|
|
Общая микробиология. Виды микроскопии назначение и принципы применения
Животные используются для получения целого ряда биологических
продуктов, например, polio вакцина (обезьяны), змеиное противоядие (лошади, козы), вакцина против бешенства (кролики, мыши, хомячки), сывороточный гонадотропин (лошади). Дополнительно животные могут также использоваться в контроле качества большинства сывороток и вакцин, например, противококлюшевая вакцина (мыши), пирогенность (кролики), БЦЖ вакцина (морские свинки).
Общие требования к помещениям для животных, уходу за ними, карантину изложены в Директиве 86/609/ЕЕС. Помещения для животных, используемых при производстве и контроле биологических продуктов, должны быть отдельно от производственных зон и зон контроля. Должно контролироваться и регистрироваться состояние здоровья животных, из которых получают некоторые исходные материалы, а также тех, которые используются в производстве, контроле качества и испытаниях на безопасность.
Документация
Спецификации для биологического исходного сырья могут потребовать дополнительной документации относительно источника, происхождения, способа производства и применяемых методов контроля, особенно микробиологического контроля.
В плановом порядке необходимы спецификации для промежуточных и in-buick биологических лекарственных продуктов.
Производство
Исходные материалы
Источник, происхождение и пригодность исходных материалов должна быть четко определена. Если необходимые испытания продолжительны, может быть разрешена обработка исходных материалов до получения результатов испытаний.В таких случаях выпуск конечной продукции обусловливается удовлетворительными результатами испытаний.
Если необходима стерилизация исходных материалов, она должна быть, по возможности, термической. Если необходимо, могут использоваться другие подходящие методы для инактивации биологических материалов (например, иррадиация)
Партии посевного материала и система банков клеток
Для того, чтобы избежать нежелательного дрейфа свойств, которое может наблюдаться при повторяющемся субкультивировании или множественном воспроизведении, производство биологических лекарственных препаратов, получаемых с помощью микробных культур, клеточных культур или размножением в эмбрионах и животных должно основываться на системе главных и рабочих партий посевного материала и/или банков клеток.
Количество поколений (удвоений, переходов) между партией посевного материала или банком клеток и конечным продуктом должно согласовываться с досье препарата для получения разрешения на продажу. Масштабирование процесса не должно менять этого фундаментального соотношения.
Партии посевного материала и банки клеток должны адекватно характеризоваться и испытываться на содержание загрязнения. Их пригодность к использованию должна быть впоследствии показана постоянством характеристик и качества последовательных партий продукции. Партии посевного материала и банки клеток должны быть созданы, храниться и использоваться таким образом, чтобы свести к минимуму риск загрязнения или изменения.
Создание партий посевного материала и банков клеток должно осуществляться в соответствующим образом контролируемой среде для защиты партий посевного материала и банков клеток и, если неоходимо, персонала, их обрабатывающего. Во время создания партии посевного материала и банка клеток ни один другой живой или инфицированный материал (например, вирусы, линии клеток или штаммы клеток) не должен обрабатываться одновременно в той же самой зоне или теми же людьми.
Доказательство стабильности и восстанавливаемости посевного материала и банков должно документироваться. Контейнеры для хранения должны быть герметично запаяны, четко этикетированы и храниться при определенной температуре. Перечень должен тщательно храниться. Температура хранения должна постоянно записываться для морозильных камер и должным образом контролироваться для жидкого азота. Любое отклонение от установленных пределов и любые предпринятые действия по корректировке должны протоколироваться.
Только уполномоченному персоналу должна быть разрешена работа с материалами. Эта работа должна выполняться под контролем ответственного лица. Доступ к хранящемуся материалу должен контролироваться. Различные партии посевного материала или банки клеток должны храниться таким образом, чтобы предотвратить путаницу или перекрестное загрязнение. Желательно делить партии посевного материала и банки клеток и хранить части в различных местах для сведения к минимуму риска полной потери.
Со всеми контейнерами главных или рабочих банков клеток и партий посевного материала необходимо обращаться одинаково во время хранения. Однажды снятый с хранения контейнер не должен возвращаться на хранение.
Принципы работы
Должна быть продемонстрирована способность культуральной среды поддерживать рост.
