Тец руководство. Руководство к практаческим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии под редакцией

• Название: Руководство к практаческим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии под редакцией
• Анкор: Тец руководство.doc
• Дата: 28.01.2017
• Размер: 2.14 Mb.
• Имя файла: Тец руководство.doc
• Тип: Руководство; #290
• страница: 19 из 20

Тема 21.1. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВИРУСНЫХ ПОРАЖЕНИЙ КОЖИ, СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК, ЛИМФОИДНОЙ И ЖЕЛЕЗИСТЫХ ТКАНЕЙ

План

Программа

Биологические свойства возбудителей вирусных ин­фекций кожных покровов и желез, их патогенность, экология, особенность инфекций и эпидемиология вызываемых заболеваний.

Микробиологическая диагностика.

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

Демонстрация

Культура фибробластов человека, зараженных виру­сом простого герпеса (окраска по методу Романовско­го— Гимзы).

Вирус простого герпеса 2-го типа в клетках цилинд­рического эпителия мочеиспускательного канала (ок­раска по методу Романовского—Гимзы).

Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

А Задания студентам

Указать материал для исследования при подозрении на вирусную инфекцию кожных покровов и желез.

Ознакомиться с бланками-направлениями на исследо­вание материала в вирусологическую лабораторию.

Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профилактическими препаратами, указать механизм действия.

Методические указания

• Микробиологическая диагностика эпидемического паротита

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: смывы из носоглотки (первые дни болезни), слюна, отделяемое из области околоушного (стенонова) протока, кровь, моча, спинномозговая жид­кость (при менингите), биоптат пораженных органов.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусоскопическое исследование. Вирусы в исследуемом ма­териале (слюне, отделяемом околоушного протока, моче, спин­номозговой жидкости) могут быть обнаружены методом элек­тронной микроскопии. Необходимо помнить, что метод обла­дает сравнительно низкой чувствительностью и не позволяет дифференцировать между собой разных представителей семей­ства Paramyxoviridae.

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики эпидемического паротита. Вирус паротита легко удается культивировать в клеточных культурах приматов, а также в куриных эмбрионах. Наиболее часто для выделения вируса используют первичные культуры клеток почки макаки-резус. Индикацию вируса производят по характерному ЦПД (появление гигантских многоядерных клеток), которое обычно развивается в течение 1-й недели, а также на основании реак­ции гемадсорбции, которая становится положительной в более ранние сроки — до появления ЦПД. Для идентификации ис­пользуют методы ИФ, РТГА, РСК, РН и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в клетках зараженной куль­туры.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках но­соглоточных смывов, секрета околоушного протока, осадка мочи, спинномозговой жидкости может быть выявлено мето­дом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследу­емом материале может быть выявлено с помощью чувствитель­ных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в крови используется для подтверждения диа­гноза эпидемического паротита. Наличие антител в крови оп­ределяют с помощью различных серологических реакций, включая РТГА, РСК, ИФА, непрямой ИФ и др. Серодиагнос­тику осуществляют методом парных сывороток (диагностичес­кое значение имеет нарастание титра антител в поздней сыво­ротке не менее чем в 4 раза) или на основании выявления методом ИФА специфических противовирусных иммуноглобу­линов класса М (IgM), свидетельствующих об активной инфек­ции.

В различные периоды заболевания в крови пациентов появляются антитела к разным антигенам вируса паротита. В на­чале болезни присутствуют преимущественно антитела к S-антигену нуклеопротеида, которые можно выявить в РСК. Титр этих антител постепенно снижается к концу заболевания. Через 2—3 нед появляются антитела к V-антигену (гемагглю-тинин суперкапсида), которые выявляют в РТГА. Вируснейт-рализующие антитела, определяемые в РН, присутствуют в период реконвалесценции, а также в крови вакцинированных лиц.

• Микробиологическая диагностика кори

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, отделяемое, смывы из носоглотки, конъюнктивы, моча; спинномозговая жидкость, биоптат тканей ЦНС (при поражении ЦНС).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Исследуемый материал (смы­вы из носоглотки, конъюнктивы, мочу, спинномозговую жид­кость) центрифугируют, из осадка, содержащего слущенные клетки, готовят мазки и окрашивают по методу Романовско­го— Гимзы. В положительном случае удается обнаружить при­знаки ЦПД — гигантские многоядерные клетки, часто содер­жащие внутрицитоплазматические включения. На поздних ста­диях заболевания типично появление внутриядерных включе­ний. Метод обладает низкой чувствительностью и специфич­ностью.

