практикум по биохимии Перфильева,Черемнова. Методическое пособие к практическим занятиям по биохимии для студентов специальности 0407 Лабораторная диагностика
 Скачать 1.34 Mb.
|
|
Ход определения:
Расчет количества креатинина проводят по формуле: С= Е1 / Е2 * 353,6 мкмоль/л С= Е1 / Е2 * 40 мг/л. Норма: В сыворотке крови: у мужчин 44-100 мкмоль/л, у женщин 44-88 мкмоль/л. В суточной моче: 4,4-17,7 ммоль. Примечания:
Клинико-диагностическое значениеопределения креатинина в крови и моче. Повышение уровня кретинина в крови может наблюдаться при:
Повышенное выведение креатинина с мочой происходит при острых инфекционных заболеваниях, большой физической работе, снижение – при лейкозах, хронических заболеваниях (амилоидозе) почек, атрофии мышц, некоторых формах анемии, после назначения кортикотропина (АКТГ). Наиболее широко используемая для определения креатинина реакция Яффе недостаточно специфична, т.к. дает подобную окраску с глюкозой, ацетоном, бета-оксимасляной кислотой, альфа-кетоглутаратом, пируватом, билирубином, гемоглобином, мочевиной и мочевой кислотой (псевдокреатиновые хромогены). В результате может быть получен ложноположительный результат. Поскольку псевдокреатиновые хромогены в мочу здоровых людей практически не попадают, то в клинике часто определяют клиренс креатинина. Определение клиренса креатинина. Почти все вещества в организме подвергаются реабсорбции в почках, но креатинин относится к числу тех веществ, которые полностью выводятся из организма. При проведении пробы на очищение (депурацию) от креатинина определяют очистительную способность, или клиренс, клубочков почек, рассчитывая её по формуле: С кл. = (U*V) / Р Где: С – объем плазмы, прошедший за 1 минуту через клубочки почек, Р – концентрация креатинина в плазме крови U - концентрация креатинина в моче V – объем мочи (в мл), выделившейся за 1 минуту(минутный диурез). Таким образом, клубочковый клиренс соответствует количеству выделенной первичной мочи (вмл) за 1 минуту. Исследование провотят в утренние часы, натощак. Для увеличения объема выводимой мочи испытуемому предварительно дают 400-600 мл “жидкого” (некрепкого) чая или воды. Желатедльно, чтобы во время проведения пробы пациент пребывал в положении лежа (большая физическая нагрузка недопустима). Сбор мочи проводят зв два часовых периода. Взятие крови осуществляют в середине часовых промежутков. Полученные данные оценивают с учетом поверхности тела пациента. Норма: у мужчин 97-137 мл/(мин*1,73м2) или 0,93-1,32 мл/(с*м2), У женщин 88-128 мл/(мин*1,73м2) или 0,85-1,23 мл/(с*м2). Уменьшение клубочковой фильтрации происходит при заболевании почек (остром и хроническом нефрите, хронической почечной недостаточности, нефротическом синдроме и др.) и нарушении кровообращения в почках ( втом числе из-за нарушения деятельности сердечно-сосудистой системы, большой кровопотери, щока). Повышение клубочковой фильтрации встречается весьма редко: оно обычно наблюдается при снижении содержания альбумина в плазме (гипоальбуминемии) в условиях сохранения числа функционирующих структурных единиц почек (нефронов). В этом случае усилению клубочковой фильтрации способствует уменьшение онкотического давления плазмы. Показатели клиренса подвергаются колебаниям в течении суток: наиболее высокие величины отмечаются утром, самые низкие – ночью. Увеличивают фильтрацию водная нагрузка и прием мясных продуктов (в большом количестве), снижают - ограничение приема натрия и калия. В горизонтальном положении пациента показатели клиренса выше, чем в вертикальном. Ответьте на вопросы: 1. Напишите схему образования креатинина. 2. Почему при поражениях мышц концентрация креатинина в крови изменяется? К какому виду азотемии относиться это изменение?
4.9. Практическая работа «Определение мочевой кислоты в сыворотке крови». Цели практической работы:
Задания для самостоятельной работы:
Принцип: Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации мочевой кислоты в исследуемой пробе.
Ход определения:
Расчет результатов проводим по формуле: Скреат = Ео / Ек * 300 (мкмоль/л). Норма в плазме крови: - у мужчин 0,24-0,5 ммоль/л; - у женщин 0,16-0,44 ммоль/л. Клинико-диагностическое значение определения мочевой кислоты. Мочевая кислота - главный продукт распада основного компонента нуклеиновых кислот пуриновых оснований. Поскольку она не используется далее в обменных процессах, то выделяется почками с мочой. Исследование содержания мочевой кислоты представляет особый интерес для диагностики подагры, т.к. это заболевание тесно связано с нарушением обмена пуриновых оснований. Оно характеризуется отложением солей мочевой кислоты в суставах и других тканях, а также увеличение мочевой кислоты в крови. Гиперурикемия - повышение уровня мочевой кислоты в крови - наблюдается при:
Гипоурекемия - понижение уровня мочевой кислоты в крови - отмечается при лечении препаратами пиперазинового ряда, иногда при гепатите, анемиях. Урикозурия - увеличение уровня мочевой кислоты в моче обнаруживается в 25-30 % случаев подагры, некоторых наследственных заболеваниях (синдром Леша-Найхана) и нарушениях накопления гликогена. Уменьшение уровня мочевой кислоты в моче обычно отражает развитие почечной недостаточности, прием салицилатов в дозе 2-3 г в сутки. Ответьте на вопросы:
4.10. Практическая работа «Определение билирубина в сыворотке крови». Цели практической работы:
Задания для самостоятельной работы: 1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы. 2. Оборудуйте рабочее место для практической работы. 3. Выполните практическую работу. 4. Сделайте необходимые расчеты.
