Ответы к экзамену по иммунологии. Клеточный иммунитет введение
 Скачать 0.63 Mb.
|
Иммунокоррекция фитопрепаратамиАлкалоиды, гликозиды, флавоноиды, эфирные масла, микроэлементы, витамины и др. активные компоненты растений обусловливают комплексный противовоспалительный, противомикробный, стимулирующий и др. эффекты. Представители семейства аралиевых: женьшень, элеутерококк, аралия маньчжурская — адаптогены и биостимуляторы, история применения которых насчитывает тысячелетия. Их применяют при различных иммунодефицитах (нормализуют показатели клеточного, гуморального иммунитета, стимулируют активность макрофагов, индукцию ИФН и др.). Эхинацея содержит важнейшие микроэлементы (селен, цинк и др.) и биологически активные вещества (биотин, рутин, флавоноиды и др.), а также витамины А и С. Препараты эхинацеи стимулируют клеточный и гуморальный иммунитет, а также секрецию макрофагами ИФН, ИЛ-1 и ФНО. Растительные стимуляторы синтеза интерферона: арника, мать-и-мачеха, омела белая, кубышка желтая. Растения, обладающие способностью увеличивать содержание лизоцима в организме: 1) стимулируют выработку лизоцима в организме с помощью эфирных масел: анис, герань, гвоздика, лаванда, эвкалипт; 2) сами содержат лизоцимоподобные вещества: лук, чеснок, редька, свекла и т. п. Действие растений, влияющих на систему комплемента (просвирник лесной, чабер), связано в основном с нормализацией белоксинтетической функции печени, где синтезируются белки системы комплемента. Лекарственные растения, повышающие активность фагоцитоза, активируют окислительно-восстановительные процессы: горец птичий, клевер, зверобой, можжевельник, чистотел, сабельник, бузина черная, барбарис. Растения, влияющие преимущественно на Т-лимфоциты, обладают митогенами, ускоряющими созревание Тлимфоцитов. Это касатик молочный, крапива двудомная, майоран садовый. Растением, воздействующим на В-систему иммунитета, является солодка голая, содержащая растительные стероиды, флавоноиды, активирующие пролиферацию В-клеток и синтез Jg. 6.Нуклеиновые кислоты: -естественные (натрия нуклеинат, деринат); -синтетические (полудан). Полудан модулирует образование α- и β-интерферонов. Применяется для лечения вирусных кератитов и кератоконъюнктивитов (воспаление роговицы и конъюнктивы глаза). 7.Вещества известной химической структуры (левамизол, пранобекс, бромипирин). Левамизол (декарис) вначале был известен как противоглистное средство. Но позже был отмечен и его иммуностмулирующий эффект. Левамизол стимулирует превращение Т-лимфоцитов-предшественников в функционирующие Т-клетки и активирует периферические Т-клетки. Применяется этот препарат при опухолевых заболеваниях, амилоидозе, глистных инвазиях. Непрямым иммуностимулирующим действием обладают и биогенные стимуляторы. По происхождению они делятся на:
Иммунодепрессанты Иммунодепрессанты это средства, угнетающие иммунную систему. Они могут воздействовать как на лимфоидную ткань, так и на отдельные иммунокомпетентные клетки. С помощью иммунодепрессантов возможно подавить любую иммунную реакцию. По своей сути все иммунодепрессанты являются цитостатиками. Все препараты этой группы можно поделить на:
Побочные эффекты иммунодепрессантов: - Возможная активация роста злокачественных заболеваний. - Пониженная сопротивляемость инфекциям. - Препараты могут вызывать нарушения развития плода у беременных женщин. - Угнетение кроветворения Иммунотропная терапия Различают специфическую и неспецифическую иммунотерапию и иммунопрофилактику. Неспецифическое воздействие на функцию иммунной системы включает факторы, неспецифичные по отношению к возбудителю (антигену) патологического процесса. Специфическое воздействие обусловлено применением препаратов антигенов (аллергенов) или антител, специфичных к возбудителю (антигену, аллергену) болезни. Кроме того, различают активную иммунотерапию (или иммунопрофилактику), когда система иммунитета активно отвечает на введенный препарат (обычно на антигены, вакцины), и пассивную, когда в организм вводят готовые защитные иммуноглобулины. В зависимости от механизма (или характера) воздействия на иммунную систему выделяют два вида иммунотерапии и иммунопрофилактики: