I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
 Скачать 5.14 Mb.
|
20. Реакция антиген-антитело. Полные и неполные антитела.Ха-ка реакции АТ и АГ: -Взаимодествие их строго специфично-происходит связывание антигенной детерминанты с ак-ным центром АТ -Серологическая р-ия проходит при эквивалентных кол-вах ат и аг -Имеет двухфазный ха-р: 1.Специфическая фаза-фаза невидимая – быстрое, специфическое взаимодействие активного центра АТ с АГ. 2.Неспецифическая фаза – проявляется визуально,идет медленнее, зависит от присутствия электролитов и свойств АГ. Корпускулярные Аг -> крупнодисперсные конгломераты -> осадок (агглютинация). Растворимые Аг -> мелкодисперсные конгломераты (преципитация) -> помутнение раствора или образование колец преципитации либо зон преципитации в гелях. Полные и неполные Ат: Валентность – число активных (Аг-связывающих) центров АТ. Молекула полного АТ как минимум двухвалентна. Полные Ат (IgM, IgG) -> агрегация АГ, видимая невооруженным глазом (#агглютинация) С меньшей валентностью – неполные АТ. Содержат 1 АГ-связывающий центр и поэтому одновалентны (# АТ, при бруцеллезе). Второй Аг-связывающий центр экранирован различными структурами либо обладает назкой авидностью. Функционально дефектны, т.к. не способны агрегировать АГ. Неполные АТ могут связывать эпитопы АГ, препятствуя контакту с ними полных АТ, поэтому их так же называют блокирующими. 21. Монорецепторные агглютинирующие сыворотки. Диагностикумы.Их получают путем удаления неспецифических и групповых АТ методом адсорбции по Кастеллани (истощение по Кастеллани)- метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке.. Адсорбент - живые или убитые м/о, имеющие близкое АГ родство с культурой, примененной для иммунизации животного. Например:цельная иммунная сыворотка содержит АТ к АГ рецепторам АВСД. Необходимо получить монорецепторную сыворотку, содержащую АТ только рецептору А. Для этого в исходную иммунную сыворотку вносят биомассу бактерий, имеющих близкий набор антигенов ВСДЕ. Происходит адсорбция Антителом ВСД соответствующими микробными АГ рецепторами. Истощаемая сыворотка после каждой адсорбции проверяется в РА на стекле. Для освобождения сывороток от микробных тел с адсорбированными (ненужными) АТ проводится центрифугирование или фильтрация через бактериальный фильтр. Диагностическая адсорбированная сыворотка проверяется на стерильность, специфичность и активность. Применение такой сыворотки позволяет определить вид и тип выделенного микроба в РА на стекле без доп постановки развернутой РА. Стандартные АГ, специально полученные и используемые в серологических реакциях для выявления специфических АТ - диагностикумы. В качестве диагностикума применяют :Ввеси убитых м/о, экстракты или компоненты клеток. Различают бактериальные, риккетсиозные и вирусные диагностикумы,в зависимости от микроорганизма. Много АГ -> наличие перекрестных реакций > избирательное подавление отдельных АГ: с помощью фенола или формалина подавляют О-АГ. Спирт или прогревание -> подавляют Н-АГ. Еще более перспективно применение моно диагностикумов: лишь 1 АГ, и они взаимод-ют только с определенными АТ. Сохранение свойств бактериальных Д -> лиофилизация ( процесс получения обезвоженного материала, способного растворяться в воде; в отличие от высушивания, предусматривает предварительное замораживание материала и последующую сушку из замороженного состояния в вакууме.) 22. Реакция агглютинации и ее варианты (бактериальная РА, РНГА, коагглютинация, латексагглютинация).Реакции агглютинации - это склеивание крупных корпускулярных Аг с Ат с образованием агглютината или хлопьевидного осадка (необходимо наличие р-ра электролита, Аг, Ат) Варианты: РА на стекле: сероиндикатор Аг? Ат+ Вывод: искомый Аг – это культура сальмонелл Реакция непрямой агглютинации (РНГА) – серодиагностика АТ? Вывод: при взаимодействии Аг (эритроцитарного диагностикума ) и Ат исследуемой сыворотки происходит склеивание эритроцитов и формируется «зонтик», при отсутствии Ат эритроциты образуют точечный осадок в виде «пуговки» Реакция Коагглютинации: Используется для определения клеток возбудителя (Аг) с помощью Ат, адсорбированных на специальных штаммах стафилококка, содержащих белок А. Белок А обладает сродством к Fc-фрагменту иммуноглобулинов. Благодаря этому Ат связываются со стафилококком опосредованно через Fc-фрагмент, а Fc-фрагменты ориентированы наружу и способны взаимодействовать с соответствующими микробами, выделенными от больных. При этом образуются хлопья. Латексагглютинация Метод Латексагглютинации основан на взаимодействии Аг (или Ат) в образце с частицами латекса, нагруженными специфическими моноклональными Ат (или Аг), что ведет к быстрому образованию видимых агрегатов. Учет результатов проводят через 10-15 минут при косом освещении на темном фоне. |