1-16 микра. Тема 1 Морфология микроорганизмов. Бактериоскопический метод диагностики

• Название: Тема 1 Морфология микроорганизмов. Бактериоскопический метод диагностики
• Дата: 16.01.2022
• Размер: 0.84 Mb.
• Имя файла: 1-16 микра.doc
• Тип: Документы; #332317
• страница: 5 из 12

2. Основные методы диагностики вирусных инфекций

Применяют три основных метода:

1. 
   вирусологическая диагностика — основана на выделении вируса из исследуемого материала и его идентификации;
   
2. 
   серологическая диагностика-выявление с помощью диагностикумов противовирусных антител в сыворотке крови, т.е. определение специфических имуннологических изменений в организме под действием вирусов;
   
3. 
   молекулярно-генетическая диагностика — обнаружение в исследуемом материале с помощью зондов (гибридизация НК) или ПЦР фрагментов НК вирусов — возбудителей.
   

3. Вирусологический метод лабораторной диагностики

а) Работа с клеточными культурами

Вирусы — внутриклеточные паразиты, размножаются только в живых системах: культуре клеток, куриных эмбрионах или чувствительных животных. Наиболее трудоемкой является работа с клеточными культурами. Используют первичные, полуперевиваемые (диплоидные) и перевиваемые клеточные культуры.

Первичные клеточные культуры получают из эмбриональной ткани человека или животного, хорошо растут и размножаются. Культуры клеток готовят чаще всего из смеси нескольких тканей, разрушают их межклеточное вещество протеолитическими ферментами. Диспергированные (разобщенные) клетки, помещенные в питательную среду, способны прикрепляться к поверхности культурального сосуда и размножаться, образуя монослой — толщиной в одну клетку. Клетки можно снять с поверхности одного сосуда и пересадить в другой (произвести пассаж). Способность к делению и размножению у первичных культур ограничена 5-10 пассажами.

Перевиваемые (пассажные) клеточные культуры выдерживают неограниченное число пассажей, их получают из опухолевых клеток, утративших способность к дифференциации, но не утративших способность к неограниченному росту. Перевиваемые (стабильные) клеточные культуры сохраняют замороженными в жидком азоте и при необходимости используют в исследовательской работе и для проточного культивирования клеточной массы при производстве вакцин.

Полуперевиваемые (диплоидные) культуры — иногда формируется в результате нескольких последовательных пассажей. Диплоидная культура — популяция фибробластоподобных клеток, способных к быстрому размножению, выдерживают до 30-60 пассажей и сохраняют исходный набор хромосом. Диплоидные клетки человека высокочувствительны ко многим вирусам, находят широкое применение в вирусологии, занимают промежуточное положение между первичными и перевиваемыми клеточными культурами.

Для культур клеток готовят сложные питательные среды — ростовые и поддерживающие. Так вкратце готовят культуры живых клеток для культивирования вирусов.

б) Взятие и подготовка материала для вирусологической диагностики.

Исследуют содержимое пустул, везикул, соскобы эпителия, спинномозговую жидкость, смывы из верхних дыхательных путей, фекалии, мазки. Пробы берут асептически, чтобы исключить попадания посторонней микрофлоры и не инфицировать себя; пересылают их в контейнерах с сухим льдом; хранят при температуре — 70⁰С. Мазки и соскобы хранят в стабилизирующей среде, питательном растворе Хенкса с инактивированной сывороткой и антибиотиками для подавления сопутствующей микрофлоры.

В пробирки с монослоем культуры клеток вносят 0,1-0,2 мл материала для вирусологического исследования, через час после заражения вносят поддерживающую среду и культивируют при 37⁰С.

В куриные эмбрионы (6-15 дневные) вируссодержащий материал вводят шприцем на ХАО (хорионаллантоисную оболочку), в желточный мешок, полости амниона и аллантоиса. Скорлупу обрабатывают иодом и спиртом. Поврежденные участки заливают стерильным парафином или коллодием.

Экспериментальные животные в вирусологии применяют для:

1. 
   диагностики вирусных инфекций;
   
2. 
   получения иммунных противовирусных сывороток и ингредиентов крови (эритроцитов, плазмы, лейкоцитов и т.д.);
   
3. 
   моделирования вирусных инфекций для изучения патогенеза, иммунитета и т.д.;
   
4. 
   разработки способов специфической и неспецифической профилактики и лечения.
   

в) Индикация вирусов.

Полученный выше изложенными способами вирус в живой системе называют вируссодержащим материалом.

В культуре клеток вирусы обнаруживаются по ЦПД (цитопатическому действию), дегенеративному изменению в клетках, которые появляются в результате репродукции в них вирусов. Характер ЦПД зависит от вида вируса.

