|
практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
3.8. Практическая работа
«Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови».
Цели практической работы:
Задания для самостоятельной работы:
Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип:
В результате переаминирования, происходящего под действием АсАТ и АлАТ, образуются щавеливоуксусная и пировиноградные кислоты. При добавлении раствора 2,4-динитрофенилгидразина ферментативный процесс останавливается, и возникают гидразоны пировиноградной кислоты. В щелочной среде они дают окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоте.
Реактивы:
1. Эталонный раствор натрий пировинограднокислый – 2 ммоль/л.
2. 2,4 – динитрофенилгидразин – 1 ммоль/л.
3. Гидрооксид натрия - 0,4 н..
4. Субстрат АсАТ/АлАТ.
5. Сыворотка.
6.Физиологический раствор.
|
Оборудование:
1. Термостат.
2. ФЭК, кюветы на 1 см.
3. 2 пробирки.
4. Штатив для пробирок.
5. Пипетки на 1 и 5 мл.
6. Дозатор на 0.05 мл.
|
Ход определения:
Проведите исследование активности аминотрансфераз в сыворотке крови согласно таблице.
Реактивы.
|
Опытная проба, мл.
|
Контроль, мл.
|
Субстрат.
|
0.25
|
0.25
|
Физ. Раствор.
|
-
|
0.05
|
Прогреть 5 минут в термостате при 37оС.
|
Сыворотка.
|
0.05
|
-
|
Инкубировать в термостате на 30 минут при 37оС.
|
Динитрофенилгидразин.
|
0.25
|
0.25
|
Оставить стоять при комнатной температуре 20 минут.
|
Гидрооксид натрия.
|
2.5
|
2.5
|
Оставить стоять при комнатной температуре 5 минут
|
Оптическую плотность измеряем на ФЭКе при длине волны 500-530 нм (зеленый светофильтр), в кювете на 1 см.
Расчет проводим по калибровочному графику.
Норма активности аминотрансфераз в сыворотке крови:
АсАТ = 0.1 – 0.75 мкмоль/л*ч,
АлАТ = 0.1 – 0.68 мкмоль/л*ч.
Клинико-диагностическое значение
определения аминотрансфераз в крови.
Аминотрансферазы: аспартат- и аланинаминотрансферазы осуществляют весьма важную функцию – обратимый перенос аминогрупп с аминонокислот на кетокислоты. Содержатся во всех клетках человеческого организма (больше всего в ткани печени, мышцах сердца, скелетной мускулатуры, почках). Активность АсАТ преобладает в мышечной ткани, а АлАТ – в печени.
Наиболее часто активность аминотрансфераз исследуют с целью дифференциальной диагностики патологии печени и миокарда. Для этого определяют показатель, который называется коэффициент де Ритиса:
КдР = АсАТ / АлАТ = 1,33.
Увеличение активности аминотрансфераз наблюдается при:
Инфаркте миокарда активность АсАТ в 95% случаев повышается (активность КК, ЛДГ при этом повышена). Возрастание происходит на 4-6 ч. с момента приступа. Оно четко выражено спустя 24-36 ч. (увеличивается в 4-5 раз выше нормы) и лишь на 3-7 сутки снижается до нормы. Отношение показателей активностей КК/АсАТ имеет высокую значимость при дифференциальной диагностике инфаркта миокарда(отношение около 5) и поражениях скелетных мышц (около 27). Коэффициент де Ритиса АсАТ/АлАТ более 1.
Остром вирусном гепатите (АлАТ и АсАТ более чем в 100 раз). Коэффициент де Ритиса менее 1,33.
Быстрое снижение активности аминотрансфераз одновременно с возрастанием гипербилирубинемии свидетельствует об обширных некротических изменениях в ткани печени. В благоприятных ситуациях гепатита активность данных ферментов снижается медленно в течение нескольких недель и даже месяцев.
Хроническом гепатите;
Циррозе печени (активность повышается в 5-8 раз);
Механической желтухе (АлАТ повышается в 50 раз долго остается повышенной, сопровождаясь возрастанием активности ЩФ, ГГТП и содержанием билирубина);
Токсическом поражении печени;
Легочной эмболии (активность КК при этом не повышена);
Пораженияхмышц (мышечной дистрофии, дерматоитозит);
Снижение активности АсАТ и АлАТ наблюдаются при:
Снижении содержания в организме витамина В6.
