Методичка по общей хирургии. Методические указания для самоподготовки по дисциплине Общая хирургия, осенний семестр Рязань 2021 удк ббк ф

• Название: Методические указания для самоподготовки по дисциплине Общая хирургия, осенний семестр Рязань 2021 удк ббк ф
• Анкор: Методичка по общей хирургии
• Дата: 31.08.2022
• Размер: 227.2 Kb.
• Имя файла: Metodichka_osennii_774_semestr.doc
• Тип: Методические указания; #657681
• страница: 16 из 26

Возможные ошибки при определении

групповой принадлежности крови

Ошибки при определении групповой принадлежности крови могут быть связаны с тремя группами причин.

Негодность реагентов. Стандартные сыворотки и эритроциты могут приходить в негодность в случае ненадлежащего хранения, либо изначально быть негодными для использования ввиду производственного брака. Для исключения подобных ошибок необходимо следить за соблюдением правил хранения реагентов, сроком их годности, внешним видом (прозрачность, наличие хлопьев), реакции ставить одновременно с препаратами двух разных производственных серий.

Технические ошибки. Наиболее распространённые из них следующие:

1. Плохая освещённость помещения, не позволяющая выявить агглютинацию.

2. Несоблюдение температурного режима. При температуре свыше 25°С реакции замедляются. При температуре ниже 15°С возможна холодовая панагглютинация – неспецифическая агглютинация во всех лунках.

3. Неправильное расположение сывороток и эритроцитов на планшете.

4. Использование одной и той же стеклянной палочки для перемешивания реагентов в разных лунках.

5. Нарушение соотношения между сывороткой и кровью (нужно 10:1).

6. Ранняя преждевременная оценка результатов реакции.

7. Недобавление в лунки капли физиологического раствора. Дело в том, что эритроциты в результате слипания могут образовать так называемые «монетные столбики», которые можно принять за зёрна агглютинации. При добавлении физиологического раствора они рассыпаются, а истинная агглютинация сохраняется.

Особенности исследуемой крови. Существуют заболевания, при которых агглютинабельность агглютининов может повышаться (инфекционные процессы) или снижаться (онкологические заболевания, болезни крови). Ошибки могут быть связаны с одновременным наличием в крови пациента эритроцитов с разной групповой принадлежностью. Такое явление называется кровяная химера.

Определение резус-принадлежности пациента

Определение резус-принадлежности с помощью антирезусной сыворотки. Данная методика основана на взаимодействии между эритроцитами пациента и антирезусной сывороткой, содержащей антитела к резус-фактору. Источником этой сыворотки является кровь сенсибилизированного донора.

Указанная реакция имеет ряд особенностей. Во-первых, для исключения агглютинации из-за взаимодействия по системе АВ0 необходимо либо подобрать антирезусную сыворотку соответствующей пациенту группы крови, либо использовать антирезусную сыворотку АВ(IV) группы, не содержащую в себе агглютинины. Во-вторых, поскольку реакция взаимодействия между резус-фактором и антителами к нему протекает достаточно тяжело, для неё необходимо создавать особые условия: либо подогревание в виде термостатирования на водяной бане, либо использование веществ (33% раствор полиглюкина, 10% раствор желатина), создающих среду, облегчающую течение реакции. В противном случае взаимодействие просто не произойдёт.

Технически реакция может проводиться несколькими способами.

1. Лабораторный метод. На чашку Петри по горизонтали наносится три капли (по 0,1 мл) антирезусной сыворотки одной серии, под ними во второй горизонтальный ряд – три капли антирезусной сыворотки другой серии. В обе капли первого вертикального ряда вносится по 0,01 мл исследуемой крови, второго вертикального ряда – по 0,01 мл стандартных резус-положительных эритроцитов (это мера контроля активности сыворотки), третьего ‒ по 0,01 мл стандартных резус-отрицательных эритроцитов (контроль специфичности реакции). Чашку Петри закрывают и ставят на водяную баню при температуре 46-48°С. Через 10 минут учитывают результат реакции:

Резус положительный – агглютинация в первом и втором вертикальных рядах, в третьем – нет.

Резус отрицательный – агглютинация во втором вертикальном ряду, в первом и третьем – нет.

2. Экспресс-метод. В центрифужную пробирку вносится капля стандартного универсального реагента (антирезусная сыворотка АВ(IV) группы, разведённая в 33% растворе полиглюкина). Добавляется капля исследуемой крови и содержимое пробирки плавными вращательными движениями размазывается по её стенкам. Через 3 минуты учитываются результаты. Наличие агглютинации свидетельствует о положительном резусе исследуемой крови, отсутствие агглютинации – об отрицательном.

Определение резус-принадлежности с помощью моноклональных антител. Необходимое для данной процедуры оснащение включает в себя цоликлон анти-D, исследуемую кровь, эмалированный планшет, иглы, пипетки, стеклянные палочки. Реакцию проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.

В лунку планшета наносится капля объёмом 0,1 мл цоликлона анти-D и добавляется 0,01 мл исследуемой крови, производится осторожное перемешивание стеклянными палочками. Через 3 минуты производится учёт результатов. При положительной реакции в лунке в виде образования красных зернышек кровь пациента резус-положительна, при отрицательной реакции (капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет) – кровь резус-отрицательна.