:
   

Название реакции. Рисунок.	Используемые реактивы.	Окрашивание. Уравнения химических реакций.	Открываемые группы.

5. 
   Сделайте вывод по работе.
   
6. 
   Ответьте на дополнительные вопросы.
   

Принцип:

Цветные реакции на белки и аминокислоты применяются для установления белковой природы вещества, идентификации белков и определения их аминокислотного состава в различных биологических жидкостях.

Реактивы: 1 % раствор яичного белка. Неразбавленный яичный белок. 10 % раствор гидроксида натрия. 1 % раствор сульфата меди. 0,5 % раствор нингидрина. Концентрированная азотная кислота. Концентрированная серная кислота. Ледяная уксусная кислота. Реактив Фоля.

Оборудование: Пробирки – 5 шт. Пипетки глазные 2 шт. Спиртовка. Спички. Пробиркодержатель – 1 шт.

Опыт 1. Биуретовая реакция.

Принцип: В основе биуретовой реакции лежит способность пептидных связей (-СО - NH -) образовывать с сульфатом меди в щелочной среде окрашенные комплексные соединения, интенсивность которых зависит от длины подипептидной цепи. Раствор белка дает сине-фиолетовое окрашивание.

Ход работы:

В пробирку налейте 5 капель 1 % раствора яичного белка, 3 капли 10 % раствора NаОН и 1 каплю 1 % pаствоpa CuSO4. Что наблюдаете?
Опыт 2. Нингидриновая реакция.

Принцип: Сущность реакции состоит в образовании соединения, окрашенного в сине-фиолетовый цвет, состоящего из нингидрина и продуктов гидролиза аминокислот. Эта реакция характерна для аминогрупп в альфа - положений, которые присутствуют в природных аминокислотах и белках.

Ход работы:

• 
  В пробирку налейте 5 капель 1 % раствора яичного белка и 5капель 0,5 % раствора нингидрина.
  
• 
  Смесь нагрейте на спиртовке до кипения. Что наблюдаете?
  

Опыт 3. Ксантопротеиновая реакция.

Принцип: При добавлении к раствору белка концентрированной азотной кислоты и нагревании появляется желтое окрашивание, которое в присутствии щелочи переходит в оранжевое. Сущность реакции заключается в нитровании бензольного кольца циклических аминокислот азотной кислотой с образованием нитросоединений, выпадающих в осадок. Реакция выявляет наличие в белке циклических аминокислот.

Ход работы:

• 
  В пробирку налейте 5 капель 1 % раствора яичного белка и З капли концентрированной азотной кислоты.
  
• 
  ОСТОРОЖНО нагрейте на спиртовке. Что наблюдаете?
  
• 
  Затем охладите под струей холодной воды и добавьте 10 капель 10 % раствора NаОН. Что наблюдаете?
  

Опыт 4. Реакция Адамкевича.

Принцип: Аминокислота триптофан в кислой среде, взаимодействуя с альдегидами кислот, образует продукты конденсации красно-фиолетового цвета.

Ход работы:

• 
  К 1 капле не разведенного яичного белка добавьте 10 капель ледяной уксусной кислоты.
  
• 
  Осторожно наслоите 0,5 мл концентрированной серной кислоты (наклоните пробирку под углом 45 и капайте кислоту на стенку пробирки).
  
• 
  Пробирку осторожно поставьте в штатив. Что наблюдаете?
  

Опыт 5. Реакция Фоля.

Принцип: Аминокислоты, содержащие сульфгидрильные группы -SH, подвергаются щелочному гидролизу с образованием сульфида натрия. Последний, взаимодействуя с плюмбитом натрия, который образуется в ходе реакции между ацетатом свинца и гидроксидом натрия, образует осадок сульфида свинца PbS черного или бурого цвета.

Ход работы:

• 
  К 5 каплям 1 % раствора яичного белка добавьте 5 капель реактива Фоля.
  
• 
  Смесь кипятите 2-3 минуты, затем охладите 1-2 мин. Что наблюдаете?