Добавление материалов или культур в ферментаторы или другие сосуды и отбор проб из них должны выполняться в тщательно контролируемых условиях для обеспечения того, что сохраняется отсутствие загрязнения. Необходимо принимать меры предосторожности для обеспечения того, что сосуды при пробоотборе правильно соединены.
Центрифугирование и смешивание продуктов может привести к образованию аэрозоля. Необходимо принимать меры предосторожности для предотвращения переноса живых микроорганизмов.
Если возможно, среды должны стерилизоваться на месте. По возможности должны использоваться встроенные фильтры для регулярного добавления в ферментатор газов, сред, кислот, щелочей, противопенных агентов и т.д.
Валидация необходимого удаления вирусов и выполняемая инактивация должны быть тщательно рассмотрены.
В случаях, если инактивация вирусов или процессы удаления выполняються в процессе производства, должны быть предприняты меры для предотвращения риска повторного загрязнения обработанных продуктов необработанными.
Для хроматографии используется целый ряд оборудования и, как правило, такое оборудовангие должно быть предназначено для очистки одного продукта, и должно стерилизоваться и проходить санитарную обработку между партиями. Не рекомендуется использование одного и того же оборудования на различных этапах обработки. Должны быть определены критерии приемлемости, срок службы и способы санитарной обработки и стерилизации колонок.
Контроль качества
Особо важную роль в обеспечении постоянства качества биологических лекарственных препаратов играет контроль в ходе процесса.На соответствующих этапах производства, которые критичны для качества (например, удаление вирусов), должен быть выполнен контроль, если он не может быть выполнен на конечном продукте.
Для обеспечения возможности повторения контроля партии или подтверждения его результатов может быть необходимым хранение образцов промежуточных продуктов в достаточных количествах и при соответствующих условиях хранения.
Необходим непрерывный мониторинг определенных процессов производства, например, ферментации. Такие данные должны составлять часть протокола партии.
Если используется постоянная культура, особое внимание должно быть уделено требованиям к контролю качества, которые вытекают из этого способа производства.
Методы и условия введения препаратов
Способы введения в организм бактерийных и вирусных препаратов зависят от их свойств и механизма действия. Большинство вакцинных и сывороточных препаратов до последнего времени вводят при помощи шприца подкожно, внутрикожно, внутримышечно или внутривенно. Для некоторых препаратов приняты также другие методы введения: накожный (путем скарификации), энтеральный, интраназальный. В настоящее время рекомендуется вводить некоторые препараты путем распыления при помощи специальной аппаратуры. Широко испытан и рекомендован для практики метод введения при помощи безыгольных инъекторов различной конструкции, позволяющих применять препараты подкожно, внутрикожно, внутримышечно.
При всех методах введения препаратов требуется соблюдение определенных правил в отношении помещений, в которых осуществляется вакцинация, подготовки рук персонала и кожи прививаемого, а также стерильности используемого инструментария (шприцы, иглы, скарификаторы, аппаратура для интраназального, аэрозольного и безыгольного введения).
Бактерийные и вирусные препараты являются биологическими веществами белковой природы, легко теряющими специфические свойства, поэтому одним из важнейших моментов, определяющих эффективность вакцинопрофилактики, является хранение препаратов в условиях, обеспечивающих стабильность их специфической активности на протяжении установленного срока годности. Особенности хранения каждого препарата указаны на этикетке коробок и в наставлении по применению. Хранение препаратов должно осуществляться для большинства препаратов при температуре 3-10° С, обеспечиваемой обычными бытовыми холодильниками. Нарушение правил хранения ведет к денатурации препаратов, изменению биологических свойств и потере их активности, т. е. к снижению эффективности вакцинопрофилактики. Так, хранение живых вакцин приводит к ускоренному отмиранию живых микробных клеток или вирусных частиц, являющихся действующим началом живых вакцин, и, следовательно, к потере активности препарата. При замерзании и последующем оттаивании препаратов адсорбированных на геле гидрата окиси алюминия, происходят хлопкование и денатурация геля с десорбцией препарата, что значительно снижает его иммуногенность и повышает реактогенность. Замораживание и оттаивание вакцинных препаратов, содержащих убитые микробные клетки, сопровождается повышением их реактогенности вследствие лизиса микробных клеток и выхода растворимых антигенов в жидкую фазу препарата.