При полной дегенерации клетки монослоя подвергаются значительным изменениям, большая часть их слущивается со стекла, остающиеся единичные клетки сморщены из-за пикноза ядра и цитоплазмы. При микроскопии наблюдается сильное свечение, двойное лучепреломление. Полная дегенерация клеток характерна для вируса полиомиелита, Коксаки и ЕСНО. При частичной дегенерации имеет место 1) гроздеобразование — клетки округляются, увеличиваются, частично сливаются между собой, образуют гроздья (аденовирусы); 2) очаговая деструкция — появляются на фоне монослоя очаги пораженных клеток — микробляшки (вирусы гриппа, оспы); 3) симпластобразование — под действием вирусов клетки сливаются между собой с образованием огромных многоядерных клеток — симпластов, синтициев (вирусы герпеса, ВИЧ, кори и др.).

Пролиферативный тип изменений клеток характерен для некоторых онковирусов, проявляется в способности клеток неограниченно делиться.

Выявление вирусов по реакции гемадсорбции РГадс. Сложные вирусы в составе суперкапсида имеют специфические гликопротеиды -гемагглютинины (парамиксовирусы, ортомиксовирусы). При добавлении в культуру клеток после определенного срока инкубации вируса взвеси эритроцитов наблюдается скопление эритроцитов на отдельных клетках или на всем монослое (результат учитывают под малым увеличением микроскопа). На зараженных вирусом клетках эритроциты отсутствуют.

Не всегда реакция гемадсорбции in vitro вызывает гемадсорбцию в культуре клеток, а только тогда, когда в процессе взаимодействия вируса с клеткой вирусный гемагглютинин встраивается в структуру наружной клеточной мембраны и изменяет ее свойства.

Выявление вируса по цветной пробе.

В результате жизнедеятельности клеток в среде накапливаются кислые продукты. Цвет индикатора в среде (феноловый красный) становится оранжевым. При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами (реовирусы, энтеровирусы) метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются, остается красной.

Выявление вируса по внутриклеточным включениям.

Вирусы оспы, бешенства, гриппа, герпеса и др. образуют при репродукции внутриклеточные включения в ядре и цитоплазме.

Включения видны при микроскопии после окрашивания монослоя по Романовскому-Гимзе, а также при люминисцентной микроскопии после обработки акридиновым оранжевым (1:2000).

Электронная микроскопия вирусов.

Позволяет выявить вирус в отдельных клетках и скопления вирионов в ядре или цитоплазме для вирусов с типичной морфологией (вирус оспы).

Выявление с помощью прямой РИФ.

Происходит взаимодействие вирусных антигенов с антителами диагностической иммунной сыворотки или моноклональными антителами. С помощью РИФ можно обнаружить специфический вирусный антиген в культурах клеток, инфицированных вирусом.

Выявление вирусов по образованию бляшек. Бляшки представляют собой очаги разрушенных вирусом клеток монослоя под агаровым покрытием. По количеству бляшек судят об активности вирусов, его концентрации. Для получения бляшек на однослойные культуры ткани в плоских флаконах или чашки Петри наносят разведение вирусной суспензии и покрывают их слоем агарового покрытия.

Репродукция вируса и ЦПД ограничиваются первоначально инфицированными и соседними с ними клетками. Очаги дегенерации клеток - «бляшки» выявляют путем окрашивания культуры нейтральным красным, который входит в состав агарового покрытия или добавляют индикатор перед учетом результатов. Бляшки состоят из погибших клеток, не окрашиваются, выглядят в виде светлых пятен на фоне красного монослоя. Один вирион образует потомство в виде одной бляшки. «Негативные» колонии разных вирусов отличаются по размеру, форме. Метод бляшек используют для дифференциации вирусов и для определения их концентрации.

Обнаружение вирусов в куриных эмбрионах. Зараженные эмбрионы культивируют при 35-37⁰С в течение 48-72ч. Затем яйца охлаждают при 4⁰С в течение 18 часов и асептически вскрывают.

При репродукции вирусов появляются характерные изменения на ХАО. Вирусы нат. оспы, простого герпеса образуют бляшки — выпуклые белые пятна (1-2мм) по числу инфекционных частиц.

Реакция гемагглютинации — РГА (для ортомиксовирусов и парамиксовирусов). Показателем накопления этих вирусов является гемагглютинация (склеивание) куриных или других эритроцитов аллантоисной и амниотической жидкостью зараженных куриных эмбрионов. Вирусы содержат поверхностные структуры гемагглютинины, ответственные за агглютинацию эритроцитов. РГА не является иммунологической, т.к. здесь нет взаимодействия АГ+АТ=ИК (им.комплекс).

Результаты РГА зависят от многих факторов, в т.ч. и от некоторых микроорганизмов — стаф., эшерихии, шигеллы, хол. вибр. эль-тор, которые вызывают гемагглютинацию. Это надо иметь в виду.

