Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
Биохимия липидовЛипиды – биологически важные органические соединения растительного и животного происхождения разнообразной химической структуры, нерастворимые в воде и растворимые в малополярных органических растворителях (эфир, спирт, хлороформ, ацетон и др.). Липиды – важная составная часть пищевых продуктов не только вследствие высокой энергетической ценности, но также и потому, что в натуральных пищевых жирах содержатся жирорастворимые витамины и «незаменимые» жирные кислоты (полиненасыщенные), которые являются предшественниками таких биологически активных веществ как гормоны, витамины, простагландины. Липиды, наряду с белками, играют важную роль в структурной организации клеточных мембран, поэтому с ними связаны многие эффекты лекарственной терапии. Лабораторная работа №17Эмульгирование триацилглицеридов желчными кислотамиПереваривание липидов происходит в основном в кишечнике под влиянием активной панкреатической липазы, так как в желудочном соке липаза малоактивна и действует только на эмульгированный жир, например, молока. Чтобы подвергнуться действию липаз, липиды должны быть эмульгированы. Основным эмульгатором липидов являются желчные кислоты, вырабатываемые в печени (10-15 г в сутки). Принцип метода. Желчные кислоты являются поверхностно-активными веществами и при взбалтывании триацилглицеридов с раствором желчи образуется стойкая эмульсия, так как молекулы желчных кислот снижают поверхностное натяжение обволакивают капельки жира и препятствуют их слиянию. Исследуемый материал и реактивы 1. Желчь. 2. Растительное масло. 3. Вода. Ход работы В две пробирки наливают по 20 капель: в первую – желчи, разведенной вдвое, во вторую – воды. В каждую пробирку добавляют по 2 капли растительного масла и тщательно взбалтывают. Через 5 минут наблюдают стойкость эмульсии. Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты и сделайте выводы. Контрольные вопросы
Лабораторная работа №18Качественная реакция Петтенкоффера на желчные кислотыВ организме человека основными желчными кислотами являются холевая, дезоксихолевая, хенодезоксихолевая, литохолевая и другие кислоты, которые выделяются с желчью в свободном виде и в виде парных желчных кислот, связанных с глицином или таурином. Принцип метода. Реакция основана на образовании окрашенного соединения холевых кислот с оксиметилфурфуролом, который образуется из тростникового сахара под влиянием серной кислоты. При добавлении к раствору желчи или желчных кислот раствора сахарозы и подслоении смеси концентрированной серной кислоты на границе двух жидкостей появляется красное кольцо. Реакция обусловлена образованием окрашенных продуктов желчных кислот с фурфуролом, который образуется из фруктозы при действии на сахарозу концентрированной серной кислоты. Исследуемый материал и реактивы 1. Раствор желчи. 2. Раствор сахарозы (5%). 3. Серная кислота концентрированная. Ход работы К 10 каплям разведенного (1:2) раствора желчи добавляют 1 каплю 5% раствора сахарозы и осторожно(!), по стенке пробирки, наклоненной под углом 45о, добавляют равный объем концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей образуется осадок желчных кислот и появляется красно-фиолетовое кольцо. Охлаждая пробирку под краном, осторожно смешивают обе жидкости. Смесь приобретает вишнево-красную окраску. Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, зарисуйте полученный результат и сделайте выводы. Контрольные вопросы
Лабораторная работа №19Определение содержания β-липопротеинов (липопротеинов низкой плотности) в плазме кровиБольшинство липидов находятся в крови не в свободном состоянии, а в составе белково-липидных комплексов (липопротеинов). Фракции липопротеинов отличаются по количеству белка, относительной молекулярной массе липопротеинов и процентному содержанию отдельных липидных компонентов. При электрофоретическом разделении липопротеинов плазмы крови получают фракции хиломикронов и липопротеинов различной плотности: α-липопротеины (ЛПВП) – имеют подвижность α-глобулинов, β-липопротеины (ЛПНП) – обладают подвижностью β-глобулинов, и пре-β-липопротеины (ЛПОНП). Определение содержания β-липопротеинов в плазме крови имеет значение для диагностики атеросклероза, острых и хронических заболеваний печени, ксантоматоза и другой патологии. Нормальная концентрация β-липопротеинов в сыворотке крови составляет: у женщин – 1,9-6,0 г/л; у мужчин – 2,2-7,4 г/л. Повышение уровня липопротеинов в крови тесно связано с гиперхолистеринемией, поскольку холестерол входит главным образом в состав β-липопротеинов. Увеличение фракции β-липопротеинов может иметь место при диабете, гипотиреозе, некоторых острых гепатитах, резких гипопротеинемиях. Уменьшение может наблюдаться при острых инфекциях, тяжелых анемиях, гипертиреоидизме. Принцип метода. Спектрофотометрический метод. В основу метода положена способность β-липопротеинов (ЛПНП) осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора. По степени помутнения раствора и судят о концентрации β-липопротеинов в сыворотке крови. Исследуемый материал и реактивы 1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор.5. Раствор хлорида кальция (0,025М). 6. Раствор гепарина. Ход работы В пробирку вносят 2 мл 0,025М раствора хлорида кальция и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают и определяют экстинкцию (Е1) на фотоэлектроколориметре против раствора хлорида кальция в кюветах толщиной слоя 5мм при красном светофильтре (630 нм). Затем в кювету добавляют 0,1 мл раствора гепарина, перемешивают и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность раствора (Е2) в тех же условиях. Разница Е2- Е1 приходится на экстинкцию, обусловленную β-липопротеинами. Вычисляют разность оптической плотности и умножают ее на 10 – эмпирический коэффициент, предложенный Ледвиной, т. к. построение калибровочной кривой сопряжено с рядом трудностей. В норме содержание β-липопротеинов составляет 3–4,5 г/л. Содержание β-липопротеинов колеблется в зависимости от возраста и пола. Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты: Е1= Е2= х(г/л) = (Е2 – Е1)*10, x (г/л) = Сделайте выводы о возможных причинах отклонения полученных результатов от нормальных величин. Контрольные вопросы
|