стимулирующий и супрессирующий. Иммунотропная терапия – это комплекс этиотропных и патогенетических мероприятий, направленных на улучшение иммунологической защиты организма. В целом, в комплексе мер по иммунореабилитации лиц с дисфункцией иммунной системы рационально использовать следующую программу лечебного процесса. Клеточно-опосредованный иммунитет (CMI) Для оценки CMI обычно используется ряд методов: кожные реакции замедленного типа; подсчет количества Т-клеток и субпопуляций Т лимфоцитов; стимуляция лимфоцитов митогенами, антигенами или аллогенными клетками in vitro; и другие тесты для изучения функций Т-клеток in vitro. Кожные пробы. Замедленная кожная гиперчувствительность (ГЗТ, или DCH) - это локализованная в коже иммунная реакция, ее прототипом является туберкулиновый кожный тест. Так как ГЗТ зависит от активности тимус-зависимых лимфоцитов (Т-лимфоцитов), эта реакция используется для скрининга опосредованных Т-клетками иммунодефицитов. Обычно используют следующие антигены: возбудитель паротита, трихофитон, очищенный белковый дериват (PPD), Candida или Monilia, столбнячный и дифтерийный анатоксины. Для большей достоверности следует использовать несколько антигенов. Все кожные тесты проводят путем внутрикожных инъекций 0.1 мл антигена, через 48-72 часа определяют максимальный диаметр образовавшегося на месте инъекции инфильтрата, который свидетельствует о сохранном клеточном иммунитете. Эритема не является проявлением DTH. Отрицательный результат неинформативен у маленьких детей. 1. Туберкулин: используют 0.1мл раствора, содержащего 2-10 международных единиц (IU) стабилизированного твином растворимого PPD. При отрицательных результатах тест следует повторить с 50 IU. 2. Candida или Monilia: сначала используют раствор 1:100; если нет реакции - тест проводят в разведении 1:10. 3. Трихофитон: применяется разведение 1:30. 4. Возбудитель паротита: препарат антигена не разводят; через 6-8 часов проверяют на раннюю реакцию Артюса (опосредованную антителами) и через 48 - на DTH. 5. Столбнячный и дифтерийный растворимые токсины: используют разведение 1:100. Мы не рекомендуем использовать динитрохлор-бензол (DNCB), так как он обладает мутагенным действием, а также может вызвать некроз. Мы также не рекомендуем для исследования клеточно-опосредованного иммунитета мультитестовые системы. Т-лимфоциты. Для того чтобы с уверенностью определять фенотип субпопуляций лимфоцитов больных с иммунодефицитами, необходимо разобраться в процессе нормальной дифференцировки и функции этих клеток. Т-клетки подсчитывают методом иммунофлюо-ресценции с использованием моноклональных анти-CD3-антител. Эти антитела метят не только Т, но и NK-клетки. Mетод проточной цитометрии является более достоверным, чувствительным и воспроизводимым, чем микроскопический анализ. С помощью анти-CD4 и анти-CD8 моноклональных антител аналогично анализируют субпопуляции Т-клеток. CD4-позитивные клетки узнают антигены в ассо-циации с молекулами MHC II (HLA-D), а CD8-пози-тивные клетки - антигены в ассоциации с MHC I (HLA-A, HLA-B и HLA-C) молекулами. Антиген-специфический ответ Т лимфоцитов является MHC-рестриктированным. Изменение количества CD4 или CD8 клеток может быть связано с нарушением как распознающей, так и регуляторной функции Т клеток, и приводить к иммуной некомпетентности или аутоиммунным реакциям. При подозрении на гипер-IgM синдром необходимо проаналиизировать экспрессию лиганда CD40 на Т лимфоцитах, активированных PMA и иономицином. Моноклональные анти-CD16, CD56, CD57, хоть и не являются линейноспецифичными, могут быть полезными для подсчета естественных киллеров (NK). Стимуляция лимфоцитов in vitro. Лимфоциты можно активировать in vitro (a) митогенами, например, фитогемагглютинином (PHA), митогеном лаконоса (PWM) или конканавалином А (ConA); (b) антигенами: PPD, кандидином, стрептокиназой, антигенами столбняка и дифтерии, если больной уже имел контакт с антигеном или суперантигеном, например, токсином синдрома токсического шока (TSST1); (c) аллогенными клетками; (d) антителами к мембранным молекулам Т лимфоцитов, участвующим в передаче сигнала: CD3, CD2, CD28 и CD43. Пролиферацию Т клеток