Обнаружение вирусов в организме животных

В зависимости от вида животного и типа вируса способы обнаружения вируса в организме чувствительных животных различаются и будут рассмотрены при диагностике отдельных инфекций.
4. Методы идентификации выделенных вирусов

Проводят по следующим признакам:

а) патологическим изменениям в чувствительных живых системах;

б) антигенным свойствам вирусов в серологических реакциях с противовирусными видовыми и типовыми сыворотками (основная и точная идентификация);

в) наличию НК в ПЦР;

г) результатам исследования морфологии вирусов при электронной микроскопии.

Идентификация по антигенной структуре.

Реакция нейтрализации РН основана на нейтрализации инфекционной активности вирусов при связывании со специфическими антителами.

Готовят серийные разведения из вируссодержащего материала и добавляют к ним специфическую сыворотку. Смесь вирус-сыворотка инкубируют при 37⁰С в течение 1ч. После этого заражают культуру ткани, куринные эмбрионы, животных. Контроль — живая система, зараженная вирусом. Реакция положительная, если подавляется ЦПД в культуре клеток, нет бляшкообразования, патологических изменений в эмбрионах и животных.

Цветная проба — один из вариантов РН. При положительной реакции противовирусные антитела блокируют размножение вируса в культуре клеток и метаболиты клеток изменяют цвет индикатора.

Реакция торможения гемагглютинации РТГА.

Блокируют вирусные гемагглютинины специфическими антителами. Можно рассматривать как один из вариантов РН. РТГА используют как для серологической диагностики, так и для идентификации геммаглютинирующих вирусов. Образуется компактный осадок эритроцитов вместо «зонтика» гемагглютинации. Реакцию проводят на полистироловых пластинах и оценивают по отсутствию склеивания эритроцитов, добавленных к смеси вируса и специфической сыворотки.

Реакция торможения гемадсорбции — РТГадс, используется для идентификации гемадсорбирующих вирусов. Основана на нейтрализации адсорбции эритроцитов на поверхности клеток, инфицированных вирусами. О видовой принадлежности вируса судят по отсутствию адсорбции эритроцитов в опыте при типичной гемадсорбции в контрольных пробирках.

Другие реакции для идентификации вирусов в клеточных культурах: РПГ — реакция преципитации в геле, РСК, РИФ, РОНГА — реакция обратной непрямой гемаглютинации, ИФА, РИА со специфическими иммунными противовирусными сыворотками или моноклональными АТ.

Идентификация по другим признакам. Патологические изменения в живых системах (культура клеток, куриные эмбрионы, животные), морфологические свойства вирусов будут приведены при рассмотрении конкретных вирусных инфекций. Молекулярно-биологические методы диагностики врусных инфекций даны в теме: «Молекулярно-генетический метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний» (Метод молекулярной гибридизации, ПЦР, Саузерн- и Нозерн -блоттинг).

Серологическая диагностика вирусных инфекций основана на выявлении в крови больного противовирусных антител в серологических реакциях с использованием специфических вирусных антигенов — диагностикумов или специфических тест-систем.

В основе серологических реакций лежит реакция взаимодействия вирусных антигенов и гомологичных антител в жидкой среде (РСК, РТГА, РНГА, РОНГА, РТОНГА, РИА), в геле (РПГ, РРГ, РВИЭФ), при фиксации одного из ингредиентов на твердой фазе (ИФА, ИЭМ, РГадсТО, РИФ, РГадс, РТГадс).

Для серологических реакций, в частности, для выявления антител, асептически берут сухим стерильным шприцем 15-20 мл крови. Сыворотку хранят при -20⁰С. Нарастание титра антител определяют в парных сыворотках, которые берут в начале и в разгар болезни или в период рековалесценции. Для постановки диагноза нарастание титра антител должно быть в 4 раза и более.

Для повышения чувствительности серологических реакций, т.е. повышения чувствительности тестов антигены или антитела адсорбируют на эритроцитах (РНГА, РОНГА, РТОНГА, РГадсТО, РРГ), метят их ферментами (ИФА), радиоактивными изотопами (РИА, РПГ), флюорохромами (РИФ) или же используют лизис эритроцитов при взаимодействии АГ и АТ в присутствии комплемента (РСК, РРГ). Серологические реакции при диагностике вирусных инфекций имеют свои особенности и модификации. Например, РСК (на холоду +4⁰С), РРГ (в агарозном геле).

Методы экспресс-диагностики вирусных инфекций - их отличает высокая специфичность и чувствительность.

РИФ — применяют в прямом и непрямом вариантах для выявления вируса в материале от больного, в культуре клеток и организме животных.

ИЭМ — иммунная электронная микроскопия позволяет обнаружить скопление вирусных частиц, связанных с антителами (вирусы гепатитов А и В и мн. др.).

РВИЭФ — реакция встречного иммуноэлектрофореза — применяется для обнаружения в сыворотке больных поверхностных антигенов (например HBsAg у больных генатипом В) и др. вирусных антигенов, имеющих отрицательный заряд (но не антител!!!). РгадсТО — реакция гемадсорбции на твердой основе —это сочетание ИФА и РНГА, высокочувствительный анализ.

