1-16 микра. Тема 1 Морфология микроорганизмов. Бактериоскопический метод диагностики

• Название: Тема 1 Морфология микроорганизмов. Бактериоскопический метод диагностики
• Дата: 16.01.2022
• Размер: 0.84 Mb.
• Имя файла: 1-16 микра.doc
• Тип: Документы; #332317
• страница: 11 из 12

Тема 15. Медицинская микология

1. 
   Морфология, химический состав грибов
   
2. 
   Факторы агрессии
   
3. 
   Способы культивирования
   
4. 
   Микроскопическое исследование
   
5. 
   Серологическое, аллергологическое, биологическое, гистологическое исследование
   
6. 
   Возбудители глубоких микозов
   
7. 
   Возбудители дерматомикозов
   
8. 
   Микозы, вызываемые условно – патогенными грибами
   

1.Морфология, химический состав грибов

1. Грибы (Fungi, Mycetes) относятся к царству Fungi, эукариоты.

Имеют ядро с мембраной, цитоплазму с органеллами, ЦПМ и мощную клеточную стенку из полисахаридов (глюканов, целлюлозы, маннанов, хитина), белков, липидов и др. ЦПМ содержит фосфолипиды и стеролы.

По форме грибы – гифальные и дрожжевые. Для некоторых характерен диморфизм. При комнотной t образуется мицелий, а при t=37⁰С - дрожжеподобные клетки

Гифальные (плесневые грибы образуют ветвящиеся тонкие нити – гифы, сплетающиеся в грибницу, мицелий (плесень). Вегетативные гифы врастают в субстрат, питают гриб; растущие над поверхностью субстрата воздушные гифы отвечают за бесполое размножение.

Дрожжевые грибы – одноклеточные. При бесполом размножении образуют почки. Имеет место одноклеточный рост. Могут формировать псевдогифы в виде цепочек.

Грибы, аналогичные дрожжам, но без полового способа размножения, называют дрожжеподобными, размножаются почкованием или делением.

У низших грибов гифы без перегородок; у высших грибов гифы разделены перегородками.

Совершенные грибы – размножаются бесполым и половым способом.

Несовершенные грибы – размножаются бесполым путем.

Половые формы грибов называются телеоморфами, бесполые – анаморфами.

Бесполое размножение происходит почкованием, фрагментами гиф, спорами. Внутри спорангиев формируются эндогенные споры, экзогенные споры – конидии – на концах плодоносящих гиф. К бесполым формам размножения относят хламидоспоры (толстостенные клетки или комплекс мелких клеток) и склероции – многоклеточные покоящиеся органы грибов для выживания.

а) Зигомицеты – низшие грибы, мицелий несептирован, роды Mucor, Rhizopus и др. Вызывают зигомикоз (мукормикоз) легких, головного мозга и др. органов. Половое размножение с помощью зигоспор, бесполое размножение – спорангиоспорами.

б) Аскомицеты (сумчатые грибы) с септированным мицелием (кроме дрожжей), в асках по 4 или 8 гаплоидных спор (аскоспор), к ним относятся p.Aspеrgillus и p.Penicillum.

Аспергиллы вызывают аспергиллезы и афлатоксикозы, пенициллы - пенициллозы.

К аскомицетам относятся дрожжи (Saccharomjces, телеморфы многих видов Candida) – одноклеточные грибы, размножаются почкованием, бинарным делением или половым путем с образованием аскоспор. Заболевания, вызываемые некоторыми видами дрожжей, называются дрожжевыми микозами. Многие аскомицеты – продуценты антибиотиков.

в) Дейтеромицеты – несовершенные грибы, анаморфные, конидиальные, с септированным мицелием; к дейтеромицетам относятся несовершенные дрожжи (дрожжеподобные грибы), некоторые грибы р. Candida, вызывают поражения кожи, слизистых оболочек и внутренних органов (кандидоз). Candida albicans – образует хламидоспоры. Образуют псевдогифы (псевдомицелий), иногда – гифы.

2. Факторы агрессии.