Почечной недостаточности.
Ответьте на вопросы:
К какому классу ферментов относятся АлАТ и АсАТ?
Назовите место локализации АлАТ и АсАТ.
Что такое коэффициент де Ритиса, как его рассчитывают, что он характеризует.
Назовите основные заболевания, при которых изменяется активность аминотрансфераз. Объясните причину.
*Напишите уравнение реакции, которую катализирует АлАТ.
*Назовите, какие еще ферменты изменяют свою активность при заболеваниях сердца; печени?
3.9. Практическая работа
«Определение активности кислой и щелочной фосфатаз
в сыворотке крови».
Цели практической работы:
закрепить знания об изоферментах и клинико-диагностическое значении определения фосфатаз в сыворотке крови;
научиться определять активность кислой щелочной фосфатазы в сыворотке крови.
Задания для самостоятельной работы:
Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип:
Определение активности фосфатаз основано на способности ферментов, отщеплять неорганический фосфат от нитрофенил-фосфата в щелочной среде.
Реактивы.
Буфер, рН=10,4.
4-нитрофенилфосфат.
NaOH 0.4 ммоль/л
Сыворотка.
|
Оборудование.
ФЭК, кювета на 10 мм.
Термостат.
Пробирки – 2 шт.
Пипетки на 1 и 5 мл.
Дозатор 0,02 мл
|
Ход определения:
Провести исследование активности фосфатаз согласно таблице.
Реактив.
|
Опыт, мл.
|
Контроль, мл.
|
Рабочий реактив.
|
1,00
|
1,00
|
Сыворотка.
|
0,02
|
-
|
Перемешать, проинкубировать в течение 20 минут при 300С в термостате.
|
NaOH
|
5,00
|
5,00
|
Перемешать и измерить оптическую плотность опыта (Ео) против контроля в кюветах на 10 мм, при длине волны 405 нм.
Расчет результатов проводим по формуле:
ЩФ, = Ео * 812 (МЕ/л).
Норма активности фосфатаз в сыворотке крови 30 –90 МЕ/л.
Клинико-диагностическое значение определения активности фосфатаз.
Фосфатазы – ферменты, отщепляющие остаток фосфорной кислоты от ее органических эфирных соединений. Различают, кислую и щелочную фосфатазы.
ЩФ – ряд ферментов оптимум рН которых лежит в пределах 10. ЩФ представлена 11 изоферментами, встречается практически во всех органах и тканях, но наиболее богаты клетки костной ткани и печени.
Служит биохимическим маркером кальциево-фосфорного обмена костной ткани. Активность ЩФ в сыворотке крови детей в 2-3 раза выше активности взрослых (связано с усиленным ростом костей).
N составляет 0.5 – 1.3 ммоль/ч*л.
Увеличение активности ЩФ в сыворотке крови наблюдается при:
механической желтухе;
циррозе печени, холецистите, холестазе;
рахите у детей;
остеомаляции;
болезни Педжета;
миеломной болезни.
Уменьшение активности ЩФ в сыворотке крови наблюдается при:
гипотиреозе;
старческий остеопороз;
замедленном росте у детей;
гиповитаминозе С;
гипервитаминозе Д.
КФ – представлена тремя разновидностями изоферментов:
1. простатический изофермент (локалзован в предстательной железе);
печеночный изофермент;
эритроцитарный изофермент.
Наибольшее диагностическое значение имеет простатическая форма КФ.
N составляет 0.05-0.13 ммоль/ч*л.
Увеличение активности КФ в сыворотке крови наблюдается при:
простатите;
раке предстательной железы;
аденоме предстательной железы;
метастазах;
множественной миеломе.
Уменьшается активность сыворотке КФ при:
Ответьте на вопросы:
К какому классу ферментов относятся фосфатазы?
Дайте определение понятию – изоферменты.
Назовите сколько изоферментов существует у кислой фосфатазы, чем они отличаются друг от друга.
*Назовите основные заболевания, при которых изменяется активность кислой; щелочной фосфатаз. Почему?
*Какие еще ферменты изменяют свою активность при этих заболеваниях?
Раздел 4. Обмен углеводов в норме и при патологии.