Лунки полистироловых панелей обрабатывают иммунной сывороткой и вносят в них суспензию исследуемого материала, содержащего антиген. Через час лунки промывают буфером, добавляют эритроциты, покрытые специфическим иммуноглобулином и через час определяют наличие гемаглютинации.

Если есть в материале специфический антиген, он соединяется с сывороткой на поверхности лунок и связывает иммуноглобулины на поверхности эритроцитов. Происходит агрегация эритроцитов (гемагглютинация). Эта модификация реакции применяется для ротавирусов и других вирусов при исследовании фекалиев.

Молекулярно-биологические методы. ПЦР и другие методы генодиагностики, о них уже говорилось в соответствующей теме лекции.

Тема8: Частная вирусология

Характеристика респираторных вирусных инфекций

План:

1. 
   Грипп
   
2. 
   Реакция торможения гемагглютинации при серодиагностике гриппа
   
3. 
   ОРВИ
   
4. 
   Характеристика энтеровирусов.
   
5. 
   Характеристика дерматропных вирусов: герпесвирусы; натуральной оспы, кори, краснухи
   
6. 
   Характеристика арбовирусов; вирус клещевого энцефалита.РСК для диагностики клещевого энцефалита.
   
7. 
   Вирус бешенства
   
8. 
   Вирусы гепатитов А, В, С, D, Е, G.
   
9. 
   ИФА для определения НВV антигена
   
10. 
    Возбудители МВИ
    
11. 
    Онкогенные вирусы и ретровирусы
    
12. 
    ВИЧ – инфекция
    

Грипп – острая массовая вирусная инфекция, характеризующаяся поражением в основном верхних дыхательных путей. Возбудитель гриппа серотипы А, В, С.

Таксономия. Вирус гриппа относится к сем. Orthomyxoviridae роду Ynfluenzavirus, различают 3 типа А, В, С. Вирус типа А обнаружен у человека, млекопитающих и птиц, имеет наибольшее значение; типом В и С болеют дети.

Структура вируса гриппа А. Имеет одноцепочечнную РНК из 8 фрагментов. Сегментированность позволяет двум вирусам легко обмениваться генетической информацией, и это определяет высокую изменчивость вируса. Капсомеры вокруг РНК уложены по спиральному типу, оболочка липопротеиновая с шипами. Полиморфны: сферические, палочковидные, нитевидные.

Антигенная структура вируса А. Внутренний антиген из РНК и белков капсида (рибонуклеопротеины) определяют серотип вируса – А, В, С, стимулируют Т-киллеры и макрофаги; хотя и образуются на него антитела, но не обладают защитным действием. Поверхностные антигены – гликопротеиновые отростки – выполняют функции гемагглютина (Н) и нейраминидазы(N). Поверхностные антигены определяют 3 подтипа вируса А: А1(Н1N1), А2(H2N2), А3(H3N2); внутри каждого подтипа множество поверхностных антигенных вариантов, вызывающих образование защитных антител. Поверхностные антигены участвуют в репродукции вируса: гемагглютинин способствует прикреплению вируса и склеиванию эритроцитов, его в 5 раз больше чем нейраминидазы, последняя способствует выходу вируса из клетки. Гемагглютинин и нейраминидаза определяют патогенность вируса.

Антигенная изменчивость вируса гриппа А.

Различают два вида антигенной изменчивости: шифт – значительные изменения в результате рекомбинации (между двумя вирусами человека, или вирусами человека и животных или птиц), приводящие к образованию новых подтипов вируса; дрейф – изменения в результате точечных мутаций, приводящие к возникновению новых антигенных вариантов вируса. Из-за постоянной изменчивости вируса трудно прогнозировать какая антигенная разновидность вызвала заболевание, поэтому и вакцины малоэффективны.

Вирус В изменяется по типу дрейфа. Вирус С – его РНК состоит из 7 фрагментов, малоизменчив и не имеет N-антигена.

Культивирование. Лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток.

Резистентность. Чувствителен к высоки температурам, дезинфицирующим веществам. Устойчив к низким температурам.

Эпидемиология. Источник инфекции – больные; заражение – воздушно-капельным путем, реже контактным. Восприимчивость высокая.

Эпидемии зимой, продолжительность их 3-6 нед.

Каждую пандемию вызывает подтип вируса А, каждую эпидемию – новый антигенный вариант одного подтипа. В последние годы от больных выделяют вирусы гриппа А(Н3N2), А(Н1N1). Эпидемии гриппа В повторяются реже, в 4-7 лет.

Патогенез. Входные ворота – верхние дыхательные пути. В слизистой оболочке размножаются, вызывая гибель клеток. Воспалительный процесс охватывает респираторный тракт. Поражаются сердечно-сосудистая, дыхательная, нервная, иммунная и др. системы. Возникают различные бактериальные осложнения из-за вторичного иммунодефицита. Тяжесть болезни зависит от состояния макроорганизма.