Ферментативная активность патогенных грибов разнообразна, интенсивность ее широко варьирует. У одних грибов более выражена протеолитическая активность, у других – сахаролитическая или липолитическая. Многим патогенным грибам свойственны различные по окраске пигменты.

Среди продуктов жизнедеятельности грибов – микотоксины, гиалуронидаза, полисахариды, липиды и другие факторы агрессии.

Заболевания, вызываемые патогенными грибами, делят на две группы: системные или глубокие микозы и поверхностные микозы. Микозы, вызываемые условно-патогенными грибами, имеют смешанное клиническое течение.

3. Способы культивирования.

Культуральное исследование направлено на выделение чистой культуры гриба и ее идентификацию. Посевы производят на плотные и жидкие среды: Сабуро, сусло-агар, Чапека, кукурузный, рисовый, картофельный агар, Френсиса и др. Их используют для выделения грибов из стерильных материалов (крови, ликвора, биоптатов и др.).

Для приготовления селективных сред к неселективным добавляют антибиотики. Для выделения грибов из контаминированных бактериями материалов используют агар Сабуро с глюкозой, в который добавляют пенициллин.

Широко используют хромогенный агар CHROM, который под действием фермента грибов изменяет окраску.

Среда для культивирования дерматофитов - агар Собуро с глюкозой, среда для выращивания плесневых и дрожжевых грибов – агар Чапека-Докса (с сахарозой).

Дифференциальные среды – кукурузный агар, картофельный агар и др.

Культивирование грибов при температуре 22-28⁰С в течение 2-4 недель.

Выделенные грибы идентифицируют по внешнему виду, форме колоний, микроскопическому строению, по биохимическим и другим признакам.

4. Микроскопическое исследование.

При микроскопическом исследовании изучают неокрашенный (нативный) и окрашенный материал.

Нативные препараты готовят из волос, соскобов ногтей, чешуек кожи и др. тканей, предварительно обработанных 10-30% раствором КОН (для растворения и просветления препарата). При микроскопии нативных препаратов определяют характер расположения спор в волосах, мицелия в чешуйках кожи и соскобах ногтей, что позволяет сделать предварительное заключение. Окончательное заключение – после микологического исследования материала.

В окрашенных препаратах: по Граму, Романовскому - Гимзе, Цилю-Нильсену, Сабуро, Адамсону и др.- легче выявить элементы гриба.

Для экспресс-диагностики используют люминесцирующие иммунные сыворотки (РИФ).

Гистологические препараты окрашиваются методом Тамори (позволяет выявлять в тканях элементы гриба).

Высокочувствительный метод – прямой люминесцентной микроскопии (флюорохром связывается с полисахаридами клеточной стенки гриба, обеспечивая яркое свечение клетки при ультрафиолетовом облучении).

Высокоспецифичный метод – применение прямой РИФ на основе моноклональных антител, меченных флюорохромом.

5. Серологическое, аллергологическое, биологическое, гистологическое исследование.

Серологическое исследование. РА, РП, РСК, РНГА, ИФА, ИБ или ИФ проводят с антигенами из грибов (как и для других инфекций), ПЦР.

Аллергологическое исследование. Внутрикожно вводят соответствующие аллергены (взвеси из убитых грибов, фильтратов культур, полисахаридных и белковых фракций). Результаты учитывают через 20 мин (немедленные) и через 24-48 час (замедленные реакции).

Иммунологические тесты для выявления сенсибилизации организма: дегрануляции базофилов (крови и тканевых), ГНТ, ГЗТ.

Биологическое исследование. Заражение экспериментальных животных для выделения чистой культуры гриба.

Гистологическое исследование. Позволяет обнаружить гриб в тканях при биопсии и аутопсии.

6. Возбудители глубоких микозов.

6.1. Бластомикоз (син. североамериканский бластомикоз , болезнь Гилкриста). Хронический микоз, первично поражает легкие, с последующей гематогенной диссеминацией. Возбудитель гриб Blastomices dermatitidis с ветвящимся септированным мицелием. Микроконидии округлые или грушевидные, хламидоспоры бугристые. В организме гриб представлен тканевой формой, похожей на дрожжевые клетки. Обитает в почве, малоустойчив.

