Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
Изучение реакций окисленияБиологическое окисление – это окисление различных веществ в клетке в процессе её жизнедеятельности. Основной функцией биологического окисления является обеспечение организма энергией в доступной для использования форме (прежде всего в форме АТФ) и превращение питательных веществ в компоненты клеток. Окисление субстрата в процессе дыхания начинается с его дегидрирования – отнятия водорода. Этот процесс катализируется ферментами дегидрогеназами, которые относятся к I классу ферментов – окисдоредуктазам. По химической природе анаэробные дегидрогеназы относятся к пиридинпротеинам и флавинпротеинам. Пиридинзависимые дегидрогеназы в качестве кофактора (кофермента) содержат никотинамидаденидиникулеотид (НАД+) или никотинамидадениндинуклеотидфосфат (НАДФ+). Флавинзависимые дегидрогеназы – флавинадениндинуклеотид (ФАД) или флавинмононуклеотид (ФМН). Лабораторная работа №12Открытие альдегиддегидрогеназы в молокеФермент альдегиддегидрогеназа вырабатывается микроорганизмами, попадающими в молоко извне. По химической природе он относится к флавопротеинам, способным окислять альдегиды, в частности, формальдегид. Принцип метода. При добавлении к некипяченому молоку формальдегида и метиленовой сини альдегиддегидрогеназа окисляет формальдегид в муравьиную кислоту, а освобождающийся при этом водород переносится на метиленовую синь, восстанавливая ее в бесцветное соединение. Исследуемый материал и реактивы 1. Кипяченое молоко. 2. Некипяченое молоко. 3. Раствор формальдегида (0,4%). 4. Раствор метиленовой сини (0,01%). Ход работы В одну пробирку вносят 15 капель кипяченого молока, в другую — 15 капель некипяченого. В каждую пробирку вносят по капле 0,4% раствора формальдегида и по капле 0,01% раствора метиленовой сини. Пробирки встряхивают и закрывают пробками, чтобы создать относительно анаэробные условия. Пробирки помещают в термостат при 370С и отмечают через 5 мин. Постепенное обесцвечивание метиленовой сини. Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите, принцип метода, ход работы, зарисуйте полученные результаты (окраска проб), сделайте вывод и укажите класс исследуемого Вами фермента. Контрольные вопросы
Лабораторная работа №13Обнаружение каталазы кровиВ процессе окислительно-восстановительных процессов в организме образуется токсичная для клеток перекись водорода. Обезвреживание перекиси водорода, путем разложения её на воду и молекулярный кислород, катализируется геминсодержащим ферментом – каталазой.  Каталаза содержится во всех тканях и жидкостях организма. Принцип метода. В результате разложения перекиси водорода под действием каталазы крови происходит бурное выделение кислорода в виде пузырьков. Исследуемый материал и реактивы 1. Кровь. 2. Спирт. 3. Вата. 4. Скарификатор. 5. Перекись водорода (3%). Ход работы Взятие крови. Кровь для клинического анализа берут обычно после укола скарификатором в мякоть пальца. Перед взятием крови мякоть пальца должна быть высушена и обезжирена. Для этого кожу протирают спиртом и вытирают насухо стерилизованной марлей или ватным тампоном (см. Приложение). Укол не должен быть слишком поверхностным: от того, как нанесен укол, зависит интенсивность и длительность кровотечения. Первую выступившую каплю крови стирают и дают появиться второй. Выдавливать кровь их пальца не рекомендуется. В пробирку вносят 10-15 капель 3% Н2О2 и 1 каплю крови. Отмечают бурное выделение пузырьков кислорода и пена заполняет всю пробирку. Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите принцип метода, реакцию, катализируемую каталазой крови, ход работы, зарисуйте полученные результаты и сделайте выводы. Контрольные вопросы
|