|
|
практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
Красноярский медико-фармацевтический колледж
Перфильева Г. В. , Черемнова С. И.
Методическое пособие
к практическим занятиям
по биохимии
для студентов специальности 0407 «Лабораторная диагностика».
Красноярск 2005
Красноярский медико-фармацевтический колледж
Перфильева Г. В., Черемнова С. И.
Методическое пособие
к практическим занятиям
по биохимии
для студентов специальности 0407 «Лабораторная диагностика».
Красноярск 2005
Перфильева Г. В., Черемнова С.И.
«Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии» -
Красноярск: Издательство КМФК, 2005 г. - с.
Аннотация:
Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии составлено в соответствии с требованиями ГОС СПО, квалификационной характеристикой специалиста и рабочей программой для студентов специальности 0407 «Лабораторная диагностика». Каждая глава содержит вопросы для самоподготовки по теме, описание практических работ, перечень основных терминов. Для каждой практической работы дан перечень оборудования, реактивов, описаны принцип, методика, расчеты и способы оформления, предложены вопросы для защиты работы.
Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии предназначено для студентов медицинского колледжа по специальности 0407 «Лабораторная диагностика». Оно составлено таким образом, что может быть использовано студентами для работы на практических занятиях и для самостоятельной внеаудиторной подготовки.
Рецензент:
Заведующая отделением «Лабораторная диагностика»
Питрукова О. К.
Предисловие.
Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии составлено в соответствии с требованиями ГОС СПО, квалификационной характеристикой специалиста и рабочей программой для студентов специальности 0407 «Лабораторная диагностика».
Целью настоящего пособия является освещение основных практических работ по курсу «Основы биохимии с методами клинических исследований», что должно облегчить изучение данного предмета для студентов и помочь в работе преподавателей.
Пособие состоит из 9 разделов. Каждый раздел начинается с освещения вопроса значения изучаемой темы в курсе подготовки лабораторного техника. В первом разделе освещены вопросы: ТБ при работе в лаборатории, подготовки и хранения биологического материала, принципы, тактика и методы биохимических исследований, этапы лабораторных исследований, единицы измерения в лабораторной диагностике. В разделе 2 рассмотрены практические работы, отражающие химию биоорганических соединений. В разделах 3 - 9 описаны методы исследования, преаналитический этап исследований, даны методики для определения основных компонентов крови, отражающих те или иные обменные процессы в организме. Для каждой практической работы дан перечень оборудования, реактивов, описаны принцип, методика, расчеты и способы оформления, предложены вопросы для защиты работы. Вопросы, предложенные после каждой практической работы дифференцированны, звездочкой * отмечены вопросы повышенной сложности.
Практикум по дисциплине «Основы биохимии с методами клинических исследований» позволяет более рационально организовать работу студентов и преподавателей на занятии и дома, повышает качество труда и в конечном итоге влияет на качество подготовки специалистов.
Раздел 1. Введение в биохимию.
Значение изучаемой темы:
На современном этапе развития медицины резко повысилось значение биохимических анализов. Применение новых лекарственных средств и новых методов лечения требует постоянного биохимического контроля. Биохимические анализы применяются для диагностики, контроля за состоянием пациентов (мониторинг), скрининга различных заболеваний и прогнозирования. Таким образом, главная задача биохимической лаборатории состоит в том, чтобы обеспечить врача биохимической информацией, необходимой для лечения больного. Такая информация представляет ценность только если она точна, соответствует клинической ситуации и правильно используется врачем в процессе принятия решений.
1.1. Биологический материал для биохимических исследований.
Материалом для биохимических исследований в КДЛ могут быть:
Биологические жидкости внутренних сред организма - цельная кровь, сыворотка и плазма крови, спино-мозговая жидкость, лимфаи др.
Биологические выделения (экстракты) – моча, желчь, слюна, желудочный и кишечный соки, кал, пот и др.
Для того, что бы получить данный биологический материал используют следующие методы забора:
Безинструментальный – так собирают мочу, кал, мокроту, слюну и т.д.
Пункционный – материал берут с помощью игл из вены, артерий, спинного мозга.
Прокол иглой – кровь из пальца.
Пункционная биопсия – пункция из внутренних органов.
Зондовый метод – берут желудочный сок, мочу и т.д.
Промывание легких, мочевого пузыря и т.д.
Мазки и соскобы из носовой полости, зева, слизистой матки.
Отпечатки с ран, свищей, эрозий.
