|
|
практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
Ответьте на вопросы:
На каких принципах основаны цветные реакции на белки?
На чем основана классификация цветных реакций?
Какую из цветных реакций лучше всего использовать для определения количества белка? Почему?
*Напишите уравнения биуретовой и ксантопротеиновой реакций на примере пептида ТИР – АРГ – ГЛИ.
*Как отличить по химическим свойствам аминокислоты ЛИЗ и ФЕН? Напишите уравнения химических реакций.
*Где на практике применяют цветные реакции на белки?
2.2. Практическая работа
«Обратимое осаждение белков (высаливание белков)».
Цели практиченской работы:
Задания для самостоятельной работы:
Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Оформите результаты работы оформить в виде таблицы:
№ п/п
|
Ход работы. Рисунки.
|
Наблюдения
|
Выводы
|
|
|
|
|
Сделайте вывод по работе.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип:
Сущность реакции высаливания заключается в удалении гидратных оболочек белковых молекул солями щелочных, щелочно-земельных металлов и иона аммония. Полунасыщенным раствором сульфата аммония осаждается глобулиновая фракция, а насыщенным раствором – альбуминовая.
Реактивы:
Яичный белок.
Насыщенный раствор сульфата аммония (NH4)2SO4.
(NH4)2SO4 кристаллический.
10 % раствор NaOH.
1 % раствор CuSО4.
|
Оборудование:
Пробирки – 5 шт.
Пипетки глазные – 4 шт.
Воронки – 2 шт.
Фильтровальная бумага.
Стеклянная палочка.
|
Ход работы:
В пробирку № 1 налейте 30 капель неразведенного яичного белка и добавьте 30 капель насыщенного раствора сульфата аммония (NH4)2SO4.
Содержимое пробирки перемешайте. Что наблюдаете? При этом получается полунасыщенный раствор сульфата аммония (NH4)2SO4, глобулиновая фракция белка осаждается, а альбуминовая - остается в растворе.
Через 5 минут осадок отфильтруйте в пробирку № 2.
Воронку с фильтром перенесите в пробирку № 3 и добавьте на фильтр 5-10 капель воды. Что происходит с осадком?
Проверьте наличие белка в пробирке № 3 с помощью биуретовой реакции. Для этого добавьте в пробирку 3 капли 10 % NaOH и 1 капля 1 % CuSО4.
В пробирку № 2 добавьте порошок сульфата аммония до полного насыщения раствора, т.е. пока не прекратится растворение соли. При этом выпадает в осадок альбуминовая фракция белка.
Через 5 минут осадок отфильтруйте в пробирку № 4.
Осадок снимите с фильтра аккуратно стеклянной палочкой и перенесите в пробирку № 5.
В пробирку № 5 добавьте 5-10 капель воды. Что происходит с осадком?
Проверьте наличие белка в пробирке № 5 с помощью биуретовой реакции. Для этого добавьте в пробирку 3 капли 10 % NaOH и 1 капля 1 % CuSО4.
Ответьте на вопросы:
Какие факторы устойчивости белка вы знаете?
Какой фактор устойчивости белка удаляется в данной работе?
Чем отличаются гидратные оболочки альбуминов и глобулинов?
Почему для осаждения альбуминов и глобулинов используют различные по концентрации растворы сульфата аммония?
Для чего в данной работе используется биуретовая реакция?
*Почему осадки альбуминов и глобулинов растворяются при добавлении воды?
*Чем высаливание белков отличается от денатурации?
*Где на практике используется обратимое осаждение белков?
|
|
|
Скачать 1.34 Mb.