Клиническая картина. Инкубационный период при гриппе А 24-48 часов, при В – 72 часа. Заболевание начинается с повышения t до 39-40⁰С, головной боли, боли в мышцах, суставах, появляются насморк, кашель, боль в горле. Продолжительность болезни 7 дней. Осложнения – кровотечения, пневмония бактериальная и геморрагическая (причины смерти) и др. Возможно бессимптомное течение болезни.

Иммунитет. Специфичный, но создается впечатление кратковременности.

Микробиологическая диагностика. Материал –слизь и смыв из носоглотки, сыворотка крови. Вирусологический метод, серологические реакции (РТГА, РСК), РИФ и ПЦР.

Лечение. Ремантадин (гр.А), арбидол (гр.А и В), лейкоцитарный интерферон, иммуноглобулины – противогриппозный. Не рекомендуется снижать t, т.к. при t 38-39⁰С вырабатывается максимальное количество интерферона. Не следует применять аспирин (снижает свертываемость крови).

Профилактика. Применение вакцины: живые, убитые, химические или сплит-вакцины («расщепленные»), но из-за высокой изменчивости вируса малоэффективны. При частой вакцинации возможны осложнения, параличи. Неспецифическая профилактика – закаливание; использование масок.

Сплит вакцины – высокоочищенные, с полным набором антигенов, но без липидов внешней оболочки (для уменьшения пирогенного эффекта).

2.Реакция торможения гемагглютинации РТГА для серодиагностики гриппа.

3. ОРВИ – острые респираторные вирусные инфекции.

Возбудителями их являются более 150 разновидностей вирусов. Наряду с гриппом они занимают первое место по распространенности, поражают верхние дыхательные пути.

Некоторые бактерии – легионеллы вызывают заболевания, похожие на ОРВИ, « острое респираторное заболевание» - ОРЗ – это бактериальные заболевания.

Таксономия и классификация возбудителей ОРВИ

РНК-содержащие вирусы.

I сем - Paramyxoviridae – вирусы парагриппа, похожие на вирусы гриппа человека (5 серотипов) и респираторно-синтициальный вирус (РС).

II сем – Picornaviridae (от ит. piccolo-маленький и англ. rna-РНК), включает 7 серотипов энтеровирусов Коксаки и ЕСНО, поражают дыхательные пути, и 120 серотипов риновирусов.

III сем – Reoviridae (от анг.respiratory, enteric) – включает 3 серотипа, вызывающих заболевание респираторного и ЖК трактов.

IV сем – Coronaroviridae (от лат. сorona-корона) – 3 серотипа, поражает респираторный и ЖК тракты.

ДНК-содержащие вирусы.

V сем – Adenoviridae (выделены из удаленных аденоидов у детей), поражают глаза, кишечник, мочевой пузырь. Три типа вызывают ОРВИ.

Структура и антигенные свойства.

Эти вирусы различны по структуре, форме, свойствам. Антигенами являются белки капсида и липопротеиновые отростки липопротеиновой оболочки.

Культивирование. На культуре клеток.

Резистентность. ОРВИ как у вирусов гриппа.

Эпидемиология. Источник ОРВИ больные; заражение воздушно-капельным путем через дыхательный тракт. Называют ОРВИ простудными заболеваниями, т.к. наблюдаются в холодное время года.

Патогенез. Входные ворота – верхние дыхательные пути, размножаются в клетках слизистой оболочки, вызывают воспалительный процесс. Токсигенные продукты распада вирусов и клеток организма воздействуют на различные системы, в том числе и на иммунную, вызывая вторичные иммунодефициты.

Клиническая картина. Инкубационный период 1-4 дня, повышения t может и не быть, головная боль, насморк, кашель, слабость. Продолжительность болезни 7 дней, но легче протекает чем при гриппе. Дети тяжелее болеют (бронхи, легкие – воспаление). Вирус парагриппа вызывает отек гортани, вирус РС – пневмонию. Бактериальные осложнения как следствие иммунодефицита.

Иммунитет. Непродолжительный, кроме аденовирусной инфекции.

Микробиологическая диагностика заключается в дифференциации ОРВИ от гриппа и ОРЗ, вызываемых бактериями. Исследуют слизь или смыв из носоглотки, с помощью вирусологического или серологического методов, РИФ, ПЦР; экспресс-методы.

Лечение. Симптоматическое.

Профилактика. Неспецифическая.

4. Характеристика энтеровирусов.

Энтеровирусы – группа вирусов, обитающая в кишечнике человека и вызывающая разнообразные болезни.

Таксономия. Энтеровирусы – РНК-содержащие. Сем.Picornaviridae, рода Enterovirus. К ним относятся патогенные для человека вирусы полиомиелита(3 серо типа), Коксаки А(2серотипа) и В (29 сера типов), кишечные цитопатогенные ЕСНО (31серо тип) и энтеровирусы (68-71серо тип).