можно оценить прямым методом, измеряя (1) бластогенез и/или пролиферацию клеток; (2) экспрессию активационных антигенов; (3) выход медиаторов. Бласттрансформация оценивается через 3-7 дней по 16-24 часовому включению 3Н- или 14 С-меченного тимидина, после экстрации ДНК или преципитации клеток на фильтровальной бумаге с последующим подсчетом активности в жидкостном сцинтиляционном счетчике. Контрольный уровень (спонтанная бласттрансформация) варьирует у различных людей и в различное время, поэтому необходимо всегда приводить данные по стимулированным и нестимулированным культурам. РНА или ConA активируют Т-клетки в присутствии моноцитов; в определенных условиях, например при прикреплении к определенным материалам, эти митогены активируют и В клетки. PWM вызывает как В-, так и Т-клеточный ответ, хотя для В-клеточной активации необходимо наличие Т клеток. Смешанная реакция лимфоцитов (MLC) является результатом активации Т-лимфоцитов МНС-молекулами, расположенными на В лимфоцитах и моноцитах. Следует отметить, что в то время как облученные или обработанные митомицином С лимфоциты стимулируют МLC, нормальные Т лимфоциты в культуре могут секретировать факторы, индуцирующие бласттрансформацию лимфоцитов пациента. Таким образом, в качестве стимуляторов предпочтительно использовать В клеточные линии или очищенные от Т лимфоцитов нормальные клетки. Активированные Т лимфоциты экспрессируют IL-2R (CD25), рецептор к трансферрину (CD71) и мо-лекулы MHC II, которые практически отсутствуют на покоящихся Т-клетках. Для исследования способности к экспрессии этих рецепторов, Т лимфоциты стимулируют растворимым лектином, таким как PHA и через 3 дня анализируют экспрессию активационных антигенов методом прямой или непрямой иммунофлуоресценции, используя соответствующие моноклональные антитела: к рецептору интерлейкина-2 (CD25), или трансферритину (CD71), или к молекулам II класса MHC. Для непрямой иммунофлуоресценции неспецифические мышиные моноклональные антитела и меченные флуорохромом антимышиные иммуноглобулины используются для конроля возможного прикрепления мышиных моноклональных антител к Fc-рецепторам. Активированные Т лимфоциты и моноциты синтезируют и секретируют интерлейкины- 2,4,5 и 6, интерферон- и другие цитокины. Содержание IL-2 в супернатантах активированных РНА мононуклеарных клеток можно определить методом ELISA или по оценке их способности стимулировать захват 3Н-тимидина Т-лимфоцитами мышиных IL-2-зависимых клеточных линий (CTLL2). При использовании биологического метода необходимо подтверждение результатов с помощью контрольного эксперимента с блокирующими антителами к IL-2. Существуют специфические in vitro системы для определения и других цитокинов, но не все они надежны ИММУНОСУПРЕССИЯ, ИНДУЦИРУЕМАЯ ВИРУСАМИ Вирусы могут препятствовать развитию иммунного ответа несколькими путями: непосредственно лизировать лимфоидные клетки (например, вирус кори и вирус чумы собак); инфицировать лимфоциты и различными путями нарушать их функции (например, вирус лейкоза крс); продуцировать вирусные субстанции, которые могут непосредственно препятствовать антигенному распознаванию или клеточной кооперации (например, вирус лейкемии кошек); вторично индуцировать иммуносупрессию образованием большого количества иммунных комплексов (например, вирус инфекционного перитонита кошек). Вирус чумы собак (CDV), вирус лейкемии кошек (FeLV), парвовирусы вызывают вирус-индуцированную иммунную дисфункцию через различные механизмы. Вирусная коревая инфекция у человека может индуцировать временное состояние иммуносупрессии за счет разрушения Т-лимфоцитов в Т-зависимых зонах лимфоидных структур. Это обусловлено наличием специфических рецепторов вируса кори на поверхности Т-клеток. Вирус чумы собак тесно связан с вирусом кори, и хотя наличие эквивалентных вирусных рецепторов на поверхности Т-клеток собак не доказано, имеются убедительные клинические и экспериментальные данные, показывающие, что этот вирус также вызывает состояние временной иммуносупрессии. В результате инфицирования им собак-гнотобиотов наблюдается атрофия тимуса с генерализованным лимфоидным истощением, приводящее к лимфопении. При