Бластомикоз – сапроноз. Инфицирование происходит при вдыхании спор, Болеют все, больные не заразны. Развиваются первичные очаги воспаления в легких, затем поражаются кости, печень, мочеполовая система. Этому способствуют иммунодефициты. Болезнь заканчивается через 6-8 недель без лечения, но может развиться диссеминированная форма бластомикоза.

Лабораторная диагностика. Исследуют гной, мокроту, биоптаты лимфатических узлов, слизистых оболочек носа, ротовой полости, легочную ткань. Используют микроскопический, микологический, серологический, биологический, аллергологический и гистологический методы.

Лечение. Антимикотики (амфотерицин В). Специфическая профилактика не разработана.
6.2. Гистоплазмоз. Глубокий микоз, поражает ретикулоэндотелиальную систему, дыхательные пути, ЖКТ. Возбудители две разновидности - Histoplasma capsulatum, H. duboisii.Последний менее патогенен. Мицелий сентированный, микроконидии сферической или грушевидной формы, макроконидии бугристые. Микроконидии устойчивы во внешней среде. Оптимальная t 25-30 ⁰С, рН 5,5-6,0. Гриб обитает в почве в форме мицеллия. При t 35-37 ⁰С грибы существуют в виде дрожжевых клеток (в организме).

Гистоплазмоз- сапроноз. Источник инфекции – почва. Больные не заразны. Болеют все. Заражение аэрогенное при вдыхании спор.

Лаб. диагностика. Для анализа – гной, мокрота, биоптаты лимф. узлов, слизистых оболочек носа, ротовой полости, легочная ткань. Используют микроскопический, микологический, серологический, биологический, аллергологический и гистологический методы. С грибом Histoplasma работают в лабораториях особо опасных инфекций.

Иммунитет длительный, аллергизация по типу ГЗТ.

Лечение. Амфотерицин В. Специфическая профилактика не разработана.

6.3. Криптококкоз. Заболевание встречается редко, в основном в США, Южной Америке. Поражает легкие, ЦНС, кожу, мозг. Возбудитель Cryptococcus neoformans. Тканевая форма мало отличается от культуральной. Клетки гриба округлые, иногда овальные, оболочка двухконтурная, диаметром 2-5, реже 10-12 мкм, с удлиненной почкой. При неблагоприятных условиях клетки удлиненные или нитевидной формы. Криптококк имеет толстую слизистую капсулу полисахаридной природы, превосходящую по размерам клетку.

Микробиологическая диагностика. Исследуют гной, ликвор, мокроту, соскобы язв, мочу и др. Проводят микроскопирование окрашенных препаратов по Граму (+), Романовскому - Гимзе и др. При криптококкозном менингите образуются почкующиеся дрожжевые клетки с капсулой, обнаруживающиеся при микроскопировании. Используют микологический, серологический и биологический методы.

Лечение. Амфотерицин В. Хирургическое удаление очагов. Сочетание обоих приемов. Специфическая профилактика не разработана.

6.4. Споротрихоз (син. болезнь Шенка). Возбудитель Sporotrix schenckii. Болезнь хроническая, с поражением кожи, подкожной клетчатки и лимфоузлов. Распространен повсюду, но наиболее – в тропиках и субтропиках.

Возбудитель находится в почве, воде, воздухе и на растениях. Заражение – контактным путем, аэрогенно.

Sporotrix schenckii – диморфный гриб. В организме больного растет в дрожжевой (тканевой) форме в виде сигарообразных или овальных клеток диаметром 2-6 мкм, а также астероидные формы дрожжеподобные тела (10-20 мкм), окруженные лучеобразными радиально расположенными структурами.

На среде Сабуро гриб образует складчатые колонии от белого до темного цвета, состоящие из септированного мицелия (мицелиальная форма). Конидии образуют скопления в виде «маргариток» на гифах.