Морфология и химический состав. Энтеровирусы самые мелкие, сферической формы, однонитевые плюс РНК, простые, с икосаэдрическим типом симметрии.

Культивирование – в культурах клеток, репродукция в цитоплазме клеток, сопровождается цитопатическим эффектом; образуют бляшки в культурах клеток под агаровым покрытием.

Антигенная стурктура. Антигены общие группоспецифические и типоспецифические.

Резистентность. Энтеровирусы устойчивы к факторам окружающей среды (месяцами сохраняются) и дезинфектантам. Погибают под действием УФ-лучей, окислителей, формалина; при кипячении – в течение нескольких секунд.

Эпидемиология. Болеют все, особенно дети. Источник инфекции – больные и носители, выделяющие возбудителя с носоглоточной слизью и фекалиями. Передаются через воду, пищу, почву, предметы обихода и т.д. Вспышки болезни в летние месяцы. Передача – воздушно-капельным путем в первые две недели.

Возбудители инфекции через слизистые оболочки носоглотки и тонкой кишки проникают в организм, размножаются в их эпителиальных клетках и лимфоузлах, попадают в кровь и распространяются.

Клиническая картина. Энтеровирусы вызывают заболевания различных органов и тканей: ЦНС (полиомиелит, менингиты, энцефалиты), мышечной мускулатуры (миалгия, миокардит), органов дыхания (ОРЗ), пищеварительного тракта (гастроэнтериты, диарея), кожных и слизистых покровов (конъюнктивиты, сыпь) и др.

Иммунитет. Стойкий, типоспецифический.

Лабораторная диагностика. Исследуемые смывы с носоглодки, фекалии, спинномозговой жидкость, кровь, сыворотку, мочу, асцигескую жидкость, содержимое весикул, кусочки разлагающей ткани (посмертно Методы – вирусологический и серологический с парными сыворотками в начале болезни и в разгар.

Лечение. Патогенетическое – противовирусные препараты, интерферон и др.

Профилактика. Неспецифическая – выявление и изоляция больных, санитарный надзор в окр. среде, за работой пищевых предприятий и др.

5. Характеристика дерматропных вирусов

а)Герпесвирусы

Герпес – хроническое рецидивирующее заболевание, характеризуется поражением кожи, слизистых оболочек, ЦНС и внутренних органов, персистенцией и рецидивами.

Таксономия. ВПГ – Herpes simplex, относится к сем. Herpesviridae, роду Simplexvirus, ДНК-содержащий, сложный.

Классификация герпесвирусов и вызываемые ими заболевания: α – герпесвирусы – ВПГ – 1,ВПГ- 2, вирус ветряной оспы ( у детей), вирус опоясывающего лишая; β- герпесвирусы – цитометаловирус ( поражает ИКК, почки и др. органы); γ – герпесвирусы - вирус ЭБ(Эпштейна-Барр): лимфома Беркитта, инфекционный мононуклеоз, назофарингеальная карцинома; нетипируемые вирусы: ВГЧ(6), ВГЧ (7), ВГЧ(8)-саркома Капоши.

Морфология и антигенные свойства. Сходны с вирусами оспы и опоясывающего герпеса. Различают 8 антигенных типов ВПГ, из них 1-2 типы – человека.

Культивирование. На куриных эмбрионах и культуре клеток.

Резистентность. Неустойчив.

Эпидемиология. Источник инфекции – больной или носитель. Передается контактным путем, через предметы обихода, воздушно-капельным путем, через плаценту, при рождении ребенка. Возможны рецидивы. ВПГ 1 типа поражает слизистые оболочки ротовой полости, вызывает энцефалиты, ВПГ 2 типа – гениталии.

Патогенез. Простой герпес различают первичный и рецидивирующий. При первичном герпесе, вирус попав на слизистые оболочки и кожу, размножается, поражает слизистые оболочки рта, глаз, носа, мочеполового тракта, разносится кровью в другие органы и ткани. Возможна латентная инфекция, 70-80% являются носителями вируса.

Клиническая картина. Инкубационный период 2-12 дней. Болезнь начинается с зуда, отека и пузырьков. После подсыхания последних рубцы не образуются.

ВПГ поражает кожу, слизистые оболочки рта, глотки (стоматит), кишечника, печень (гепатиты), глаза (кератит), ЦНС (энцефалиты и менингоэнцефалит). Считают, что ВПГ типа 2 может вызвать рак шейки матки.

Иммунитет. Клеточный.

Лабораторная диагностика. Материал для диагностики – содержимое везикул, слюна, кровь, спинномозговая жидкость и мозг при летальном исходе. Выделенный вирус идентифицируют в РИФ и ИФА с моноклональными антителами. Серодиагностика – в РСК, РИФ, ИФА, РН и ПЦР.
Лечение. Интерферон и химиопрепараты против вирусов.