Вирусологическое исследование. Вирус кори с трудом удается культивировать in vitro, поэтому выделение чистой культуры возбудителя из исследуемого материала редко применяют с диагностической целью. Для заражения используют первичные культуры эмбриональных клеток почки человека или обезьян. Признаки ЦПД (см. выше) появляются не ранее чем через 2 нед. Ведущим методом идентификации выделенного вируса являет­ся реакция ИФ с противокоревыми флюоресцирующими анти­телами, позволяющая обнаружить вирусные антигены в клет­ках зараженной культуры.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вируса в клетках иссле­дуемого материала (носоглоточных смывах, осадке мочи, спин­номозговой жидкости) выявляют методом ИФ. В положитель­ном случае в цитоплазме зараженных клеток, обработанных противокоревыми флюоресцирующими антителами, наблюда­ется специфическое свечение в виде мелкой зернистости или крупных флюоресцирующих телец. Присутствие вирусных бел­ков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Наличие противокоревых антител в крови и спинномозговой жидкости определяют с помощью различ­ных серологических реакций, включая РТГА, РСК, ИФА, не­прямой ИФ и др. Последние 2 являются наиболее чувствитель­ными. Серодиагностику осуществляют методом парных сыво­роток. Нарастание титра антител в поздней сыворотке не менее чем в 4 раза позволяет подтвердить диагноз. В первые дни болезни в крови определяют наличие специфических противо­вирусных иммуноглобулинов класса М (IgM) с помощью ИФА. Присутствие последних свидетельствует об активной инфек­ции. Серодиагностику применяют также для оценки эффек­тивности иммунизации.

• Микробиологическая диагностика краснухи

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь; мазки, отде­ляемое, смывы из носоглотки и конъюнктивы, моча, испраж­нения, синовиальная жидкость, грудное молоко, отделяемое матки, спинномозговая жидкость (при поражении ЦНС).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Вирусологическое исследование. Вирус краснухи плохо реп­родуцируется in vitro и не оказывает видимого ЦПД, поэтому выделение чистой культуры возбудителя из исследуемого ма­териала редко применяют с диагностической целью. Основным показанием является внутриутробная инфекция плода. Для за­ражения используют первичные культуры клеток почки афри­канской зеленой мартышки. О присутствии вируса судят по его способности подавлять ЦПД вируса ЕСНО-11 вследствие интерференции.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вируса в клетках иссле­дуемого материала (мазках из носоглотки, осадке мочи и др.) выявляют методом ИФ. В положительном случае в цитоплазме зараженных клеток, обработанных противокраснушными флю­оресцирующими антителами, наблюдается специфическое све­чение. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуе­мом материале может быть выявлено с помощью чувствитель­ных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнару­живают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является оптимальным методом лабора­торной диагностики краснухи. Диагноз ставят на основании выявления (методом ИФА) специфических противовирусных

иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об ак­тивной инфекции. Присутствие последних в крови новорож­денных является показателем внутриутробного заражения. Че­тырехкратное нарастание титра специфических антител, выяв­ляемое методом парных сывороток, позволяет подтвердить не­давно перенесенное заболевание. Наличие противокраснуш-ных антител в крови и спинномозговой жидкости определя­ют с помощью различных серологических реакций, включая РТГА, РСК, ИФА, непрямой ИФ и др. Серодиагностику при­меняют также для оценки активности специфического им­мунитета при беременности.

• Микробиологическая диагностика ящура

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (афт), мазки, соскобы с пораженных участ­ков кожи и слизистых оболочек.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Биопроба. Материал вводят морским свинкам.

Серодиагностика. Для подтверждения клинического диагно­за применяют метод парных сывороток. Антитела выявляют в РСК, РТГА.

• Микробиологическая диагностика натуральной оспы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В препаратах из исследуемого материала (мазки, соскобы, биоптаты) в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие базофиль-ных включений (телец Гварниери), имеющих округлую или серповидную форму и располагающихся в околоядерной зоне цитоплазмы.