Микробиологическая диагностика. Исследуют выделения язв, кожи, свищей, лимфоузлов, биоптаты тканей. Мазки окрашивают по Граму, Романовскому- Гимзе и др.. Выявляют дрожжеподобные клетки и «астероидные тела» гриба.

Мицелиальные формы гриба получают при выделении чистой культуры на питательных средах ( Сабуро и др.) при 22 -25 ⁰С(7-10 дней). При 37 ⁰С образуется дрожжевая форма (морские свинки). Серологические реакции: РА, РП, ИФА и др.

Лечение. Амфотерицин В, йодид калия.

Специфическая профилактика не разработана.

7). Возбудители дерматомикозов.

7.1. Возбудитель парши (Фавуса). Возбудитель гриб Trichophyton schoenleinii. Заболевание хроническое, главным образом у детей. Антропоноз. Поражаются кожа, волосы, ногти. Образуются скутулы желтого цвета – скопления спор, мицелия, клеток эпидермиса и жира. В чешуйках наблюдается ветвящийся септированный мицелий с артроспорами. Внутри пораженного волоса обнаруживаются пузырьки газа и элементы гриба: септированный мицелий, споры ( Артроспоры – структуры образующиеся в результате фрагментации гиф на отдельные клетки) .

В чистой культуре Trichophyton schoenleinii представлен мицелием с артроспорами, хламидоспорами и микроконидиями.

7.2. Возбудитель эпидермофитии. Эпидермофития паховая – вызывается грибом Epidermophyton floccosum. Поражается кожа паховых складок, голеней, реже – кожа межпальцевых складок, ногти. Распространяется быстро контактным путем в спортзалах и душевых помещениях. В чешуйках кожи обнаруживаются септированный ветвящийся мицелий, прямоугольные артроспоры, расположенные цепочкой. В чистой культуре Epidermophyton floccosum формирует бесцветные септированные гифы, хламидоспоры, макроконидии, расположенные группами на концах гиф. Эпидермофития стоп вызывается Trichophyton intеrdigitales. Поражаются складки кожи и ногти.

Микробиологическая диагностика. Используют микроскопический, микологический (культуральный), серологический, биологический и аллергологический методы.

Лечение – местное, клотримазол, микозолон, низорал и др.

7.3. Возбудители трихофитии ( стригущий лишай).

Trichophyton tonsurans вызывает антропонозную (поверхностную) трихофитию (стригущий лишай). Болеют чаще дети. Характеризуется воспалением и шелушением кожи. Волосы заражаются по типу «эндотрикс» (внутри волоса) и надламываются у поверхности кожи.

Trichophyton violacеum - вызывает антропонозную (поверхностную) трихофитию (стригущий лишай). Болеют чаще дети. Развивается воспаление и шелушение кожи. Волосы заражаются по типу «эндотрикс», надламываются у поверхности кожи, тканевая форма – эндотрикс, артроконидии располагаются внутри волоса.

Чистая культура состоит из малосептированного мицелия и хламидоспор. В старых культурах – артроспоры, которые образуются в результате фрагментации гиф на отдельные клетки.

Микробиологическая диагностика. Используют микроскопический, микологический (культуральный), серологический, биологический и аллергологический методы.

Лечение. Гризеофульвин, низорал (кетоконазол).

Специфическая профилактика не разработана.

7.4. Возбудители микроспории (стригущий лишай).

Высококонтагиозное заболевание, в основном детей, вызывается грибами рода Microsporum. Возбудитель зооантропонозной микроспории Microsporum саnis вызывает заболевание у кошек, собак и человека. Microsporum ferrugineum – возбудитель антропонозной микроспории, поражает кожу и волосы; вокруг волос образуются чехлы из артроконидий по типу «эктдотрикс», располагаются на поверхности волоса. Чистая культура состоит из ветвистого септированного мицелия, хламидоспор и артроконидий.

Микробиологическая диагностика. Используют микроскопический, микологический (культуральный), серологический, биологический и аллергологический методы.

