I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)

• Название: I. общая часть (бактериология, микология, вирусология, микробная экология, санитарная микробиология)
• Дата: 30.05.2022
• Размер: 5.14 Mb.
• Имя файла: mikra_po_voprosam (1).docx
• Тип: Документы; #556622
• страница: 35 из 72

25. Иммунолюминесцентный метод и его применение в диагностике инфекционных заболеваний.

Реакция иммунофлуоресценции(РИФ) – это сложная серологическая реакция с участием Аг (?) и Ат, меченных флюорохромами – ФИТЦ - это флуоресцеин-изотиоцианат.

Прямой метод: обработка материала на предметном стекле меченой флюорохромом диагностической сывороткой. Если на стекле был искомый Аг, Ат фиксируются на Аг и после отмывки стекла от не связавшихся Ат Аг выявляется в люминесцентном микроскопе по свечению

Непрямой метод основан на использовании антивидового Ат (антиглобулиновой сыворотки)

Реакции прямой и непрямой иммунофлуоресценции широко применяются для экспресс-диагностики многих инфекционных заболеваний, в частности, особо опасных инфекций

Используется в основном для обнаружения микробов, светящихся в поле зрения люминесцентного микроскопа, можно выявить и Ат к микробным Аг.

РИФ удачно сочетает быстроту исследования с получением инфориации не только о наличии в материале некого микроба, но и его видовой принадлежности. Этот экспресс-метод серологической индикации и идентификации микробов позволяет исследовать не только чистые культуры, но и различные биологические образцы от больных(кровь, ликвор, гной, моча), в которых могут помимо патогенных содержаться посторонние микроорганизмы.

26. Реакция связывания комплемента. Реакция иммунного гемолиза

Р-ция связывания комплимента (РСК) – сложная серологическая реакция, в которой участвует 2 системы:

а) опытная (тест-система) – может быть неизвестен как Аг, так и Ат

б) индикаторная = гемолитическая, состоит из Аг – эритроциты барана (3% взвесь) и гемолитическая сыворотка

Механизм РСК:

Тест-система Аг? Ат? Индикаторная

Аг+гонококовый Аг Аг – эритроциты барана

Ат? Ат- гемолитическая сыворотка

Комплимент («С»)

Результаты:

1. В пробирках наблюдается гемолиз, следовательно комплимент находится в индикаторной гемолитической системе, т.е. в 1 опытной системе нет комплимента Аг-Ат, у пациента нет Ат, не болеет

2. Наблюдается задержка гемолиза, т.е. комплимент не попал до индикаторной системы, т.к. весь связался в 1 опытной системе, у пациента есть Ат, слндователно он болен. Отсутствие гемолиз –

«+» РСК

Титр «С»(комплимент) - такое максимальное его развидение или минимальное кол-во, при котором происходит гемолиз эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки, температура 37 градусов, время 1 час

Рабочая доза «С»(комплимент) на 25-30% выше титра

Реакции иммунного гемолиза: в результате разрушения эритроцитов из них выходит гемоглобин, образуется прозрачная красная жидкость, которая называется «лаковой кровью». Если не гемоглобина – в пробирке осадок эритроцитов

Компоненты реакции:

Аг – эритроциты барана

Ат – гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана

Комплимент – свежевзятая сыворотка крови морской свинки или сухой препарат в ампуле.

Практическое применение реакции гемолиза:

-для определения титра комплимента исследуемых сывороток при излучении иммунного статуса пациента

-как индикаторная система в РСК

27. Твердофазный иммуноферментный анализ: принцип, применение для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний (ифа)

Реакция иммуноферментного анализа - это сложная серологическая реакция с участием Ат и Аг, меченных ферментами

Твердофазный ИФА проводят в полистироловых планшетах (так называемая «твердая фаза» - 96 лунок в каждой планшете), при постоновке реакции необходимо на каждом этапе отмывать непрореагировавшие компоненты

При определении Ат в лунки, на которых сорбированы Аг, вносят исследуемую сыворотку крови, затем антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом. После добавления каждого компонента тест-системы инкубируют, затем их содержимое удаляют и промывают лунки специальными растворами. Проявляют реакцию, добовляя субстрат для фермента. В присутствии фермента цвет субстрата изменяется, для чего фермент-субстратный комплекс подбирают так, чтобы образующийся в реакции продукт был бесцветен. Т.о. при положительной реакции наблюдается изменение цвета раствора.

Для определения Аг твердофазный носитель сенсебилизируется, т.е. дно лунок покрывают слоем Ат, затем в эти лунки последовательно вносятся исследуемый материал (Аг) и сыворотка к Аг, меченная ферментом. Интенсивность окрашивания обратно пропорциальна концентрации определяемого Аг или Ат.