Общая микробиология
 Скачать 0.8 Mb.
|
|
Ускоренными методами выявления коринебактерий являются: -микроскопический метод; -иммунофлюоресцентный метод; -метод “свернутого тампона” (метод Фольгера или Фольгера-Золле) - метод забора материала для бактериологического исследования на дифтерийную палочку с помощью стерильного ватного тампона, пропитанного лошадиной сывороткой. Сыворотку крови свертывают, а тампоны после взятия материала помещают на 4-6 часов в термостат, после чего используют для приготовления мазка. Однако эти методы не позволяют говорить о токсигенности выделенных культур. Серологические методы при дифтерии являются методами ретроспективной диагностики, поэтому они имеют вспомогательное значение. РНГА (РПГА) с антигенным эритроцитарным диагностикумом используется для оценки напряженности антитоксического иммунитета. Эритроцитарный диагностикум получают сенсибилизацией эритроцитов дифтерийным анатоксином. Защитный титр антител в РНГА равен 1:40. Если антитела обнаруживаются в более низких разведениях сыворотки, требуется ревакцинация. Учет результатов осуществляют визуально - по степени агглютинации эритроцитов. Положительными считаются пробы, давшие реакцию агглютинации не менее чем на два плюса (++). Для оценки напряженности антитоксического иммунитета ранее широко применялась проба Шика: в кожу средней трети ладонной поверхности предплечья вводят 1/40 Dlm дифтерийного токсина в объеме 0,2 мл. При отсутствии в крови антитоксинов на месте введения токсина через 24-48 часов появляются припухлость и покраснение. При наличии антитоксинов (1/30 АЕ/мл) местных проявлений не наблюдается. В настоящее время эта проба практически не используется. Лечение дифтерии проводится в стационаре. Для нейтрализации токсина используют специфическую противодифтерийную лошадиную очищенную концентрированную жидкую сыворотку (антитоксин). Препарат получают путем многократной иммунизации лошадей дифтерийным анатоксином. Сыворотку вводят внутримышечно или подкожно. Специфическое лечение противодифтерийной сывороткой начинают немедленно при подозрении на дифтерию, так как антитоксин нейтрализует только циркулирующий в крови и лимфе токсин, который еще не связался с тканями. Для профилактики анафилактического шока противодифтерийную сыворотку вводят дробно. Дробное введение гетерологичных сывороточных препаратов разработал А.М. Безредка. Суть дробного метода введения гетерологичных сывороток состоит в том, что сначала в организм вводится очень малая доза сыворотки, а спустя 4 часа – остальное необходимое количество. Введение сыворотки после 3-го дня болезни считается поздним. Противодифтерийная антитоксическая сыворотка вводится внутримышечно в дозе от 10000 до 400000 МЕ в зависимости от тяжести течения болезни. Разработан также иммуноглобулин человека противодифтерийный для внутривенного введения. Для получения противодифтерийного иммуноглобулина доноров прививают однократно адсорбированным дифтерийным анатоксином с уменьшенным содержанием антигена (АД-М) в дозе 0,5 мл подкожно в подлопаточную область. Через 30 дней проводят взятие крови и определение уровня антитоксина в реакции пассивной гемагглютинации с использованием эритроцитарного дифтерийного диагностикума. Для выделения иммуноглобулина используют плазму с титром антител ≥ 1:160. Выделение иммуноглобулиновой фракции проводят спиртовым методом при низких температурах. Поскольку введение антитоксина не оказывает влияния на размножение C. diphtheriae в месте входных ворот инфекции, одновременно с введением антитоксической противодифтерийной сыворотки больным обязательно назначают антибиотики. Препаратами выбора являются пенициллин или эритромицин, либо другие β-лактамы и макролиды (кларитромицин, азитромицин, ванкомицин, джозамицин). В связи с токсинемией больным назначают детоксикационную терапию. При стенозе гортани проводят трахеотомию. Выписывают больных после двукратного отрицательного результата бактериологического обследования. Специфическая профилактика. Для специфической профилактики дифтерии используют препараты, содержащие дифтерийный анатоксин (токсоид). В процессе получения анатоксин утрачивает способность связываться с клеточными рецепторами, не обладает АДФ-рибозил-трансферазной активностью и не расщепляется на А- и В-субъединицы. Этим объясняется его полная безвредность при сохранении иммуногенности. Дифтерийный анатоксин входит в состав следующих профилактических препаратов: -адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина (АКДС-вакцина); -адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС-анатоксин); -адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин с уменьшенным содержанием антигенов (АДС-М-анатоксин): -адсорбированный дифтерийный анатоксин с уменьшенным содержанием антигена (АД-М-анатоксин). АКДС-вакцина представляет собой гомогенную взвесь, состоящую из убитых коклюшных палочек, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбированных на гидроокиси алюминия. Применяется для плановой иммунизации одновременно против коклюша, дифтерии и столбняка. В настоящее время используют также бесклеточные вакцины АКаДС, которые содержат ацеллюлярный коклюшный компонент - коклюшный анатоксин и ряд протективных коклюшных антигенов. В РФ официально разрешено применение следующих АКаДС-вакцин, имеющих в своем составе коклюшный анатоксин, филаментозный гемагглютинин и пертактин: Инфанрикс, Инфанрикс-Гекса, Тетраксим и Пентаксим. АДС-анатоксин состоит из смеси дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбированных на гидроокиси алюминия. Применяется для плановой иммунизации против дифтерии и столбняка детей, переболевших коклюшем или привитых против коклюша. АД-анатоксин представляет собой очищенный концентрированный адсорбированный на гидроокиси алюминия препарат. Он предназначен для создания активного искусственного иммунитета к ифтерии у детей. Препараты с уменьшенным содержанием антигена (АДС-М, АД-М) менее реактогенны и применяются у детей старше 6 лет, подростков и взрослых. Для профилактики дифтерии, столбняка, коклюша, полиомиелита и гемофильной инфекции применяется французская вакцина Пентаксим. Эта вакцина содержит дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин, коклюшный анатоксин, филаментозный коклюшный гемагглютинин, инактивированные вирусы полиомиелита 1, 2 и 3 типов, полисахарид Haemophilus influenzae типа b. В соответствии с Национальным календарем профилактических прививок Российской Федерации курс вакцинации при использовании этой вакцины состоит из 3 введений препарата в возрасте 3, 4,5 и 6 месяцев, а ревакцинация осуществляется в возрасте 18 месяцев. Для иммунопрофилактики дифтерии, коклюша, столбняка и гепатита В у детей используют вакцину Бубо-Кок. Вакцина представляет собой смесь, состоящую из дифтерийного и столбнячного анатоксинов, убитых коклюшных микробов и рекомбинантного дрожжевого поверхностного антигена вируса гепатита В (HBs-антигена). Вакцина вводится внутримышечно. Для профилактики дифтерии, столбняка и гепатита В у детей старше 6 лет, подростков и взрослых используют также вакцину Бубо-М. Вакцина вводится внутримышечно в дельтовидную мышцу в дозе 0,5 мл. Наибольшее распространение в России получила вакцина АКДС – адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина. Она состоит из коклюшных бактерий, убитых формалином или мертиолятом, дифтерийного анатоксина и столбнячного анатоксина. Первая вакцинация проводится в 3 месяца, вторая в 4,5 месяца, третья – в 6 месяцев, ревакцинация – в 18 месяцев, 6 и 14 лет. Ревакцинация взрослых при дифтерии проводится с интервалом 10 лет. Препарат вводится внутримышечно или подкожно. В России зарегистрированы также другие вакцины против дифтерии: Тетракок (для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка и полиомиелита, Франция), Д. Т. Вакс (для профилактики дифтерии и столбняка у детей, Франция), ДТ-адюльт (для профилактики дифтерии и столбняка у подростков и взрослых, Франция). 21 Возбудители туберкулеза и микобактериозов у человека. Классификация микобактерий. Свойства возбудителей туберкулеза. Патогенез туберкулеза. Микробиологическая диагностика. Иммунитет. Лечебные препараты. Специфическая профилактика. Условно-патогенные микобактерии: семейство Mycobacteriaceae, род Mycobacterium. Сходны по биологич. свойствам, но устойчивы к противотуберкулезным препаратам. 1 группа: медленнорастущие фотохромогенные M.kansassi, M.marinum – поражения кожи, лимфадениты, инфекции мочеполового тракта. 2 группа: медленнорастущие скотохромогенные: M.scrofulaceum, M.gordonae. 3 группа: медленнорастущие нехромогенные: M.avium, M.gastri. 