Принцип: Связанный (прямой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а свободный (непрямой) – в присутствии кофеинового реактива с образованием окрашенного азобилирубина, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию билирубина.
Ход работы: 1. Определение коэффициента пересчета.
К = Ск / Ек Где: К – коэффициент пересчета. Ск – концентрация билирубина в калибровочном растворе. Ек – оптическая плотность калибровочного раствора. 2.Определение количества билирубина.
Расчет результатов проводим по формулам: Собщ = К * Еобщ (мкмоль/л). Ссвяз = К * Есвяз (мкмоль/л). Ссвоб = Собщ – Ссвяз (мкмоль/л). Норма билирубина в плазме крови:
Клинико-диагностическое значение определения уровня билирубина в крови. Одним из важнейших пигментов и продуктов распада гемоглобина является билирубин. Уровень общего, прямого и связанного билирубина показывает работу печени и почек, а также уровень распада эритроцитов в крови. Определение общего билирубина и его производных в крови, моче и кале производят для дифференциальной диагностики различных видов желтух. Общий билирубин состоит из 2 фракций: Непрямой (свободный, комплекс с альбуминами). Прямой (конъюгированный, связанный с глюкуроновой кислотой). Увеличение содержания билирубина сопровождается желтушной окраской слизистых оболочек и кожных покровов. Легкая форма желтухи до 86 мкмоль/л, среднетяжелая 87-159 мкмоль/л, тяжелая 160 мкмоль/л. Содержание непрямого (свободного) и общего билирубина в крови возрастает при:
Концентрация прямого (связанного) билирубина в крови увеличивается при воспалительных процессах в печени (гепатит). Содержание прямого и общего билирубина в крови увеличивается при механической желтухе. Содержание общего билирубина увеличивается также при приеме лекарств, увеличивающих гемолиз (н-р аспирин, тетрациклин). Уровень прямого билирубина может увеличиваться под действием лекарств, задерживающих желчь в печени (холестаз) н-р пиницилин, эритромицин, пероральных контрацептивов, никотиновой кислоты. Ответьте на вопросы:
4.11. Практическая работа «Тимоловая проба». Цели практической работы:
Задания для самостоятельной работы:
Принцип: При взаимодействии сыворотки с тимоловым буфером появляется мутность вследствие образования комплекса «глобулин-тимол-липоид». Интенсивность помутнения зависит от количества взаимного соотношения отдельных белковых фракций.
Ход работы:
Расчет: Расчет проводят по калибровочному графику, для постороения которого готовят серию растворов согласно таблице.
Растворы смешивают и ровно через 30 минут измеряют оптическую плотность против дистиллированной воды при длине волны 620-690 нм в кювете на 1 см. Перед измерением пробы еще раз перемешивают. Норма тимоловой пробы 0 – 4 единиц SН (единиц помутнения Shank-Hoagland). Предельные величины – 4-5 ед.SН, патология – свыше 5 ед. SН. Примечание:
Клинико-диагностическое значение тимоловой пробы. Проба положительна при:
Проба отрицательна при:
Ответьте на вопросы:
Раздел 3. Ферменты. Значение изучаемой темы: В организме практически нет реакций, которые не катализировались бы ферментами. Ферменты обеспечивают существование таких важнейших процессов жизнедеятельности, как реализация наследственной информации, биоэнергетика, синтез и распад биологических молекул. Наука о питании основана на точных знаниях о расщеплении веществ под влиянием ферментов пищеварительного тракта. Действие многих лекарственных препаратов основано главным образом на взаимодействии с ферментами. Многие проблемы наследственной патологии человека тесно связаны с дефектами или полным отсутствием синтеза специфических ферментов. Проблемы клеточного роста и развития, дифференцировки, физиологических функций (движение, перемещение в пространстве, транспорт веществ, процессы возбуждения и торможения) определяются в большей степени работой ферментов. Все вышеперечисленное позволяет считать данную тему основой для изучения всех последующих тем. 3.1. Преаналитический этап ферментативных исследований. Основным биологическим материалом для исследования активности ферментов является свежая негемолизированная сыворотка крови или плазма, иногда свежая капиллярная или венозная кровь.
3.2. Использование ферментов в медицине. Использование ферментов в медицине возможно по трем направлениям: 1. Энзимопатология – изучает нарушения активности ферментов в развитии заболевания. Энзимопатии – заболевания, характеризующиеся нарушением содержания того или иного фермента в организме. Они классифицируются:
2. Энзимодиагностика – измерение активности или изоферментов в крови и моче для диагностики заболеваний, сопровождающихся разрушением клеток. Либо это применение ферментов для определения различных веществ в биологических жидкостях – ферментативный метод является наиболее специфичным и точным. Требования к ферментам, используемым в клинико-биохимических исследованиях:
3. Энзимотерапия – использование ферментов в качестве лекарственных средств.
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||