этом нарушается бласттрансформация лимфоцитов in vitro, однако способность отторгать аллогенный кожный трансплантат не изменяется. Степень лимфоидного истощения, и, следовательно, появление Т-клеточной иммуносупрессии коррелирует с исходом болезни. Более сильно поражены животные, у которых отсутствует ответ на внутрикожное введение ФГА, они быстро погибают от энцефалитов, в то время как животные, сохранившие Т-клеточный иммунный ответ, часто выздоравливают. Вирус чумы собак вызывает иммуносупрессию прежде всего за счет цитотоксического действия при ранней репликации вируса в лимфоретикулярной ткани. В результате, возникают некроз лимфоцитов в лимфатических узлах, селезенке, тимусе и лимфопения. Кроме того, отмечается снижение Т-клеточного ответа на митогены in vitro и снижение гуморального иммунного ответа при инфекциях, сопутствующих CDV. Это наблюдается на ранней стадии заболевания с последующим вторичным развитием бактериальных инфекций. Иные механизмы лежат в основе иммуносупрессии, вызываемой вирусом лейкемии кошек. Заболевание, вызываемое FeLV, вероятно, является наиболее изученным в ветеринарии. Инфицирование котят ведет к вирус-индуцированной деструкции лимфоидных тканей с последующей их атрофией и повышенной чувствительностью к инфекциям. При этом, большинство иммунных показателей снижены, и у животных нарушается способность отторгать аллогенный кожный трансплантат. Обычно, инфекция ведет к иммуносупрессии без явного разрушения лимфоидных тканей. Это связано с продукцией излишних количеств вирусного оболочечного белка р15Е. Точный механизм действия этого избытка неясен, но есть предположение, что он препятствует активации лимфоцитов и распознаванию антигена. В литературе описана иммуносупрессия, вызываемая дефект-реплицированным мутантом вируса лейкемии кошек, которая происходила во время естественной болезни. Хотя FeLV часто называют AIDS у кошек из-за его сходства с HIV инфекцией, более подходящей моделью для животных может служить описанный Т-лимфотропный лентивирус кошек. Для инфекции, вызываемой FeLV, характерным является атрофия тимуса, лимфопения, низкий уровень комплемента в крови и высокий уровень иммунных комплексов. При этом у кошек наблюдается повышенная чувствительность к различным инфекциям, включающих инфекционный перитонит, герпесвирусные риниты, вирусную панлейкопению, гемобартонеллез и токсоплазмоз. Дальнейшее развитие этих болезней вызывает фундаментальный дефект Т-клеток, который проявляется in vitro выраженным снижением Т-клеточного ответа на митогены. Первичному Т-клеточному дефекту сопутствует вторичный функциональный дефект В-клеток. Но дефект В-клеток может быть и не связан с дефектом Т-клеток. В-клетки не способны продуцировать IgG-антитела в отсутствие Т-хелперов, но могут сохранять способность синтеза IgM-антител через Т-клеточные независимые механизмы. Поэтому активность В-клеток только частично нарушена при инфекции, вызываемой FeLV. Проявление дефекта Т-клеток связано с отсутствием требуемой стимуляции для активации Т-клеток. Сопутствующей проблемой является нарушение в продукции интерлейкина-2, лимфокина, необходимого для сохранения и поддержки активации Т-клеток, пролиферации и продукции Т-хелперов, что благоприятно влияет на продукцию антител В-клетками. В иммуносупрессивном действии FeLV инфекции, вероятно, участвуют два сывороточных фактора. Вирусный оболочечный белок р15Е непосредственно вызывает иммуносупрессию лимфоцитов и отменяет ответ лимфоцитов на различные митогенные стимулы in vitro. Это действие, возможно, связано с его способностью блокировать ответ Т-41 лимфоцитов на интерлейкин-1 и интерлейкин-2 и отменять синтез интерлейкина-2. Когда р15Е вводят кошкам одновременно с вакциной против FeLV, не происходит образования защитных антител к мембранному клеточному антигену онкорнавируса кошек. Таким образом, р15Е играет центральную роль в иммуносупрессии, вызываемой FeLV как in vivo так и in vitro. К тому же, пораженные кошки имеют высокий уровень циркулирующих иммунных комплексов, которые сами по себе являются иммуносупрессорами. FeLV может непосредственно нарушать миграцию Т-клеток из костного мозга в периферические