Вирусоскопическое исследование. Вирусы в исследуемом ма­териале (отделяемом высыпных элементов, мазках, соскобах, биоптатах) могут быть обнаружены методом электронной мик­роскопии. Методом негативного контрастирования в препаратах выявляют крупные (до 300 нм) вирионы овальной или прямо­угольной формы, покрытые внешней оболочкой. На поверхности вирусной частицы отчетливо видны непараллельно расположен­ные микротубулы. Необходимо помнить, что метод не позволяет дифференцировать вирус натуральной оспы от других предста­вителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.).

Вирусологическое исследование. Для выделения чистой куль­туры вируса натуральной оспы из исследуемого материала применяют различные типы однослойных клеточных культур при­матов (Vero, эмбриональные диплоидные клетки человека, пер­вичные культуры клеток почки обезьян и др.), а также куриные эмбрионы. Индикацию вируса производят по ЦПД, которое обычно развивается на 2—3-й день. Характерно появление очагов избыточного роста клеток, приводящего к образованию бляшек диаметром 1—3 мм, изменение формы (округление) клеток с последующей дегенерацией и слущиванием монослоя. В зараженных клетках выявляются характерные включения (см. выше). Для индикации применяют также реакцию гемад-сорбции. При заражении куриных эмбрионов материал нано­сят на поверхность хорион-аллантоисной оболочки. В положи­тельном случае через 72 ч наблюдается появление характерных беловатых непрозрачных выпуклых бляшек (оспин), имеющих диаметр 1 мм, правильную округлую форму, ровные края и гладкую поверхность, без кровоизлияний. Для идентификации используют методы ИФ, РТГА, ИФА, РИА, РН и др., позво­ляющие обнаружить вирусные антигены в зараженной куль­туре.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках маз­ков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом ма­териале может быть выявлено с помощью чувствительных се­рологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные НК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Обнаружение специфических противови­русных антител в крови используется для подтверждения диа­гноза натуральной оспы. Наличие антител в крови определяют с помощью различных серологических реакций, включая РТГА, РН, ИФА, РИА и др. Необходимо иметь в виду, что методы серодиагностики не позволяют дифференцировать вирус нату­ральной оспы от других представителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.) по причине их антигенного сходства.

• Микробиологическая диагностика оспы обезьян

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из вы­сыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Лабораторная диагностика оспы обезьян проводится анало­гично диагностике натуральной оспы (см. выше). Главным методом, позволяющим дифференцировать возбудителей, является вирусологическое исследование. Основой является ха­рактер ЦПД: типично образование бляшек более крупных раз­меров (2—6 мм), наличие цитоплазматических мостиков между зараженными клетками, присутствие особых эозинофильных включений в цитоплазме, представляющих собой скопления вирусных белков, быстрая дегенерация клеточного пласта.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пора­женных участков кожи.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Гистологическое исследование. В гистологических препара­тах из исследуемого материала в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие характерных эо­зинофильных включений (телец моллюска) в цитоплазме эпи­телиальных клеток.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Вирусные НК в исследуе­мом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных ви­русами простого герпеса 1-го и 2-го типов (HSV-l, HSV-2)

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высып­ных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы, отделяемое с пораженных слизистых оболочек, конъюнктивы; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС); кровь, моча (при висцеральной и генерализованной формах).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В поло­жительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпи­телиальных клетках — наличие гигантских многоядерных кле­ток, вакуолизация цитоплазмы, изменения ядра — увеличение и слияние ядер между собой, фрагментация и агрегация хро­матина, уплотнение кариолеммы, часто присутствуют внутри­ядерные включения (тельца Каудри). Метод обладает сравни­тельно низкой специфичностью и используется как ориенти­ровочный.

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики герпетической инфекции. Вирусы простого гер­песа легко удается культивировать в клеточных культурах при­матов (HeLa, эмбриональные фибробласты человека, клетки почек кролика и др.), а также в куриных эмбрионах. Индикацию вируса производят по характерному ЦПД (см. выше), которое обычно развивается на 1—3-й день и впоследствии приводит к дегенерации и слущиванию монослоя. Для иден­тификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в клетках зараженной культу­ры. Основным методом, дающим возможность дифференциро­вать вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типа между собой, является рестрикционный анализ ДНК-фрагментов генома, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические и биохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (анти­генов) в исследуемом материале может быть выявлено с помо­щью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др. Присутствие вирусспецифических ферментов (тимидин-кина-зы и др.) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью соответствующих биохимических реакций.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является информативной только при первичной герпетической инфекции, поскольку даже суще­ственное нарастание титра антител в крови не всегда сопро­вождается развитием рецидива заболевания. Метод применя­ют преимущественно для эпидемиологического анализа. Ис­ключение составляют случаи герпетического энцефалита, когда высокие титры противовирусных антител в спинномозговой жидкости являются косвенным признаком инфекции ЦНС. Наличие антител в крови и спинномозговой жидкости (при поражениях ЦНС) определяют с помощью различных сероло­гических реакций, включая РСК, РН, ИФА, РИА, непрямой ИФ и др.

• Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясы­вающего лишая

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высып­ных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы из носоглотки; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В поло­жительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпи­телиальных клетках, аналогичные ЦПД вирусов простого герпеса (см. выше). Метод обладает сравнительно низкой специ­фичностью и используется как ориентировочный.

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала применяется редко, что оп­ределяется его нестабильностью (легко инактивируется при транспортировке) и низкой скоростью репродукции in vitro. Вирус удается культивировать в культурах эмбриональных фиб-робластов человека. Признаки ЦПД появляются не ранее чем через 10 дней и сходны с ЦПД вирусов простого герпеса (см. выше). Для идентификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в заражен­ной культуре, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материа­ле может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнару­живают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Антитела в крови обычно присутствуют в низком титре. Для их выявления применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Диагноз ста­вят на основании выявления специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об ак­тивной инфекции. Присутствие последних в крови новорож­денных является показателем внутриутробного заражения. Че­тырехкратное нарастание титра специфических антител, выяв­ляемое методом парных сывороток, свидетельствует о рецидиве (опоясывающем лишае).

• Микробиологическая диагностика цитомегаловирусной ин­фекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, моча, слюна и другие секреты, испражнения, мокрота, биоптат пораженного органа; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. Мазки из исследуемого мате­риала окрашивают по методу Романовского—Гимзы, Папани-колау или гематоксилин-эозином. В положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД — присутствие увеличен­ных "цитомегалических клеток", имеющих гигантские размеры (до 30 мм), содержащих плотное базофильное внутриядерное включение ("совиный глаз").

Вирусологическое исследование. Выделение чистой культуры

330

вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики цитомегаловирусной инфекции. Вирус удается культивировать в культурах диплоидных эмбриональных фиб-робластов человека. При низком содержании возбудителя в материале признаки ЦПД (см. выше) могут появляться только через 4—6 нед. Поэтому для заражения обычно применяют метод "амплификации в культуре": исследуемый материал центрифугируют совместно с клетками культуры. При этом вирусные частицы оседают на поверхность клеточных мем­бран, и заражение происходит более эффективно. На 3-й день после заражения в клетках культуры определяют присутствие сверхранних и ранних вирусных антигенов методом ИФ. Для идентификации используют также ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках ис­следуемого материала может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материа­ле может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Является информативной только при пер­вичной цитомегаловирусной инфекции, поскольку даже суще­ственное нарастание титра антител в крови не всегда сопро­вождается развитием рецидива заболевания.

• Микробиологическая диагностика внезапной экзантемы

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие белков (антигенов) вирусов-возбудителей (HHV-6, HHV-1) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических ре­акций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Наличие специфических противовирусных IgM, выявляемых методом ИФА, свидетельствует об активной инфекции.

• Микробиологическая диагностика инфекционного мононуклеоза

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В мазках крови при инфекци­онном мононуклеозе обнаруживают атипичные лимфоциты (не менее 10 %), которые являются наиболее ранними маркерами этой инфекции. Атипичные лимфоциты могут присутствовать в крови и при других заболеваниях, но в значительно меньшем количестве.