4 группа: быстрорастущие ското-,фотохромогенные: M.fortuitum, M.chelonei Туберкулез—хроническое заболевание человека, сопровождающееся поражением органов дыхания, лимфатических узлов, кишечника, костей и суставов, глаз, кожи, почек и мочевыводящих путей, половых органов, центральной нервной системы. Болезнь вызывается 3 видами микобактерий: Mycobacteriumtuberculosis — человеческий вид, Mycobacteriumbovis — бычий вид, Mycobacteriumafricanum — промежуточный вид. Таксономия. отдел Firmicutes, род Mycobacterium. Родовой признак — кислото, спирто- и щелочеустойчивость. Морфология, тинкториальные и культуральные свойства. Выраженный полиморфизм. Они имеют форму длинных, тонких (М.tuberculosis) или коротких, толстых (M.bovis), прямых или слегка изогнутых палочек с гомогенной или зернистой цитоплазмой; грамположительны, неподвижны, спор не образуют, имеют микрокапсулу. Для их выявления применяют окраску по Цилю—Нильсену. Микобактерии могут образовывать различные морфовары (L-формы бактерий), которые длительно персистируют в организме и индуцируют противотуберкулезный иммунитет. Возбудители туберкулеза характеризуются медленным ростом, требовательны к питательным средам. М.tuberculosis относятся к аэробам, глицеринзависимы. На жидких питательных средах дают рост в виде сухой пленки кремового цвета. При внутриклеточном развитии, а также при росте на жидких средах выявляется характерный корд-фактор, благодаря которому микобактерии растут в виде «жгутов». На плотных средах рост в виде кремового, сухого чешуйчатого налета с неровными краями (R-формы). По мере роста колонии приобретают бородавчатый вид. Под влиянием антибактериальных средств возбудители изменяют культуральные свойства, образуя гладкие колонии (S-формы). M.bovis —растут на средах медленнее, чем M.tuberculosis, пируватзависимы; на плотных питательных средах образуют мелкие шаровидные, серовато-белые колонии (S-формы). Ферментная активность. Высокая каталазная и пероксидазная активность. Каталаза термолабильна. М.tuberculosis в большом количестве синтезирует ниацин (никотиновая кислота), который накапливается в культуральной среде и определяется в пробе Конно. Химический состав: Основными химическими компонентами микобактерии являются белки, углеводы и липиды. Липиды (фосфатиды, корд-фактор, туберкулостеариновая кислота) - обусловливают устойчивость к кислотам, спиртам и щелочам, препятствуют фагоцитозу, нарушают проницаемость лизосом, вызывают развитие специфических гранулем, разрушают митохондрии клеток. Микобактерии индуцируют развитие реакции гиперчувствительности IV типа (туберкулин). Факторы патогенности: основные патогенные свойства обусловлены прямым или иммунологически опосредованным действием липидов и липидсодержащих структур. Антигенная структура: В ходе заболевания к антигенам образуются антипротеиновые, антифосфатидные и антиполисахаридные антитела, свидетельствующие об активности процесса. Резистентность. Наличие липидов - устойчивы к действию неблагоприятных факторов. Высушивание мало влияет. Погибают при кипячении. Эпидемиология. Основной источник инфекции — человек, больной туберкулезом органов дыхания, выделяющий микробы в окружающую среду с мокротой. Основные пути передачи инфекции — воздушно-капельный и воздушно-пылевой. Патогенез и клиника. Возникновению заболевания способствуют различные иммунодефициты. Инкубационный период составляет от 3—8 нед. до 1 года и более. В развитии болезни выделяют первичный, диссеминированный и вторичный туберкулез, который является результатом эндогенной реактивации старых очагов. В зоне проникновения микобактерий возникает первичный туберкулезный комплекс, состоящий из воспалительного очага, пораженных регионарных лимфатических узлов и измененных лимфатических сосудов между ними. Диссеминация микробов может происходить бронхо-, лимфо- и гематогенно.В основе специфического воспаления при туберкулезе лежит реакция гиперчувствительности IV типа, что препятствует распространению микробов по организму. Различают 3 клинические формы: первичная туберкулезная интоксикация у детей и подростков, туберкулез органов дыхания, туберкулез других органов и систем. Основными симптомами легочного туберкулеза являются субфебрильная температура тела, кашель с мокротой, кровохарканье, одышка Иммунитет. Противотуберкулезный иммунитет нестерильный инфекционный, обусловлен наличием в организме L-форм микобактерий. Микробиологическая диагностика. Диагностику проводят с помощью бактериоскопии, бактериологического исследования и постановки биологической пробы. Все методы направлены на обнаружение микобактерий в патологическом материале: мокроте, промывных водах бронхов, плевральной и церебральной жидкостях, кусочках тканей из органов. К обязательным методам обследования относится бактериоскопическое, бактериологическое исследование, биологическая проба, туберкулинодиагностика, основанная на определении повышенной чувствительности организма к туберкулину. Чаще для выявления инфицирования и аллергических реакций ставят внутрикожную пробу Манту с очищенным туберкулином в стандартном разведении. Для