Специфическая профилактика. Инактивированная герпесвакцина.

б)Вирус натуральной оспы.

Натуральная оспа – особоопасная высококонтагиозная болезнь, характеризуется тяжелым течением, лихорадкой и сыпью на коже и слизистых оболочках.

Болезнь ликвидирована в 1977 году, относилась к карантинным инфекциям. Вирус натуральной оспы – ДНК-содержащий, относится к сем.Poxviridae, пор. Orthopoxvirus, самый крупный из вирусов, имеет форму кирпича, размер 250-400 нм. ДНК- двухцепочечная, сердцевина в виде гантели, трехслойная оболочка. Вирус содержит липиды, углеводы и >30 белков.

Антигены – нуклеопротеиновый, гемагглютинин. Есть общие антигены с вирусом коровьей оспы (вакцина – из коровьей оспы).

Культивирование – в куриных эмбрионах (белые бляшки), в культуре клеток (тельца Гварниери).

Резистентность. Вирус устойчив к высушиванию, низким t, сохраняется долго в корочках пустул. При 100⁰С погибает моментально.

Восприимчивы обезьяны.

Эпидемиология. Натуральная оспа относится к карантинным инфекциям. Источник инфекции – больной. Инфицирование – воздушно-капельным и контактным путем, а также через вещи.

С 1977 г оспа в мире ликвидирована. Возбудитель хранится в спец. лабораториях России и США.

Патогенез. Вирус проникает через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, через кожу, размножается в лимфоузлах и попадает в кровь, оттуда заносится в кожу и лимфоидные ткани, размножается, формируются очаги поражения в коже, слизистых оболочках и паренхиматозных органах.

Клиническая картина. Инкубационный период 7-17 дней. Болезнь начинается с высокой t, рвоты, головной и поясничной боли, появляется сыпь – сперва розовые пятна, потом узелки – папулы с горошину, затем образуются пузырьки – везикулы и пустулы – гнойнички, которые подсыхают и образуются корки. После отпадения их на коже остаются рубцы – рябины на лице.

Формы оспы: тяжелая (пустулезно-геморрагическая или черная оспа со 100% летальностью); среднетяжелая (рассеянная оспа);легкая (без сыпи).

Иммунитет: пожизненный.

Лабораторная диагностика. Условия работы как при особо опасных инфекциях. Исследуются содержимое сыпи, отделяемое носоглотки, пораженные органы, ткани, кровь. Экспресс-диагностика – электронная микроскопия (тельца Гварниери), РИФ и др. Посев в куриные эмбрионы, на культуры тканей. РСК, РТГА, РН.

Лечение. Симптоматическое, индукторами интерферона и противовирусными препаратами.

Специфическая профилактика. Живая оспенная вакцина (из соскобов сыпи телят) или из культивированных вирусов на куриных эмбрионах. Вакцинация отменена с 1980г в связи с ликвидацией оспы.

в)Вирус кори.

Корь – острая болезнь, характеризующаяся лихорадкой, катаром слизистых оболочек вдп и глаз, сыпью на коже.

Таксономия. Возбудитель относится к РНК-содержащим, сем. Paramyxoviridae, роду Morbillivirus.

Морфология и антигенная структура. Содержит однонитевую РНК и белки. Сложного строения.

Культивирование. В культуре клеток.

Резистентность. В окружающей среде нестоек.

Эпидемиология. Корь – антропонозная инфекция. Восприимчивость высокая; чаще болеют дети (4-5лет). Источник инфекции больной. Механизм заражения – воздушно-капельный. Через 5 дней после появления сыпи больной не заразен.

Патогенез. Вирус через слизистые оболочки вдп и глаз попадает в подслизистую оболочку, лимфатические узлы, после размножения попадает в кровь и поражает сосуды.

Клиническая картина. Инкубационный период 11-25 дней. Болезнь начинается с повышения температуры, головной боли, недомогания. Воспаляются околоушные железы, возможно и слюнные. Продолжительность болезни около недели. Осложнения – орхит, менингит, менингоэнцефалит, панкреатит. Возможно бессимптомное течение.

Иммунитет. Пожизненный.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования –слюна, цереброспинальная жидкость, моча, кровь. Вирусологический и серологический методы – РСК, РТГА, ИФА, РИФ.

Лечение. Специфической терапии нет.

Профилактика. Для специфической профилактики – моновакцина или ассоциированная вакцина против кори, паротита и краснухи для детей старше 1 года.
г)Вирус краснухи

Краснуха (rubella) – острая инфекционная болезнь детей, характеризуется кореподобной сыпью, увеличением лимфатических узлов, поражением плода.

Таксономия. Вирус РНК-содержащий, относится к сем. Togaviridae, роду Rubivirus.

