|
|
практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
4.7. Практическая работа «Определение сиаловых кислот в сыворотке крови».
Цели практической работы:
Задания для самостоятельной работы:
Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
Оборудуйте рабочее место для практической работы.
Выполните практическую работу.
Сделайте необходимые расчеты.
Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.
Сделайте вывод по работе и рисунки.
Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип.
Метод основан на реакции сиаловых кислот с индикатором. В результате реакции при нагревании образуется окрашенное соединение интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации сиаловых кислот.
Реактивы:
Реагент 1.
Основной раствор.
Дистиллированная вода.
Сыворотка или плазма крови.
|
Оборудование:
Водяная баня.
Центрифуга.
ФЭК.
Кюветы на 1 см.
Штатив с пробирками.
Пипетки на 1, 2, 5 мл.
Фильтровальная бумага.
|
Ход определения:
Проведите исследование сиаловых кислот в сыворотке крови согласно таблицы.
Реактивы.
|
Опытная проба, мл.
|
Сыворотка.
|
0,60
|
Реагент 1.
|
3,00
|
Пробу нагреть в кипящей водяной бане в течение 5 минут, после чего охладить в холодной воде и центрифугировать 5 минут при 3000 об/мин. Далее в чистуб пробирку помещаем:
|
Надосадочная жидкость.
|
2,00
|
Основной раствор.
|
0,40
|
Пробу вновь нагреть на кипящей водяной бане в течение 15 минут, охладить в холодной воде и добавить:
|
Дистиллированная вода.
|
2,00
|
Пробу перемешать и фотометрировать против дистиллированной воды, при длине волны 500-560 нм, в кювете 1 см.
|
Расчет результатов проводим по формуле:
С = Е * 1000 / Ео
Где:
С – содержание сиаловых кислот в ммоль/л.
Е – экстинция опытной пробы.
Ео – средний молярный коэффициент экстинции, Ео = 135.
Норма сиаловых кислот в сыворотке и плазме крови 1,8 – 2,7 ммоль/л.
Клинико-диагностическое значение определения сиаловых кислот.
Сиаловые кислоты представляют собой N-ацетилпроизводные нейраминовой кислоты. Они находятся во всех тканях и биологических жидкостях, являются важной составной частью углеводно-белковых комплексов, в которых занимают краевое положение. После отщепления от комплексов свободные сиаловые кислоты инактивируют многие бактериальные и вирусные болезнетворные агенты, поэтому увеличесние содержания в крови сиаловых кислот может быть проявлением компенсаторной, защитной воспалительной реакции. В моче сиаловые кислоты обнаруживаются только при протеинурии.
Увеличение концентрации сиаловых кислот в крови наблюдается при:
Ревматизме.
Туберкулезе (особенно активном).
Инфаркте миокарда.
Раке.
Остеомиелите.
Лейкимии.
Других заболеваниях преимущественно воспалительного характера, а также сопровождающихся распадом соединительной ткани.
Снижение концентрации сиаловых кислот наблюдается при:
Гемахроматозе.
Дегенеративных процессах в ЦНС.
Ответьте на вопросы:
Какие вещества относятся к гетерополисахаридам?
Какие функции выполняют в организме гетерополисахариды?
Почему при воспалительных процессах в крови увеличивается содержиние сиаловых кислот?
Почему при заболеваниях сопровождающихся распадом соединительной ткани в крови увеличивается содержиние сиаловых кислот?
*Может ли изменяться количество сиаловых кислот при циррозе печени, инфаркте миокарда, почечной недостаточности? Почему?
|
|
|
Скачать 1.34 Mb.