Специфическая профилактика не разработана.

Лечение. Гризеофульвин, низорал (кетоконазол).

8. Микозы, вызываемые условно – патогенными грибами.

Условно – патогенные грибы являются сапрофитами, обитающими в почве, воде, воздухе, на растениях, с/х продуктах, на стенах сырых помещений, а также на коже и слизистых человека. Плесневые грибы могут обитать на слизистой дп, на коже наружного слухового прохода. Дрожжеподобные грибы р. Саndidа входят в состав микрофлоры толстого кишечника, влагалища и дп. Причины микозов – длительный контакт человека с возбудителем, например, сырое жилое помещение, иммунодепрессивные состояния, нерациональные антибиотико- и химиотерапия, приводящие к дисбактериозу и т.д. Такие микозы могут протекать остро и хронически, в локальных и генерализованных формах, приводя к летальному исходу. Микотоксины (термостабильные до 200⁰С) могут вызвать пищевые микотоксикозы.

8.1. Возбудитель кандидоза. Саndidа – грибы этого рода вызывают кандидоз слизистых оболочек, кожи, ногтей и внутренних органов. Обитают в почве, воде, на растениях, плодах, овощах, являются частью нормальной микрофлоры человека и животных, могут вызвать кандидоз у пациентов с ослабленной иммунной системой. Возможна передача гриба детям при рождении, кормлении грудью, а также половым путем, вызывая развитие урогенитального кандидоза.

Род Саndidа – содержит около 200 видов: объединяет род несовершенных дрожжеподобных и совершенных дрожжевых грибов. Ведущее значение в развитии кандидоза принадлежит С.albicans и C. tropicalis.

Для С.albicans характерно наличие бластоспор (почек) – почкующихся клеток и хламидоспор. Из бластоспоры (почки) при помещении ее в среду с сывороткой образуются «ростковые трубки».

Микробиологическая диагностика. В мазках обнаруживаются псевдомицелий, мицелий с перегородками и почкующиеся бластоспоры. Клинический материал сеют на среду Сабуро, сусло-агар и др. Колонии беловато-кремовые, выпуклые. Выросшие грибы дифференцируют по морфологическим, биохимическим и физиологическим свойствам. Саndidа albicans образуют ростковые трубки на жидких средах с сывороткой или плазмой (2-3 часа при 37 ⁰С), хламидоспоры (рисовом агаре).

Сахаромицеты в отличие от Саndidiа sрр. являются настоящими дрожжами, образуют аскоспоры. Кандидозная уроинфекция устанавливается при обнаружении более 10⁵ колоний Саndidiа sрр. в 1 мл мочи.

Проводят ПЦР, серодиагностику (РА, РСК, РП, ИФА), ставят кожно-аллергическую пробу с кандида-аллергеном.

Специфическая профилактика не разработана.

Лечение. Нистатин, леворин, декамин. При тяжелых формах - амфотерицин В, низорал, флусцитодин, аутовакцина, клотримазол, кетоконазол.

8.2. Аспергиллы – возбудители аспергиллеза.

Аспергиллы – грибы р.Aspergillus. Находятся в почве, воздухе, на гниющих растениях. Споры их постоянно попадают в воздух, на продукты питания, предметы обихода, наружные покровы и слизистые оболочки. Из 200 видов аспергиллов 20 видов (A. fumigatus, A. flavus, A. niger, A. nidulans и др.) являются возбудителями аспергиллёза: инвазивный аспергиллёз легких ( возб. A. fumigatus) с тромбозом сосудов; аллергический бронхолегочный аспергиллёз в виде астмы; аспергиллома (аспергиллёзная мицетома) – гранулема, обычно легких, в виде шарика из мицелия, окруженного плотной волокнистой стенкой. Передаются аэрозольно при вдыхании спор, реже – контактным путем. В легкие попадают при работе с заплесневевшими бумагами, пылью («болезнь старьевщиков, мусорщиков»), а также при инвазивных методах лечения и обследования (бронхоскопия, пункция, катетеризация).