Биологический материал имеет разный срок и условия хранения, например, моча храниться 4-6 часов при комнатной температуре, а сыворотка несколько дней.
Весь биологический материал является условно потогенными (инфицированными), поэтому при работе с ним следует соблюдать правила ТБ при работе с инфицированным материалом.
В основном в биохимической лаборатории работают с цельной кровью, сывороткой и плазмой крови. Их получение и способы хранения отражены в таблице.
Характеристика
биоматериала.
|
Цельная кровь.
|
Плазма.
|
Сыворотка.
|
1.Подготовка посуды.
|
Обрабатывают антикоагулянтом.
|
Должна быть сухая, чистая.
|
Должна быть сухая, чистая.
|
2.Использование специальных веществ.
|
Антикоагулянты.
|
Физиологичес
кий раствор, антикоагулянты.
|
Нет.
|
3. Отстаивание.
|
Нет.
|
30 минут.
|
30-60 минут.
|
4.Центрифугирование.
|
Не используют.
|
5 минут при 2000 об/мин.
|
15 минут при 2000 об/мин.
|
5.Условия хранения.
|
Не хранят.
|
t 0-4C –3-7 суток;
t -20С –1-3 месяца.
|
t 0-4C – 3-7 суток;
t -20С –1-3 месяца.
|
6. Исследование.
|
В течение суток.
|
В зависимости от исслед-го вещества и условий хранения - до 3 месяцев.
|
В зависимости от исследуемого вещества и условий хранения - до 3 месяцев.
|
7.Отличительные особенности.
|
Можно исследовать все компоненты крови.
|
Отсутствуют форменные элементы крови.
|
Отсутствуют форменные элементы и факторы свертывания крови (фибриноген и др.).
|
В качестве антикоагулянтов могут быть использованы следующие вещества:
Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) – связывает и эффективно удаляет ионы кальция, защищает клетки крови от разрушения. Добавляют в кровь для выполнения гематологических исследований.
Гепарин (в виде натрий гепарина или калий гепарина) - ингибирует превращение протромбина в тромбин. Используют для получения плазмы крови для биохимических исследований.
Цитрат натрия– связывает и эффективно удаляет ионы кальция. Добавляют для получения плазмы необходимой для исследования процессов свертывания крови.
Оксалат натрия или оксалат аммония – связывает и эффективно удаляет ионы кальция. Добавляют (вместе с фторидом натрия) для получения крови и исследования в ней уровня глюкозы.
Фторид натрия – ферментный яд, который прекращает метаболизацию глюкозы в крови после её сбора, т.е. сохраняет её концентрацию.
Этапы лабораторных исследований.
При лабораторных исследованиях могут возникать случайные или систематические ошибки, которые могут влиять на постановку диагноза, на лечение больного и, в конечном счете, на здоровье человека, поэтому важно соблюдать меры по их предотвращению. Для этого на всех этапах анализа соблюдают следующие правила контроля качества лабораторных исследований:
1 этап клинико-биохимических исследований - преаналитический.
На данном этапе нужно соблюдать 3 условия:
Правильное составление запроса на анализ, в котором должно быть указано следующее:
Фамилия И. О., пол и дата рождения пациента.
Имя врача (в срочных случаях с указанием телефона).
Клинический диагноз (описание проблемы).
Требуемые анализы.
Тип анализируемого материала.
Дата и время взятия пробы.
Назначенное лечение (например, медикаменты).
Строго соблюдать условия забора биологического материала:
Срок сбора, время взятия.
Подготовка обследуемого (или участка тела обследуемого).
Процедура взятия биоматериала.
Чистота посуды и материалов для забора (одноразовые шприцы).
Факторы внешней среды (особенно температура).
Наличие или отсутствие консервантов, антикоагулянтов.
Первичная обработка биоматериала.
Строго соблюдать условия транспортировки биоматериала (особенно при исследовании активности ферментов).
2 этап клинико-биохимических исследований - аналитический.
На этом этапе важно:
Правильно выбрать метод для исследования того или иного вещества. Важно чтобы метод был:
чувствительным (способность метода выявлять наименьшие различия между двумя концентрациями веществ);
специфичным (способность метода измерять лишь тот компонент, для определения которого он предназначен);
точным (степень приближения полученного значения к истинному содержанию вещества в биологической жидкости);
обладать воспроизводимостью (разброс показателей, полученных при анализе нескольких проб одного и того же образца биоматериала);
обладать диагностической ценностью (изменения данного вещества или ряда веществ в биоматериале, должно говорить о каком то определенном заболевании).