Значение изучаемой темы:
Углеводы являются одним из основных источников энергии для организма, а также важным компонентом многих внутриклеточных и внеклеточных структур, из углеводов могут образовываться заменимые аминокислоты и жиры. Нарушения в обмене углеводов приводят к таким заболеваниям как гликогенозы, галактоземия, фруктозурия. Знание гормональной регуляции обмена углеводов в целом и уровня глюкозы в крови, в частности, необходимо для правильной диагностики таких заболеваний как сахарный диабет, панкреатит и других.
4.1. Методы исследования углеводного обмена.
Основным показателем углеводного обмена является глюкоза, ее исследуют многими методами, основными являются:
Редуктометрические методы: основаны на восстановитльных свойствах глюкозы, определяют глюкозу в моче с реактивом Гайнеса-Акимова (этот метод почти не используется).
Колориметрические методы: основаны способности глюкозы образовывать окрашенные соединения. К ним относится ортотолуидиновый метод, унифицирован в 1978 году (почти не используется).
Ферментативные методы: определение глюкозы по реакциям со специфическими ферментами. В основном используют глюкозооксидный и гексокиназный методы. Гексокиназный метод является наиболее точным для определения уровня глюкозы.
Использование диагностических тест-полосок для полуколичественного определения уровня глюкозы в крови и моче.
Использование автоматических и полуавтоматических анализаторов, например «Эксан», карманные глюкометры.
При сахарном диабете проводят специальные исследования, например ГТТ, кортизон (преднизалон) глюкозотолорантный тест КПТГ, инсулиновый тест и др.
4.2. Преаналитический этап исследований обмена углеводов.
Основным показателем обмена углеводов в организме служит глюкоза. Её исследование проводят в цельной крови (капиллярной и венозной), сыворотке, плазме, моче. При заборе, хранении и транспортировке биологического материала нужно соблюдать ряд общих требований.
Подготовка обследуемых:
Забор крови делают утром с 8 до 10 часов утра. В экстренных случаях взятие крови осуществляется в любое время дня.
Кровь берут натощак, после 8-12-часового голодания.
Воздержание от приема алкогольных напитков не менее 24 часов.
Исключается физическое напряжение и эмоциональное возбуждение, для чего дают обследуемому отдохнуть 15 минут.
Получение и хранение биологического материала:
Капиллярную кровь исследуют сразу же после забора материала.
Для получения цельной крови или плазмы венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку с антикоагулянтом (соли ЭДТА, гепарин, гепаринат чистую, сухую пробирку с антикоагулянтом лития, натрия или аммония), стабилизатором или ингибиторолм гликолиза. В качестве ингибиторов гликолиза используют фторид натрия или калия. Соотношение кровь : антикоагулянт : стабилизатор = 1 мл : 2 мг: 2,5 мг. Центрифугирование проводят в обычном режиме.
Для получения сыворотки крови венозную кровь собирают в чистую, сухую пробирку со стабилизатором гликолиза. Центрифугирование проводят в обычном режиме.
Для исследования мочи используют утреннюю порцию. В экстренных случаях можно исследовать любую порцию мочи. Исследование проводят не позднее, чем через 2 часа после взятия пробы. Для сбора мочи используют контейнеры из темного стекла, в которые предварительно добавляют ледяную уксусную кислоту, бензоат натрия или фторид натрия ( ингибиторы гликолиза).
Условия хранения биологического материала:
Биологический материал хранят в хорошо закрытых контейнерах.
Капилярную кровь хранят 1 час. Исследования проводят в течение 10 минут от забора материала (после 10 минут отмечается снижение уровня глюкозы).
Для хранения цельной крови в ней удаляют белки. В таком виде глюкоза стабильна в течение 8 часов при комнатной температуре и 3 дня в холодильнике при 4-6 С.
Плазму и сыворотку отделяют от форменных элементов не позднее 30 минут после забора материала. Плазму и сыворотку можно хранить 12 часов в холодильнике при температуре 4-8 С.. При использовании ингибиторов гликолиза хранить можно: 1 день при комнатной температуре, 7 дней при 4-8 С, 1 месяц при –20 С.
Глюкоза в моче стабильна при комнатной температуре и 4-8 С в течение 2 часов, при –20 С в течение 2 дней.
Примечания:
Концентрация глюкозы в венозной крови на 10 % меньше, чем в капиллярной. Концентрация глюкозы в сыворотке и плазме на 10-13% выше, чем в цельной крови.
Цитрат натрия мешает определению глюкозы.