экспресс-диагностики туберкулеза применяют РИФ(реакция иммунофлюоресенции) и ПЦР(полимеразная цепная реакция). Для массового обследования населения, раннего выявления активных форм туберкулеза можно использовать ИФА(иммуноферментный анализ), направленный на обнаружение специфических антител. Лечение. По степени эффективности противотуберкулезные препараты делят на группы: группа А — изониазид, рифампицин; группа В — пиразинамид, стрептомицин, флоримицин; группа С – ПАСК, тиоацетозон. При наличии сопутствующей микрофлоры и множественной лекарственной устойчивости микобактерий применяют фторхинолоны и альдозон. Профилактика. Специфическую профилактику проводят путем введения живой вакцины — BCG(БЦЖ), внутрикожно на 2—5-й день после рождения ребенка. Проводят последующие ревакцинации. Предварительно ставят пробу Манту для выявления туберкулиннегативных лиц, подлежащих ревакцинации. 22 Патогенные спирохеты, классификация. Возбудитель сифилиса. Патогенез сифилиса. Микробиологическая диагностика. Спирохеты представляют собой извитые (штопороподобные) тонкие микроорганизмы (греч. spira - спираль, виток, chaite - волос). Спирохеты относятся к типу (филуму) Spirochaetes, классу Spirochaetia, порядку Spirochaetales. В состав этого порядка входят семейства Spirochaetaceae (рода Treponema и Spirochaeta), семейство Borreliaceae (род Borrelia) и семейство Leptospiraceae (род Leptospira). К роду Treponema относится возбудитель сифилиса, к роду Borrelia – возбудители клещевых боррелиозов, к роду Leptospira - возбудитель лептоспироза. Treponema Pallidum ; T. entericum Морфология: типичные трепонемы. имеющие 8-12 завитков, двигательный аппарат – 3 периплазматических жгутика у каждого полюса клетки. Окраску по Граму не воспринимают, по Романовскому-Гимзе – слабо розового цвета, выявляется импрегнацией серебром. Культуральные свойства: вирулентный штамм на пит. средах не растѐт, накопление культуры происходит путѐм заражения кролика в яичко. Вирулентные штаммы культивируют на средах с мозговой и почечной тканью. Биохимические свойства: микроаэрофил. Некоторые штаммы разлагает глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу и маннит с образованием кислоты (бродильный метаболизм); образуют индол и сероводород; разжижают желатину. Трепонемы не продуцируют каталазу, уреазу, оксидазу, не восстанавливают нитраты. Антигенная структура: солжная, обладает специфическим белковым и липоидным антигенами, последний по своему составу идентичен кардиолипину, экстрагированному из бычьего сердца ( дифосфадилглицерин ) Факторы патогенности: в процессе прикрепления участвуют адгезины, липопротеины учавствуют в развитии иммунопатологических процессов. Резистентность: чувствителен к высыханию, солнечным лучам, на предметах сохраняется до высыхания. При неблагоприятных условиях переходит в L-формы и образует цисты. Патогенез: Вызывают сифилис. Из места входных ворот трепонемы попадают в регионарные лимфатические узлы, где размножаются. Далее Т. проникает в кровяное русло, где прикрепляется к эндотелиоцитам, вызывая эндартерииты, приводящие к васкулитам и тканевому нектрозу. С кровью Т. разносится по всему организму, обсеменяя органы: печень, почки, костную, сердечно-сосудистую, нервную системы. Клиника. В соответствии с Международной классификацией болезней 10 пересмотра (МБК-10) вместо стадий выделяют следующие клинические формы сифилиса: - ранний сифилис (первичный сифилис, вторичный сифилис, ранний сифилис скрытый, ранний сифилис неуточненный); - поздний сифилис (поздний сифилис скрытый, кардиоваскулярный сифилис, нейросифилис и другие формы сифилиса); - врожденный сифилис (ранний врожденный сифилис, поздний врожденный сифилис и другие формы). В повседневной практике традиционно течение сифилиса подразделяется на следующие периоды: - инкубационный период; - первичный сифилис; - вторичный сифилис; - третичный сифилис. Инкубационный период в среднем длится 3-4 недели с момента заражения. Если в течение инкубационного периода применяются антибиотики, продолжительность инкубационного периода может увеличиваться до 3-4 месяцев. В течение инкубационного периода трепонемы преимущественно лимфогенным путем постепенно распространяются по организму, достигая региональных лимфатических узлов. Уже в первые дни после заражения трепонемы в небольшом количестве проникают в кровь. Таким образом, к началу первичного сифилиса возбудитель распространяется по организму. Инкубационный период продолжается от момента проникновения возбудителя в организм до возникновения в месте входных ворот твердого шанкра. |