Морфология и антигенные свойства. Вирус сферической формы. РНК-однонитевая, нуклеокапсидный белок, липопротеиновая оболчка с шипами. Имеет комплекс внутренних и наружных антигенов, гемагглютинин и нейраминидазу.

Культивирование. На культурах клеток образуют цитоплазматические включения, иногда лизис клеток.

Резистентность. Неустойчив во внешней среде.

Восприимчивы обезьяны.

Эпидемиология. Болеют люди, восприимчивость высокая, чаще болеют дети 2-9 лет. Вирус выделяется с носоглоточным секретом, мочой, калом. Заражение воздушно-капельным путем. Больной заразен с появления признаков и в течение 5 дней от начала высыпании. Возможна передача от матери плоду.

Патогенез. Входные ворота вируса – слизистые оболочки вдп, размножается в шейных лимфатических узлах, затем проникает в кровь и поражает лимфоидную ткань.

Клиническая картина. Инкубационный период 15-24 дня. Болезнь протекает на фоне субфебрильной температуры тела, розовой пятнистости, папулезной сыпи на лице и теле, которая через 2-3 дня исчезает. У взрослых болезнь более тяжелая, с интоксикацией, высокой t, с увеличением шейных лимфатических узлов. В первые 3 месяца возможно инфицирование плода с последующими осложнениями, даже уродствами, мертворождениями. Тогда рекомендуют прервать беременность.

Иммунитет. Пожизненный. При врожденной краснухе – слабый, с персистенцией.

Лабораторная диагностика. Материал – смыв из носоглотки, кровь, моча, кал или ткани погибшего плода. Серодиагностика в РСК, РТГА, ИФА, РИА.

Лечение. Симптоматическое.

Специфическая профилактика. Живые и убитые вакцины, ассоциированные и моновакцины. Иммунизируют девочек 12-14 лет при отсутствии у них антител (в большинстве стран).

6. Характеристика арбовирусов

Арбовирусы – группа вирусов, передающихся трансмиссивно восприимчивым животным или человеку кровососущими членистоногими переносчиками.

Известно около 500 арбовирусов, 100 из них вызывают у человека заболевание. Это желтая лихорадка, клещевой энцефалит, омская геморрагическая лихорадка, лихорадка Крым-Конго, лихорадка Денге, японский и калифорнийский энцефалиты, а также вирусы лихорадки Марбург и Эбола и др.

В патологии человека основную роль играют представители 3 семейств: Flaviviridae, Togaviridae и Bunуaviridae.

Морфология, химический состав и антигенная структура. Для арбовирусов характерны сферическая форма, сложное строение, РНК-геномные, состоят из РНК и белка-капсида, оболочка липопротеиновая с гликопротеиновыми шипами. Имеют родоспецифические, группоспецифические и типоспецифические антигены-гликопротеины с протективными свойствами.

Культивирование. Используют новорожденных мышей, культуру клеток и куриные эмбрионы (желточный мешок). Культивируют при 36-40⁰С для позвоночных и 22-25⁰С для членистоногих переносчиков.

Резистентность. Чувствительность высокая к дезинфектантам, химическим и физическим факторам.

Эпидемиология. Арбовирусные инфекции природноочаговые зоонозы. Резервуары в природных очагах – кровососущие членистоногие (клещи, комары, москиты, мокрицы), дополнительные резервуары, связанные трофически членистоногими – летучие мыши, птицы, грызуны, приматы. Основной путь заражения – трансмиссивный, но возможен от человека к человеку, иногда воздушно-капельный, контактный, через пищу. Возможны эпидемии и спорадические случаи заболевания. Характерна сезонность.

Патогенез. Арбовирусы размножаются в тканях, органах, слюнных железах членистоногих. При укусе вирусы разносятся и вновь поступают в кровь, появляется лихорадка, вазотропные поражают эндотелий капилляров внутренних органов, нейротропные – клетки ЦНС, вызывая их гибель.

Клиническая картина. Арбовирусные инфекции часто протекают скрытно и выявляются в серологических реакциях. Синдромы – системные и геморрагические лихорадки, менингоэнцефалиты. Летальность около 75%.

Иммунитет. Стойкий, гуморальный, типоспецифический.

Лабораторная диагностика. Материал для исследования – кровь, спинномозговая жидкость, при летальном исходе – материал из всех органов. С арбовирусами работы проводятся в специально оборудованных лабораториях как с особо опасными инфекциями.

Арбовирусы выделяют интерцеребральным заражением новорожденных белых мышей и в куриных эмбрионах. Р-ции РТГА, РИФ, РПГА, ИФА, ИЭМ (иммуноэлектронная микроскопия), РИА, ПЦР и др.

Лечение. Интерферон, рибавирин, и др. противовирусные препараты, а также иммуноглобулины.

Профилактика. Иммуноглобулины – для экстренной профилактики; для создания активного иммунитета – убитые вакцины и только живая вакцина против желтой лихорадки.