Повышение глюкозы в крови вызывают следующие факторы: курение, голодание, стресс, прием пищи, кофе, гипертермия, диета с низким содержанием жиров, ожирение, беременность, физические нагрузки, некоторые лекарственные препараты (кофеин, эстрогены, пероральные контрацептивы, диуретики).
Понижение уровня глюкозы в крови вызывает прием алкоголя в больших дозах, длительное пребывание в положении лежа, тепловой стресс, лихорадка, очень тяжелые физические упражнения, сезонное снижение весной, некоторые лекарственные препараты (анаболические стероиды, ацетилсалициловая кислота, антигистаминные препараты).
4.3. Практическая работа
«Определение глюкозы в сыворотке крови
глюкозооксидазным методом».
Цели практической работы:
закрепить знания о превращениях глюкозы в организме;
изучить клинико-диагностическое значение глюкозы;
научиться исследовать уровень глюкозы в крови ферментативным методом.
Задания для самостоятельной работы:
Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип:
Определение глюкозы основано на реакции, катализируемой глюкозооксидазой:
Г люкоза + O2 глюкозооксидаза глюколактон + Н2О2
Образующаяся в ходе данной реакции перекись водорода вызывает окисление субстратов пероксидазы с образованием окрашенного продукта. Увеличение оптической плотности раствора пропорционально концентрации глюкозы в образце.
Реактивы:
1. Фосфатный буфер рН=7.
2. Глюкозооксидаза.
3. Пероксидаза.
4. Калибровочный раствор глюкозы
10 ммоль/л.
5.Сыворотка крови.
|
Оборудование:
1. Пробирки – 3 шт.
2. Фотоколориметр.
3. Термостат.
4. Пипетки на 5 мл.
Дозатор на 0.05 мл.
|
Ход определения:
Проведите исследование количества глюкозы в сыворотке крови согласно таблице.
Реактивы.
|
Контроль, мл.
|
Стандарт, мл.
|
Опыт, мл.
|
Сыворотка.
|
-
|
-
|
0,05
|
Стандарт.
|
-
|
0,05
|
|
Рабочий реактив.
|
2,50
|
2,50
|
2,50
|
Реакционную смесь перемешайте и инкубируйте при 37С не менее 15 минут.
Через 5 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхните.
После инкубации измерьте оптическую плотность опытной и стандартной проб относительно контроля в кювете на 5 мм при 500 нм.
Расчет концентрации глюкозы производят по формуле:
Сглюкоза = Еоп/Ест * 10 (ммоль/л)
Норма.
Норма глюкозы в цельной крови: 3,3 – 5,5 ммоль/л.
Норма глюкозы в сыворотке крови: 3,7 – 6,1 ммоль/л.
Сразу после рождения уровень глюкозы в крови детей соответствует её содержанию в плазме крови матери. Однако уже в первые часы жизни концентрация глюкозы в крови падает, достигая на вторые сутки 2,5 ммоль/л; к 5-6 суткам концентрация глюкозы крови увеличивается. Постепенное её возрастание происходит и в дальнейшем, но лишь к 15 годам концентрация глюкозы достигает значений, характерных для взрослого человека.
Клинико-диагностическое значение обнаружения глюкозы в крови.
Гипергликемия - увеличение уровня глюкозы в крови, может быть:
Инсулярная – причиной может быть поражение паренхимы поджелудочной железы или гипофункция бетта-клеток островков Лангерганса, при которых снижается уровень выработки инсулина.
Экстраинсулярная – не связана с выработкой инсулина, подразделяется на:
Физиологическую – причина прием углеводной пищи (алиментарная) или различные эмоциональные состояния, при которых возрастает уровень адреналина (нейрогенная).
Патологическая – причинами могут быть заболевания желез внутренней секреции (опухоли передней доли гипофиза, надпочечников, тиреотоксикоз и т.д.), токсикозы различного происхождения, травмы, опухоли мозга, снижение обмена глюкозы при наркозе, воспалениях, септических состояниях, вследствие нарушения функций ферментативных систем.
Гипергликемия встречается при следующих заболеваниях:
Сахарный диабет, поражениях ЦНС, печени, желез внутренней секреции, стрессовых ситуациях, обильном приеме углеводной пищи, приеме некоторых лекарственных средств (кофеин, стрихнин, адреналин, эфир, опий, морфий, хлороформ и т.д.).