лимфоидные ткани, уменьшает число нормальных Т-клеток в тимусе, селезенке и в лимфатических узлах. Очевидно, несколько различных механизмов поражения В- и Т-клеток могут способствовать иммуносупрессии кошек, инфицированных FeLV. Парвовирусная инфекция многих видов животных приводит к иммуносупрессии за счет митолитического влияния вируса на деление стволовых клеток в костном мозге. Следовательно, лимфопения и гранулоцитопения являются следствием прямого воздействия инфекции, вызываемой этим вирусом. Парвовирусная инфекция собак также сопровождается иммуносупрессией, и энцефалиты, обусловленные вакцинацией против чумы, описаны у собак, экспериментально инфицированных парвовирусом. Вирус панлейкопенпп кошек, как и парвовирус, обладает менее сильным иммуносупрессивным эффектом, который в большей степени ограничивает временное истощение Т-клеток. Возможный иммуносупрессивный эффект живой аттенуированной вакцины, в частности, вакцины против парвовируса собак, остается под вопросом, но считается, что одновременная иммунизация аттенуированными парвовирусом и вирусом чумы безопасна и эффективна. Инфекция жеребых кобыл, обусловленная герпесвирусом лошадей, может вызывать аборты в последней трети беременности. Если жеребенок вынашивается к сроку, он предрасположен к тяжелым инфекциям, которые обусловлены вирус-индуцированной атрофией всех лимфоидных структур. Вирусная диарея крупного рогатого скота — другой пример вирус-индуцированной иммуносупрессии, которая сопровождается повреждением Т- и В-клеточного иммунитета. Это способствует развитию хронического изнуряющего синдрома с персистирующей инфекцией. Этот вирус также способен проходить через плаценту, вызывая иммунологическую толерантность и снижение иммунного ответа у телят. Вирус лейкоза крупного рогатого скота - проявляет тропизм к В-клеткам, в которых он вызывает пролиферацию и иногда неопластическую трансформацию. Влияние его на иммунологические параметры зависит от типа и стадии болезни. Обычно наблюдается лимфоцитоз с увеличением количества В-клеток, экспрессирующих поверхностные иммуноглобулины. ИММУНОСУПРЕССИЯ, ВЫЗЫВАЕМАЯ БАКТЕРИЯМИ В сравнении с вирусными инфекциями, при которых иммуносупрессивный эффект обычно связан с прямым инфицированием лимфоидных тканей, механизм вторичной иммуносупрессии при бактериальных болезнях недостаточно изучен. При болезни Ионе, вызываемой Mycobacterium paratuberculosis, наблюдается парадокс, при котором несмотря на выраженный клеточный иммунный ответ к возбудителю, соответствующая реакция к другим антигенам может быть нарушенной или не проявляться совсем. Так у пораженного крупного рогатого скота не развивается кожная реакция на туберкулин. Такая же ситуация наблюдается при хронических микобактериальных болезнях у человека, при которых отмечается состояние анергии. При этом, лимфоциты не подвергаются трансформации в ответ на ФГА in vitro, увеличивается число клеток-супрессоров в присутствии растворимого фактора, который препятствует проявлению клеточных реакций. К концу последнего десятилетия стало очевидным, что отсутствие стимуляции лимфоцитов in vitro ассоциируется со многими хроническими болезнями инфекционного и неинфекционного происхождения. Лимфоциты не способны отвечать на митогены в присутствии гомологичной нормальной сыворотки или фетальной сыворотки крупного рогатого скота. В других случаях лимфоциты проявляют реакцию, которая возникает при выделении их из аутологичной сыворотки. Супрессия в этом случае связана с действием супрессивных сывороточных иммунорегуляторных факторов. Причастность этих веществ к иммунному ответу in vivo остается неясной. Известно только, что вещества с такими свойствами обнаружены во многих сыворотках, полученных от нормальных и больных животных, однако природа этих веществ не установлена. Также неясно, являются ли они причиной болезни, или образуются в процессе ее, участвуя в механизме, с помощью которого микробный агент проявляет в дальнейшем свою патогенность. Необходимы эксперименты, чтобы показать повышение патогенности микроорганизмов под воздействием этих факторов, поскольку возможно, что они в этих случаях не играют никакой роли. |