Аспергиллы имеют септированный, ветвящийся мицелий; размножаются бесполым путем, образуя конидии черного, зеленого, желтого, белого цветов. Конидии отходят от стеригм на споронесущей гифе. В тканях обнаруживается септированный мицелий.

Строгие аэробы. На среде Сабуро при 24⁰С образуют белые пушистые колонии с последующей окраской. Токсины аспергилл, афлотоксины, вызывают афлатоксикозы. Вызывают цирроз печени, являются канцерогенами.

Микробиологическая диагностика. Исследуют кожу, ногти, выделения из носа, наружного слухового прохода, мокроту, гной, кал, биоптаты тканей. Мазки окрашивают по (Граму и др.), выявляют септированный мицелий, конидии. Мокроту можно микроскопировать в капле спирта с глицерином или в капле 10% КОН, после надавливания покровным стеклом. Культивируют на пит. средах (Сабуро). Ставят кожно-аллергическую пробу, ПЦР, РП, ИФА и др.

Иммунитет. Клеточный. Развивается ГЗТ.

Лечение. Амфотерицин В, миконазол, хирургическое удаление пораженных участков.

Профилактика. Санитарно-гигиенические мероприятия.

8.3. Пенициллы – возбудители пенициллиоза.

Пеницилы – септированные плесневые грибы p. Penicillum, виды Р. chrisоgenum. , P.citrinum, P. notatum,P. glaucum и др., вызывают пенициллиоз. Распространены в почве, воздухе, на овощах и фруктах, гниющих растениях. Заражение аэрогенным путем при вдыхании пыли с элементами гриба. Пенициллы образуют септированный мицелий. На конидионосцах образуются разветвления – метулы I и II порядка – мутовчатые кисточки. От метул отходят пучки бутылкообразных фиалид с цепочками округлых конидий зеленого, желто-коричневого, розового или фиолетового цвета.

Патогенез и клиника пенициллиоза сходны с аспергиллезом.

Иммунитет. Клеточный. Развивается ГЗТ.

Микробиологическая диагностика. Исследуют кожу, ногти, роговицу, выделения из пазух носа, наружного слухового прохода, мокроту, гной, кал, биоптаты тканей. Препараты окрашивают, микроскопируют, в них выявляют гифы и конидии. Ставят ПЦР.

Лечение и профилактика - как при аспергиллёзе.

8.4. Мукор – возбудитель фикомикоза. Возбудителями фикомикоза являются различные условно-патогенные грибы родов Mucor, Rhizopus, Absidia, относящиеся к семейству Mucorасеае, низшим грибам (фикомицетам) с несептированным мицелием. Широко распространены в природе: в почве, воздухе, на гниющих растениях, на овощах, плодах и др. Известно более200 видов грибов семейства Mucorасеае, но вызывают фикомикоз лишь немногие. Все они аэробы. Растут на простых средах и среде Сабуро при 22-37 ⁰С. Колонии в начале белые, пушистые, затем образуется темно-бурый мицелий с спорангиеносцами, сплетающийся в виде войлока. Гифы ветвятся, но не имеют перегородок, размножение бесполое спорангиоспорами и половое – зигоспорами. При фикомикозах поражаются легкие, ЖКТ, кожа, мозг и др. органы у иммунодефицитных лиц. Болезнь не контагиозна. заражение аэрогенным путем или при контакте с травмированными тканями ЖКТ и кожи. При гематогенной диссеминации может развиваться менингоэнцефалит. Возможен летальный исход.

Микробиологическая диагностика. Микроскопический метод. Исследуют кожу, подкожную клетчатку, выделения из носа, кал, биоптаты тканей, соскобы слизистых оболочек. В клиническом материале обнаруживают несептированные гифы. Изучают культуральные признаки (характер роста на питательной среде). Серологический метод : ИФА, РП.

Иммунитет. Клеточный. Развивается ГЗТ.

Лечение. Хирургическое вмешательство в сочетании с амфотерицином В, интраконазолом, нистатином.

Специфическая профилактика не разработана.