1-16 микра. Тема 1 Морфология микроорганизмов. Бактериоскопический метод диагностики
 Скачать 0.84 Mb.
|
|
Тема 16. Санитарная микробиология. 1. Санитарно-показательные микроорганизмы. 2. Санитарно – бактериологическое исследование воды, воздуха, пищевых продуктов , лекарств, ЛПУ. Санитарная микробиология изучает микробы окружающей среды (воды, воздуха, почвы, продуктов питания и др.), способные оказывать неблагоприятное влияние на здоровье человека. она разрабатывает микробиологические показатели гигиенического нормирования, методы контроля эффективности обеззараживания объектов окружающей среды, выявляет в них патогенные, условно-патогенные и санитарно – показательные микробы. Санитарно – показательные микробы являются представителями норм. микрофлоры человека и служат показателями сан. неблагополучия окружающей среды, т.е. ее загрязнения выделениями человека. Санитарно – показательные микробы должны отвечать следующим требованиям: - постоянно и в больших количествах присутствовать в выделениях человека и определенных животных; - не иметь других природных резервуаров или сред обитания; - сохраняться в окружающей среде, в объектах, в течение определенных сроков, близких к срокам выживания пат. микробов; - не размножаться (интенсивно) в объектах внешней среды; - легко идентифицироваться и поддаваться количественному определению. Основной показатель фекального загрязнения объектов среды – бактерии группы кишечной палочки (БГКП) или колиформные бактерии. Воздух оценивают по содержанию стафилококков и стрептококков. К СПМ относят также эшерихии, клостридии, энтерококки, колифаги (бактериофаги). Определяют индекс – количество СПМ в единице объема (1 л, 1г или 1 м3) материала или титр – наименьший объем (в мл) или вес материала (в г), в котором обнаруживаются СПМ. Точность санитарно-микробиологических исследований обеспечиваются: правильным отбором, хранением и транспортировкой проб в лабораторию, стандартными методами анализов. Часто в практике микробиологических исследований используется определение общего микробного числа, т.е. общего количества микробов в 1 мл жидкости, 1 г твердого вещества или 1 м3 воздуха. Делают посевы на питательном агаре и подсчитывают число выросших колоний (1 клетка образует 1 колонию). Результат выражают в КОЕ/г, КОЕ/ м3. ( Например: если при разведении 1:1000 выросло 105 колоний, то микробное число составит 1,05 ·105 КОЕ/мл). По ГОСТу водопроводная вода должна иметь микробное число менее 50. Критерием санитарного состояния по микробиологическим показателям являются микробиологические нормативы для оценки объектов окружающей среды, пищевых продуктов, продуктов детского питания, лекарственных препаратов и т.д., которые регламентируются специальными документами, утвержденными Минздравом РФ (ГОСТ, СанПин). 2. Номенклатура санитарно-бактериологического исследования воды, воздуха, пищевых продуктов, лекарств, ЛПУ. 2.1. Вода. По нормативным документам контролю подлежат: - вода питьевая (водопроводная, колодцев, родников, скважин); - вода плавательных бассейнов; - вода открытых водоемов (рек, водохранилищ); - сточные воды; - вода очищенная для приготовления лекарств. Предупредительный надзор осуществляют: 1) при решении вопросов водоснабжения и канализации населенных территорий; 2) при санитарной оценке бассейнов, пляжей, мест отдыха. Текущий сан.надзор осуществляют постоянно, ежедневно Контроль воды осуществляют в соответствии с имеющимися нормативами (табл.11.1, стр. 418). Пробы питьевой воды отбирают работники санэпиднадзора стерильно в стерильные флаконы емкостью 500 мл. Вода бассейнов анализируется ежемесячно. Для приготовления лекарств и инъекционных растворов используется очищенная вода. Методика исследования. Определяют ОМЧ в 1 см3 (1 мл) воды у всех видов воды. Вносят по 1 мл в 2 стерильные чашки Петри и заливают расплаленным и остуженным питательным агаром (метод глубинного посева).Инкуб. 24 г при 37 0С и еще 24 г при комнатной т-ре. Подсчитывают колонии на 2 чашках, выросших на поверхности и в глубине питательного агара. Рассчитывают среднеарифметическое. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов засевают по 0,5 мл на среду Сабуро и инкубируют 3-4 сутки. Считают колонии. Результат ОМЧ суммируют из среднего числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов и выражают в КОЕ/мл. Для определения колиформенных бактерий в питьевой воде и очищенной воде используют метод мембранных фильтров. Воду 3 раза по 100 мл пропускают через 3 фильтра из нитроцеллюлозы, которые инкубируют при 37 0С 24 часа. Подсчитывают количество выросших колоний. Определение колифагов (бактериофагов), паразитирующих на Е. соli, определяют в воде поверхностных источников и питьевой воде, подготовленной из нее, а также в сточных водах. Они являются индикаторами эффективности охраны грунтовых вод и очистки питьевой воды. Исследования проводят методом агаровых слоев по Грациа. Исследуемую воду смешивают с расплавленным и остуженным питательным агаром, куда вносят индикаторный штамм Е. соli. Полученную смесь выливают вторым слоем на питательный агар в чашке Петри и инкубируют при 37 0С 24 часа. Индикаторная к-ра образует сплошной рост, а при наличии колифагов образуются прозрачные бляшки («негативные колонии» бактериофага). Результат выражают в бляшкообразующих единицах БОЕ/мл. Питьевую воду исследуют ежедневно. В случае повторного обнаружения колиформных бактерий и/или колифагов, проводят определение в воде возбудителей бактерий и вирусных кишечных инфекций. Требования к микробной чистоте воды в табл.11.1, стр. 418. 2.2. Воздух. Санитарно-микробиологические показатели воздуха нормируются в зависимости от назначения помещений и определяются седиментационными или аспирационными методами. Методы исследования. Аспирационный метод отбора проб – принудительное осаждение микробов из воздуха с помощью пробоотборника аэрозоля бактериологического (ПАБ – 1) или аппарата Кротова. Седиментационный метод - осаждение микробов на поверхность плотной питательной среды. Чашку Петри с питательной средой ставят на горизонтальную поверхность и оставляют открытой на определенное время. Затем чашку закрывают и инкубируют в термостате. С помощью этого метода определяют обсемененность воздуха, используя формулу Олялянского: на 100 см2 поверхности агара за 5 минут оседают бактерии из 10 л воздуха (10 дм3). Общее микр. число ОМЧ воздуха - КОЕ в /м3 подсчитывают колонии, выросшие на агаре при посеве определенного объема воздуха и инкубации в течение 24 ч при 37 0С и 24 ч при комнатной температуре. Присутствие St. aureus. В определенном объеме воздуха определяют наличие золотистого стафилококка (воздух засевают на желточно-солевой агар, вырастают характерные колонии гр(+) кокков). В операционном блоке стафилококков не должно быть! Присутствие грибов. Определяют в воздухе наличие в воздухе дрожжеподобных и плесневых грибов по количеству колоний, выросших на среде Сабуро за 96 ч при 22 - 28 0С. Состояние воздуха в отделении стационара в табл.11.3 (стр. 422). 2.3. Почва. Санитарно-микр. исследования почвы регламентируются инструкциями по предупредительному и текущему надзору. Предупредительный надзор осуществляют при планировке, строительстве и реконструкции вновь заселяемых участков, при выборе мест для строительства ЛПУ, санаториев, детских учреждений, при решении вопросов водоснабжения и канализации, санитарной оценке пляжей, мест отдыха и др. текущий сан. надзор осуществляют: а) при оценке сан. состояния почвы, ее способности к самоочищению после загрязнения (н., почву детских садов, больниц, зон отдыха исследуют 2 раза в год); б) при контроле за сточными водами и отбросами (1 – 4 раза в месяц); в) по эпидемиологическим показаниям для выяснения возможного пути передачи инфекционных заболеваний. При текущем надзоре рекомендуется сокращенный анализ. Включает: определение ОМЧ, БГКП, титра строгих анаэробов, термофильных бактерий и нитрифицирующих бактерий. По эпидемиологическим показаниям в ходе исследований проводят обнаружение пат м-ор-ов (табл.11.2). Отбор проб. «Метод конверта» - отбирают пробы с прямоугольного участка 5х5 из 5 точек с глубины 20 – 25 см в условиях асептики для приготовления смешанной пробы в 1 кг. Методика исследования. ОМЧ пробы определяют глубинным посевом (на плотной среде) из 10-кратных разведений или методом прямой микроскопии. При невысокой степени фекального загрязнения, БГКП в почве определяют методом бродильных проб или мембранных фильтров; при высокой степени – прямым посевом почвенной суспензии (1 : 10) на среду Эндо. Способность почвы к самоочищению