Правильно подготовить оборудование, посуду и реактивы в соответствии с методикой.
Точно выполнять исследование по методике.
Правильно проводить расчеты и интерпретировать полученные результаты.
3 этап клинико-биохимических исследований – постаналитический, на этом этапе необходимо обращать внимание на следующее:
Правильность оформления бланков анализа.
Лабораторно-клиническую интерпретацию результатов.
Доведение полученной информации до сведения лечащего врача.
1.3. Принципы биохимических исследований.
Исследования могут проводиться in vitro в пробирках различные биологические жидкости или in vivo с помощью введения в организм датчиков (например, ионоселективных электродов).
При интерпретации полученных биохимических показателей нужно помнить, что каждый отдельный определяемый компонент отражает деятельность многих органов и тканей, а также собственную функцию в организме, поэтому при диагностике заболеваний нужно учитывать комплекс различных биохимических показателей.
На некоторые биохимические показатели могут влиять внешние (смена времен года, погода, пища и т.д.) или внутренние (прием лекарственных средств, положение тела во время анализа и т.д.) факторы.
Некоторые биохимические показатели зависят от пола, возраста, характера питания, труда, образа жизни, генетических особенностей и т.д.
При решение вопроса об отклонениях биохимического показателя от нормы правильнее ориентироваться не на средние показатели, а на референтные (справочные) величины.
Следует строго соблюдать основные правила проведения биохимических исследований.
Трактуя биохимические показатели нужно учитывать условия, в которых находился больной при взятии пробы, в том числе степень физической активности, положение тела (стоя, лежа), другие диагностические обследования (например, проведение нагрузочных проб), лечебные меры (лекарства, физиолечение, хирургическое лечение).
Диагностическое значение результата биохимического исследования зависит от степени связи исследуемого параметра с патологическим процессом (нужно помнить, что большинство биохимических параметров отражает влияние не одного, а нескольких факторов заболеваний).
При диагностике большинства заболеваний нельзя опираться только на биохимические показатели, нужно учитывать и другие методы исследований. Но биохимические методы позволяют диагностировать ранние и скрытые формы некоторых заболеваний, например сахарного диабета, подагры, инфаркта миокарда, нарушений липидного обмена и др.
1.4.Основы тактики биохимических исследований.
При биохимических исследованиях следует соблюдать следующую тактику обследования пациента:
Лабораторные тесты, назначаемые пациенту, должны соответствовать основной клинической цели обследования:
Профилактика – выявление ранее не наблюдавшегося отклонения от нормы.
Диагностика или дифференциально-диагностическое обследование – установление диагноза.
Контроль за лечением (мониторинг)– оценка эффективности лечебных мер.
Прогностическое обследование, диспансерное наблюдение – оценка степени выздоровления и восстановления нарушенных болезнью функций.
Цель исследования должна определять набор, комбинацию и частоту назначения тестов.
Поиск ранее не наблюдавшейся патологии может проводиться как «вслепую», по широкому кругу тестов, так и направленно, по узкому набору тестов. Иногда в стационарах используют так называемый «вступительный скрининг», т.е. проведение каждому поступающему пациенту еще до осмотра лечащего врача заранее отобранного и установленного стандартного набора биохимических тестов.
Целесообразнее назначать биохимические тесты для дифференциальной диагностики заболевания не последовательно (растянуто во времени), а в комплексе (констелляции) тестов, которые выполняются одновременно.
Лучше использовать констелляции не только для диагностики, а для дифференциальной диагностики (набор тестов, которые способны отличить данное заболевание от ряда других похожих).
Лабораторные тесты должны назначаться с учетом их диагностической ценности на различных стадиях заболевания (скрытое течение, острая фаза, криз) и возможностей наблюдения за течением болезни.
Нагрузочные тесты (функциональные и фармакологические пробы) помогают в большей степени выявлять скрытые и неявные изменения биохимических параметров, резервные возможности систем, чем исследования в состоянии покоя. Назначать нагрузочные тесты нужно учитывая состояние больного и возможные отрицательные эффекты пробы.
При биохимическом контроле за результатами действия определенного вида лечения следует учитывать возможные влияния других лечебных воздействий, а также диагностических мероприятий.
1.5. Методы биохимических исследований в КДЛ.
|
|
|
Скачать 1.34 Mb.