Гипогликемия - уменьшение уровня глюкозы в крови, встречается при:
Снижении гормональной функции щитовидной железы, надпочечников, гипофиза.
Увеличение функций инсулярного аппарата поджелудочной железы.
Некоторые формы поражения почек (нефриты, нефрозы).
Некоторые формы поражения печени (гепатиты, жировая инфильтрация печени).
Гликогенозы.
Некоторые формы поражения тонкого кишечника, удаление значительной части желудка.
Ответьте на вопросы:
Какие методы определения глюкозы в крови вы знаете?
Почему основным показателем обмена углеводов является глюкоза?
Для диагностики каких патологий назначается анализ глюкозы в крови?
Каково нормальное содержание глюкозы в артериальной и венозной крови, сыворотке и моче?
*Какой из известных методов определения глюкозы является наиболее специфичным? Почему вы так считаете?
*Отличается ли содержание глюкозы в крови у детей и взрослых? Почему?
*Спортсмен пробежал 100-метровую дистанцию. Измениться ли содержание молочной кислоты у него в крови? Почему?
4.4. Практическая работа
«Определение концентрации глюкозы
на полуавтоматическом анализаторе "Эксан".
Цели практической работы:
научиться исследовать уровень глюкозы в крови на полуавтоматическом анализаторе «Эксан».
Задания для самостоятельной работы:
1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
2.Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип работы.
Действие анализатора основано на электрохимическом амперометрическом определении продуктов ферментативной реакции окисления глюкозы, катализируемой ферментом глюкозооксидазой, с последующим преобразованием в постоянное напряжение и фиксацией аналого-цифровым преобразователем.
Реактивы:
Калибровочный раствор глюкозы 10 ммоль/л.
Сыворотка крови.
Буферный раствор для «Эксана».
|
Оборудование:
Дозатор на 0,05 мл.
Анализатор «Эксан».
Мембраны на «Эксан».
|
Калибровка прибора.
Включите прибор в сеть.
Включите тумблер прибора.
Прогрейте 15 мин.
Нажмите на клавишу "Промывка".
Промойте прибор 2-3 раза.
Нажмите клавишу "Сброс" на табло должны высветиться цифры 0 +/- 0,05. Если показания больше 0,05 - ручкой на задней панели прибора установите 0.
Для калибровки анализатора используйте калибровочный раствор глюкозы концентрации 10 ммоль/л.
Наберите дозатором пробу 0,05 мл и введите ее в датчик (на глубину 5-8 мм.).
При установившемся показании индикаторного табло калибровочными ручками «Грубо», «Плавно» установите показания индикаторов 10,0.
Нажмите клавишу "Промывка".
После промывки, нажмите клавишу "Сброс". При этом на табло должно высвечиваться 0 +/- 0,05, а перед цифрами должен погаснуть хотя бы верхний сегмент. Если погаснет 2 верхних сегмента - промыто хорошо. Если горят все 3 сегмента - мембрана старая, подлежит замене. Если показания на табло быстро увеличиваются, или не погас верхний сегмент - промойте еще раз.
Калибровку (пункты 4-11) проведите несколько раз до получения стабильного результата в пределах 10,0 +/- 0,1.
Калибровку анализатора проводят каждые 4 часа, после 10 определений исследуемых проб или при изменении температуры окружающей среды более чем на 5 градусов Цельсия.
Определение уровня глюкозы в крови (сыворотке, плазме).
Перед введением пробы в датчик промойте анализатор (нажмите кнопку «Промывка»).
После остановки насоса нажмите кнопку "СБРОС". Индикаторы должны показывать в пределах 0,00... 0,05. В противном случае проведите установку нуля и калибровку прибора.
Введите в анализатор пипеточным дозатором (сменив наконечник!) кровь или сыворотку. При установившемся значении показаний индикаторов (около 10 сек.) на табло высветится содержание глюкозы в ммоль /л.
Нажмите кнопку "Промывка", а после остановки насоса нажмите кнопку "Сброс". Анализатор готов для введения новой пробы.
Для набора новой пробы дозатором замените его насадку новой.
Через 10 определений - проверьте прибор по стандартному раствору глюкозы (провести калибровку). По мере старения мембраны может не устанавливаться 10 ммоль/л по калибровочному раствору глюкозы. В этом случае можно увеличить чувствительность прибора, переключив тумблер на задней панели прибора max – min.