определяет перфрингенс-титр (минимальное количество почвы, в котором определяются Clostridium perfringens). При фекальном загрязнении почвы эшерихии исчезают через 4 – 5 мес., а клостридии обнаруживают в титре 0,01 г. Перфрингенс-титр определяют глубинным посевом на среду Вильсона-Блера (среда Вильсона Блера – железосульфитный агар) из 10-кратных разведений почвенной суспензии (среда окрашивается в черный цвет, если есть клостридии). Определяют число термофильных бактерий (инкубируют при 60 0С 72 часа). Для определения навозного загрязнения титр нитрифицирующих бактерий определяют посевом 10-кратных разведений почвенной суспензии на жидкую среду Виноградского (указывает на процессы самоочищения). На самоочищение почвы указывает также присутствие бацилл, грибов, актиномицетов. Титр БГКП и перфрингенс-титр для сильнозагрязненных почв соответственно 0,009 и ниже, 0,00009 и ниже; для чистых почв коли-титр – 1,0 и выше, перфрингенс-титр – 0,01 и выше. Требования к микроб. чистоте почв в табл.11.2 (стр. 421). 2.4. Пищевые продукты. Санитарный контроль пищевых продуктов предусматривает оценку по следующим показателям: - величине ОМЧ; - наличию БГКП; - присутствию условно-патогенных бактерий (кишечной палочки, золо- тистого стафилококка, протеев, клостридий); - наличию пат. микробов (сальмонелл и др.); - наличию специфических возбудителей микробной порчи продукта. Основными показателями качества продуктов являются ОМЧ и наличие патогенных микробов. Отбор проб. Пробы отбирают стерильно (жидкие, твердые, сыпучие). Методика исследования. Пробы гомогенизируют и готовят из них серийные разведения (1:10, 1:100, 1:1000 и т.д.) Иногда используют для этого ИХН с добавлением твина – 80 или 0,1% пептонную воду.( ИХН – изот. р-р. хлорида натрия 0,85%) Определение ОМЧ. (Методика, как для воды, так и для почвы). Посевы инкубируют при 30 0С 72 часа. Определение БГКП (как для воды, как для почвы) – кишечную палочку, энтерококк, золотистый стафилококк, протей, клостридий. Определение St. aureus. Материал засевают на солевой бульон в пробирку с 5 мл среды, для накопления St. aureus инкубируют при 37 0С 24 ч. При наличии роста (помутнении среды) делают высевы на желточно- солевой агар для получения изолированных колоний, которые затем идентифицируют по культ. свойствам, морфологии (в мазке по Граму), биохимическим свойствам. Определение сальмонелл. Исследуемый материал вносят в селенитовый бульон для обогащения и инкубируют при 37 0С. Через сутки делают высевы на плот. дифф. среды (висмут-сульфитный агар) и идентифицируют подозрительные колонии по культ., биохимическим свойствам. Требования к некоторым продуктам по микробиологическим показателям в табл.11.4, стр. 426. 2.5. Санитарный режим ЛПУ. ЛПУ – больницы, роддомы, лечебно-диагностические стационары и центры. Для того, чтобы свести к минимуму возможности возникновения и распространения ВБИ в учреждениях необходимо поддерживать санитарный режим. Санитарный режим ЛПУ включает организационные меры: - (контроль за поступлением, пребыванием и выпиской пациентов, службой крови и ее препаратов, инвазивными манипуляциями и антимикробными средствами, за режимом стерилизации и дезинфекции в ЛПУ; - медицинские осмотры и обследование персонала; - работа только в спецодежде; - соблюдение сроков хранения стерильных материалов; - соблюдение правил личной гигиены; - влажную уборку помещений с использованием дезинфицирующих средств; - дезинфекцию УФ воздуха в операционном блоке, процедурных и др. каб.; - соблюдение правил использования и сроков хранения дезинфицирующих и антисептических средств; - дезинфекцию использованных материалов; - проведение сан.- микробиологических исследований. Проводят исследование рук хирургов, кожи операционного поля, перевязочного и шовного материала, инструментов, воздуха, поверхностей оборудования в различных палатах. Проводят микробиологическое исследование оборудования, рук и спец, одежды персонала. Пробы отбирают методом смыва стерильным ватным тампоном, помещенным в пробирки со стерильным ИХН или пептонной водой. Перед исследованием смывную жидкость с тампоном встряхивают в течение 10 минут и высевают. Определяют БГКП, St. aureus, (как при исследовании пищевых продуктов). В смывах не должно быть БГКП, синегнойной палочки, протеев, стафилококка. |