Издательский дом Питер
 Скачать 5.79 Mb.
|
|
302 Глава 6. Иммунологические основы переливания крови Таблица 67 Расчетные нормы времени на проведение микробиологических исследований в лабораториях клинической микробиологии (бактериологии) в лечебно-профилактических учреждениях неинфекционного профиля
303 Нормирование труда при проведении исследований Таблица 68 Нормирование труда работников, производящих изосерологические исследования [Климова К. Н., Минеева Н. В., 1991]
304 Глава 6. Иммунологические основы переливания крови Окончание табл. 68
Метод агглютинации в геле для определения антигенов эритроцитов 305 6.10. Метод агглютинации в геле для определения антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител 6.10.1. Общие положения Гелевую технологию в микропробирках (ГТМ) предложил Y. Lapierre в 1989 г. Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом геле «се-фадекс», помещенном в микропробирки. Обычно система представляет собой пластиковые карты, содержащие микропробирки, заполненные гелем (патент DiaMed AG, Швейцария). Иммуногематологические исследования, основанные на реакции гемагглютинации, как правило проводятся в жидкофазных системах. Одним из наиболее важных условий получения корректных данных реакции агглютинации является оценка результата. Слабая реакция может быть неверно интерпретирована, особенно неопытным персоналом. Ложные слабые или отрицательные результаты непрямого антиглобулинового теста могут иметь место за счет нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки вследствие недостаточно эффективного отмывания эритроцитов. Неадекватное перемешивание эритроцитов и элюция слабофиксированных антител в процессе отмывания могут стать причиной ошибок при проведении непрямого антиглобулинового теста. Методика агглютинации в геле была разработана с целью стандартизации реакций гемагглютинации и получения достоверных результатов. Гелевая технология предусматривает разделение эритроцитов при центрифугировании, при этом неагглютинированные эритроциты проходят через гель и оседают на дне пробирок (отрицательный результат), в то время как агглютинированные эритроциты задерживаются на поверхности или в толще геля (положительный результат). Центрифугирование в геле может быть конечной фазой любых серологических исследований, основанных на реакции гемагглютинации, кроме методов, требующих диспергирования для оценки результата. Диапазон выполняемых тестов включает в себя определение фенотипа эритроцитов (включая слабые варианты антигенов), антиглобулиновый тест, скрининг и идентификацию антител, тесты на совместимость и некоторые другие*. * Например, прямой антиглобулиновый тест (ПАТ) в гелевом варианте (DiaMed, Швейцария) более чувствителен по сравнению с пробирочным (реагенты Gamma Biological, США). Из 575 ПАТ-позитивных образцов положительный вариант получен в гелевом тесте в 573 (99,7 %), а в пробирочном - в 320 (56,0 %) (р<0, 001) случаев. В 31 % случаев антитела, зарегистрированные в гелевом тесте и упущенные в пробирочном, выявлены в элюате [Sintnicolaas К. et al., 2001]. 306_____________Глава 6. Иммунологические основы переливания крови АНГЛОЯЗЫЧНЫЕ ТЕРМИНЫ, ВСТРЕЧАЮЩИЕСЯ ПРИ ОПИСАНИИ ИДЕНТИФИКАЦИОННЫХ КАРТ AHG — античеловеческий глобулин Confirmation — подтверждение, подтверждающий тест Coombs — Кумбс Ctl — контроль DiaClon — моноклональные Enzyme — фермент LISS — раствор низкой ионной силы Neg — негативный (отрицательный) Newborns — новорожденные Phenotype — фенотип Pos — позитивный (положительный) Subgroups — подгруппы 6.10.2. Принцип гелевого теста Забуференный декстрановый гель «Sephadex™ G 100 superfine» может быть как нейтральным, так и содержащим специфические антисыворотки или антиглобулиновый реагент на гелевом матриксе. На гель наносятся эритроциты или смесь эритроцитов и сыворотки. Клетки всегда вносятся перед сыворотками (в отличие от стандартных серологических методик) с тем, чтобы тестируемые сыворотки не контактировали с гелем, что особенно важно при проведении антиглобулинового теста. После инкубации следует центрифугирование в строго определенном режиме. Если условия центрифугирования не выполняются (центрифугирование недостаточно длительное или слишком мягкое), могут иметь место ложноположительные результаты. Ложноотрица-тельные результаты также могут иметь место при нарушении условий центрифугирования (при форсировании). Использование автоматической ID-центрифуги устраняет эти проблемы. Для проведения тестов обычно используются три вида геля: 1) нейтральный, не содержащий специфических антител (применяется для поиска и идентификации антител солевым и ферментным методами, на хо-лодовой стадии пробы на совместимость крови донора и реципиента); 2) специфический, содержащий антитела (моноклональные или поликло-нальные) к антигенам эритроцитов крови человека (применяется для типи-рования антигенов эритроцитов систем АВО, резус, Kell и т.д.); 3) антиглобулиновый, содержащий антитела (полиспецифические или моноспецифические) к иммуноглобулинам человека и компонентам системы комплемента (применяется для прямого и непрямого антиглобулинового теста, т. е. реакции Кумбса, при поиске и идентификации ауто- и аллоиммун-ных антител, пробе на совместимость крови донора и реципиента). Метод агглютинации в геле для определения антигенов эритроцитов 307 Исследуемая кровь добавляется в верхнюю часть микропробирок диагностических карт, и при центрифугировании осуществляется разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов следующим образом: неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета — отрицательный результат; агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще — положительный результат. Фиксированная агглютинация в геле позволяет легко оценивать результат реакции, а наличие контрольной микропробирки в диагностической карте подтверждает достоверность полученных данных. В зависимости от силы реакции агглютинации в гелевой среде принята следующая оценка полученных результатов: — сильноположительный (++++) — образовавшиеся агглютинаты эритроцитов задержались на поверхности геля; — положительный (+++) — агглютинаты располагаются в верхней трети столбика геля; — слабоположительный (++) — агглютинаты фиксированы в верхних двух третях геля; — очень слабоположительный (+) — агглютинаты располагаются в нижней трети геля; — отрицательный (-) — эритроциты формируют на дне микропробирки компактный осадок. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||