Перед применением препарата медицинский работник, ответственный за проведение вакцинации, обязан тщательно проверить правильность фасовки препарата, наличие в коробке наставления по применению, целость и правильность этикеток на коробках и ампулах, целость ампул и физические свойства препаратов. Каждая коробка, в которую зафасованы ампулы или флаконы с препаратом, должна иметь этикетку, включающую название учреждения-изготовителя, его адрес, полное название препарата, его дозировку и способ введения, номер серии препарата, контрольный номер, срок годности и условия хранения. На каждой ампуле должны быть четкая этикетка (или маркировка на стекле), на которой указаны название города, где изготовлен препарат, количество препарата в ампуле, номер серии, контрольный номер, срок годности. Препараты нельзя применять в следующих случаях: при отсутствии этикеток или полных сведений на них, при любых повреждениях ампулы или флакона, наличии в препарате посторонних включений (осколки стекла, хлопья, нити и т. д.), любом изменении физических свойств препаратов, истекшем сроке годности.
Методика введения гетерогенных (из крови животных) сывороток и иммуноглобулинов с предварительной внутрикожной пробой.
Для предупреждения различных реакций, связанных с сенсибилизирующим действием чужеродных сывороточных белков на организм человека, и выявления лиц, обладающих повышенной чувствительностью к сывороточным белкам, перед введением таких препаратов обязательно определяют индивидуальную чувствительность организма – путем постановки внутрикожной пробы.
Для постановки внутрикожной пробы используют разведенную 1:100 лошадиную сыворотку, которую специально готовят с этой целью и вкладывают в коробки с лечебно-профилактической сывороткой. При отсутствии специально изготовленной сыворотки ее необходимо приготовить путем разведения 0,1 мл имеющейся лечебно-профилактической сыворотки в 9,9 мл стерильного физиологического раствора. Для проведения внутрикожной пробы необходимо иметь шприц с делениями 0,1 мл и тонкие иглы. Для каждой пробы используют индивидуальный стерильный шприц и иглу. Инъекцию производят в сгибательную поверхность предплечья. Внутрикожно вводят 0,1 мл разведенной сыворотки и наблюдают за реакцией в течение 20 мин. Пробу считают отрицательной, если диаметр образующейся на месте инъекции папулы не превышает 0,9 см и краснота вокруг нее ограничена. Проба считается положительной, если диаметр папулы достигает 1 см и более и последняя окружена большой зоной красноты.
При получении отрицательного результата внутрикожной пробы введение лечебно-профилактических сывороток начинают с подкожной инъекции 0,1 мл и только в случае отсутствия в течение 30 мин каких-либо реакций вводят остальное количество сыворотки.
При получении положительной внутрикожной пробы, свидетельствующей о повышенной чувствительности организма к белкам лошадиной сыворотки и возможности развития анафилактических реакций, сыворотки вводят только по безусловным показаниям, т. е. при прямой угрозе жизни больного. В этих случаях вводить сыворотку нужно с особыми предосторожностями при непосредственном участии врача. Вначале вводят подкожно разведенную сыворотку, применяемую для постановки внутрикожной пробы. Вводить ее нужно дробно с 20-минутными интервалами в дозах 0,5; 2 и 5 мл. Эти инъекции позволяют более четко выявить чувствительность к лошадиному белку и вместе с тем десенсибилизируют больного. Если реакция на эти дозы отсутствует, вводят подкожно 0,1 мл неразведенной лечебной сыворотки и при отсутствии реакции, на эту дозу через 30 мин вводят всю назначенную дозу сыворотки. В случае появления каких-либо реакций на одну из упомянутых выше доз лечебную сыворотку вообще не вводят либо вводят под наркозом, имея наготове шприц с адреналином или эфедрином.
Во всех случаях применения сыворотки необходимо помнить о возможности возникновения, хотя и в редчайших случаях, анафилактического шока. В обязательном порядке должно быть обеспечено медицинское наблюдение за привитыми в течение часа после инъекции.
|
|
|
Скачать 1.57 Mb.