Ответьте на вопросы:
В каких случаях необходимо исследование концентрации глюкозы в крови и моче?
Чем опасна для организма человека длительная гиперглигемия.
Какие гормоны и как влияют на процессы гликолиза, глюкогеогенеза и гликогенеза?
Чем отличаются процессы глюконеогенеза, гликолиза, гликогенеза?
*Какие ферменты участвуют в процессах гликогенеза, гликолиза, глюконеогенеза? Напишите схематичные уравнения реакций, укажите эти ферменты.
*Напишите уравнения реакции образования глюкозо-6-фосфата и ПВК из глюкозы.
4.5. Практическая работа
«Определение количества глюкозы и кетоновых тел в моче
с помощью индикаторных полосок».
Цели практической работы:
закрепить знания о превращениях глюкозы в организме;
научиться исследовать уровень глюкозы и кетоновых тел в моче с помощью индикаторной бумаги.
Задания для самостоятельной работы:
Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип.
При окислении глюкозы с помощью фермента глюкооксидазы образуется перекись водорода. Она разлагается другим ферментом - пероксидазой и окисляет краситель орто-толуидин, который изменяет свой цвет, что говорит о наличии глюкозы в моче. Этот метод определения глюкозы в моче - полу качественный - дает возможность определить сахар ориентировочно.
Реактивы:
Моча.
Диагностические тест-полоски.
|
Оборудование:
1.Пробирка.
|
Ход определения:
Индикаторную бумагу смочите исследуемой мочой и сравните со стандартной цветной шкалой.
Индикаторная бумага пропитана реактивной смесью, содержащей ферменты глюкозооксидазу и пероксидазу и много других веществ, среди них 0-толуидин – краситель.
Оценка результатов.
При увлажнении мочой светло-желтой полосы:
1. Если цвет полосы не изменяется - глюкоза отсутствует.
2. Если цвет становится от светло-зеленого - до темно-зеленого - глюкозы содержится 0,1-2%.
3.Интенсивность не меняется - глюкозы больше 2%.
Этот метод прост, быстро выполним, и может быть использован при массовых исследованиях. Комплект содержит 100 полосок индикаторной бумаги, цветную шкалу. Индикаторная бумага имеет поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную раствором фермента.
4.6. Практическая работа
«Определение пировиноградной кислоты в
биологических жидкостях скрининг - тестом».
Цели практической работы:
закрепить знания о превращениях глюкозы в организме;
научиться определять наличие ПВК в биологических жидкостях.
Задания для самостоятельной работы:
1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип:
Трихлористое железо в присутствии соляной кислоты дает с
кетокислотами соединение, окрашенное в желто-зеленый цвет.
Реактивы:
1. 10% раствор FeCI3.
2. 10% раствор HCI.
3.Моча.
|
Оборудование:
1. Пробирка.
2. Дозатор на 0.5 мл.
3. Пипетка на 1мл.
|
Ход определения:
В пробирку поместите 0.5 мл мочи.
Добавьте 0.25 мл раствора трихлористого железа и 2 капли соляной кислоты.
Перемешайте и наблюдайте за развитием окраски.
При положительной реакции окраска будет желто-зеленой.
Норма:
Содержание пировиноградной кислоты (ПВК) в крови здорового человека
колеблется 0.05-0.14 ммоль/л, а в моче от 10 до 25 мг в суточном диурезе.
Клинико-диагностическое значение.
Повышение уровня ПВК отмечается при:
Мышечной работе и В1-витаминной зависимости;
Больших физических нагрузках содержание ПВК может повышаться до
мг/100 мл;
Паренхиматозных заболеваниях печени;
Сахарном диабете;
Токсикозах.
В спинномозговой жидкости концентрация ПВК значительно повышается
после травмы черепа, при воспалительных процессах - менингите,
абсцессе мозга.
Повышенное содержание ПВК токсично для организма.
Ответьте на вопросы:
Напишите схематично процесс гликолиза. Какие ферменты участвуют в этом процессе? В каком отделе клетки он протекает?
Назовите причины глюкозурии.
Дайте определение почечного порога глюкозы. При каких заболеваниях он изменяется?
*Напишите уравнение реакции превращения ПВК в лактат. Какой фермент ускоряет эту реакцию?
*Назовите пути использования организмом ПВК и ацетил-КоА.
|
|
|
Скачать 1.34 Mb.