Лаб. практикум. Практикум по биологической химии методические указания к проведению лабораторных работ по биологической химии для студентов второго курса
 Скачать 1.02 Mb.
|
Лабораторная работа №20Качественные реакции на холестеролСвободный холестерол и его эфиры являются одними из основных липидных компонентов крови. Уровень холестерола в крови колеблется в пределах 3,6-6,4 ммоль/л. Холестерол – важный элемент мембранной структуры, предшественник стероидных гормонов, витамина Д, желчных кислот. Холестерол присутствует в пищевых жирах и может синтезироваться многими тканями. Уровень холестерола даже у здорового человека может колебаться в зависимости от возраста, физической нагрузки, умственного напряжения и времени года. При нарушении жирового обмена холестерол может накапливаться в крови. Увеличение уровня холестерола в плазме крови (гиперхолестеролемия) наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, механической желтухе, нефрите, нефрозе (особенно при липоидных нефрозах), гипотиреозе. Понижение холестерола в крови (гипохолестеролемия) наблюдается при анемиях, голодании, туберкулезе, гипертиреозе, раковой кахексии, паренхиматозной желтухе, поражении центральной нервной системы, лихорадочных состояниях, при введении инсулина.
Принцип метода. При добавлении к хлороформенному раствору холестерола или растительного масла концентрированной серной кислоты жидкость окрашивается в красный цвет. Реакция обусловлена образованием холестерилена – продукта дегидратации холестерола красного цвета:   Исследуемый материал и реактивы 1. Хлороформный раствор холестерола (1%). 2. Серная кислота концентрированная. Ход работы В сухую пробирку наливают 10 капель хлороформного раствора холестерола и добавляют равный объем концентрированной серной кислоты (Осторожно! По стенке пробирки!). При легком встряхивании на границе двух слоев жидкости образуется оранжевое кольцо, которое при стоянии переходит в красное.
Принцип метода. Метод основан на дегидратации холестерола с последующим соединением двух молекул холестерола в бихолестадиен, который в присутствии уксусного ангидрида и сульфокислоты дает сульфопроизводное зеленого цвета. Исследуемый материал и реактивы 1. Хлороформный раствор холестерола (1%). 2. Уксусный ангидрид. 3. Серная кислота концентрированная. Ход работы В сухую пробирку наливают 10 капель хлороформного раствора холестерола и добавляют в неё 10 капель уксусного ангидрида и 2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется вначале красное окрашивание, преходящее затем в сине-зеленое и зеленое. Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты (окраска исследуемой жидкости), химизм реакций и сделайте выводы. Контрольные вопросы
биохимия белковОбмен белковых соединений занимает ведущее место в многообразных превращениях веществ, характерных для всех живых организмов. Исключительно перспективно перспективным является изучение обмена белков с целью выяснения особенностей их метаболизма и биосинтеза, овладения тонкими молекулярными механизмами, дающими ключ к пониманию развития и течения патологических процессов, а также целенаправленному воздействия на многие процессы жизнедеятельности, в том числе и для понимания механизмов действия лекарственных средств, направленных на коррекцию нарушений белкового обмена. Лабораторная работа №21Качественный анализ желудочного сокаВажное место в переваривании белков принадлежит желудку. Под влиянием соляной кислоты желудочного сока белки набухают и подвергаются действию фермента пепсина, который гидролизует молекулы белка на крупные полипептиды. Желудочный сок представляет собой прозрачную бесцветную жидкость резко кислой реакции, являющуюся секретом желудочных желез. В состав нормального желудочного сока входят вода, ферменты пепсин и липаза, муцин, белки, соляная кислота, кисло реагирующие фосфаты, хлористый натрий и некоторые другие вещества. Чистый желудочный сок взрослого человека имеет сильнокислую реакцию (рН ≈ 1). Желудочное содержимое, в котором желудочный сок смешан с пробным завтраком, имеет менее кислую реакцию (рН=1,5-2,0). (*) У детей кислотность желудочного сока гораздо ниже. Желудочный сок новорожденных имеет рН=7,0, к 1 году жизни кислотность достигает рН=3,4, к 4-7 годам – 2,5 и к 7-14 годам 2,0. Это связано с низким содержанием в желудочном соке детей соляной кислоты, уровень которой достигает нормы взрослых только к 7 годам. Количество желудочного сока, образующегося у человека за сутки, составляет около 2,5 л. Удельный вес его колеблется в пределах от 1,003 до 1,01.
Нормальный желудочный сок всегда содержит свободную соляную кислоту. Её можно обнаружить по сильнокислой реакции (рН ниже 3,0). Принцип метода. В присутствии соляной кислоты универсальная индикаторная бумага принимает красную окраску, которая свидетельствует о кислой реакции желудочного сока. Исследуемый материал и реактивы 1. Нативный желудочный сок. 2. Универсальная индикаторная бумага Ход работы Одну каплю желудочного сока наносят стеклянной палочной на универсальную индикаторную бумагу. Отмечают изменение окраски универсального индикатора и делают вывод о реакции исследуемого желудочного сока
При отсутствии соляной кислоты в желудке развиваются процессы брожения (под влиянием микроорганизмов), в результате чего образуется молочная кислота, содержание которой иногда достигает больших количеств. Молочная кислота может появляться в желудочном содержимом при раке желудка. Обнаружить молочную кислоту можно реактивом Уфельмана, который получается при смешивании хлорного железа с фенолом. При этом возникает аметистово-фиолетовое окрашивание за счет образования комплексного фенолята железа. Принцип метода. В присутствии молочной кислоты окраска реактива Уфельмана становится зелено-желтой вследствие образования малодиссоциирующей соли железа (молочнокислого железа). Сильные кислоты, в том числе соляная, полностью разрушают комплекс железа с фенолом и обесцвечивают раствор. Исследуемый материал и реактивы 1. Желудочный сок (без соляной кислоты) с молочной кислотой. 2. Фенол (1%) 3. Хлорное железо (1%). 3. Молочная кислота (0,1%) 4. Соляная кислота (0,2%). Ход работы Готовят реактив Уфельмана. Для этого к 10 мл раствора фенола добавляют несколько капель хлорного железа и взбалтывают. Жидкость окрашивается в аметистово-фиолетовый цвет. Реактив разводят водой в случае слишком интенсивной окраски. В 3 пробирку наливают по 2-3 мл реактива Уфельмана. В превую добавляют по каплям раствор молочной кислоты, во вторую пробирку – желудочный сок, содержащий молочную кислоту, и в третью – раствор соляной кислоты. В первой и второй пробирках появляется зелено-желтое окрашивание, в третьей – раствор обесцвечивается (реакция отрицательная). Указания к оформлению лабораторной работы В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты и сделайте выводы о реакции и составе желудочного сока. Контрольные вопросы
|