Вирусологическое исследование. Применяют редко в связи со сложностью культивирования. Чистую культуру вируса Эпш-тейна—Барр выделяют из исследуемого материала путем зара­жения первичных культур В-лимфоцитов, полученных из пу­почного канатика. С целью идентификации в клетках культуры определяют присутствие вирусспецифических антигенов мето­дом ИФ. Для идентификации используют также рестрикцион-ный анализ, ПЦР и метод ДНК-зондов.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса Эпштейна— Барр в клетках крови может быть выявлено методом ИФ.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обна­руживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Для инфекционного мононуклеоза харак­терно появление "гетерофильных" антител. Наиболее часто с диагностической целью определяют наличие антител к антиге­нам бычьих и бараньих эритроцитов (диагностический титр в РА 1:64). Для выявления противовирусных антител к антигенам капсида (УСА) и неструктурным раннему (ЕЛ) и ядерному (EBNA) антигенам применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Для острой инфекции харак­терно наличие антител к VCA (IgM). Антитела к EBNA свиде­тельствуют о перенесенной и хронической латентной инфек­ции. В период реактивации вируса в крови присутствуют анти­тела всех трех типов.

• Микробиологическая диагностика аденовирусной инфекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, моча, мазки или смывы с конъюнктивы, носоглотки, мокрота, желчь, био-птат пораженного органа.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование (см. главу 18).

Вирусологическое исследование. Для выделения чистой куль­туры вируса из исследуемого материала применяют клеточные культуры эпителиального происхождения (первичные культуры эмбриональных клеток почки человека, перевиваемые линии HeLa, НЕр-2 и др.). Индикацию вируса производят по ЦПД, которое развивается в среднем через 6 дней и проявляется образованием внутриядерных включений и дегенерацией зара­женных клеток. Для идентификации и типирования использу­ют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирус­ные антигены в зараженной культуре, а также ПЦР и метод ДНК-зондов. Необходимо помнить, что аденовирусы способны к бессимптомной персистенции в организме, поэтому диагнос­тическое значение имеет присутствие вируса только в материа­ле из пораженного органа.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вируса в клетках иссле­дуемого материала может быть выявлено методом ИФ. При­сутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом матери­але может быть выявлено с помощью чувствительных сероло­гических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнару­живают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Наличие типоспецифических противоаде-новирусных антител в крови определяют с помощью различных серологических реакций, включая РСК, РТГА, РН, ИФА и др. Серодиагностику осуществляют методом парных сывороток и применяют преимущественно для ретроспективного подтверж­дения диагноза. Диагностическое значение имеет нарастание титра специфических противовирусных антител в поздней сы­воротке не менее чем в 4 раза.

• Микробиологическая диагностика парвовирусной инфекции

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, носоглоточ­ные смывы.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические ис­следования. Присутствие антигенов вирусных частиц в ис­следуемом материале может быть выявлено методом ИЭМ (см. главу 11). Присутствие вирусных белков (антигенов) в иссле­дуемом материале может быть выявлено с помощью чувстви­тельных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Ви­русную ДНК в исследуемом материале обнаруживают с помо­щью ПЦР или метода ДНК-зондов.

Серодиагностика. Наличие специфических противовирусных IgM, выявляемых методом ИФА, свидетельствует об активной инфекции.

• Микробиологическая диагностика инфекции, вызванной ви­
русом ВК

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, моча.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Цитологическое исследование. В осадке мочи присутствуют измененные клетки с признаками ЦПД (увеличение клеток, наличие одиночных базофильных внутриядерных включе­ний).

Вирусоскопическое исследование. Зрелые вирусные частицы в моче и в зараженных клетках могут быть обнаружены мето­дом электронной микроскопии.

Вирусологическое исследование. Выделение BKV из крови и мочи осуществляют путем заражения клеточных культур чело­веческого и животного происхождения.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования .Иммунохимические ис­следования. Присутствие вирусных белков (антигенов) в ис­следуемом материале может быть выявлено с помощью чувст­вительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.

Молекулярно-биологические исследования. Вирус­ные ДНК в зараженных клетках обнаруживают методом ДНК-зондов (ДНК-гибридизации in situ), ПЦР.

Серодиагностика. Обнаружение антител к вирусным белкам является малоинформативным, поскольку антитела присутст­вуют также у здоровых вирусоносителей.

• Диагностические, профилактические и лечебные препараты

Живая ослабленная паротитная вакцина. Содержит аттенуи-рованный штамм вируса паротита. Применяют для специфи­ческой профилактики эпидемического паротита. Вводят парен­терально детям в возрасте 12—15 мес.

Живая ослабленная коревая вакцина. Содержит аттенуиро-ванный штамм вируса кори. Применяют для специфической профилактики кори. Вводят парентерально детям в возрасте 12—15 мес.

Иммуноглобулин человеческий противокоревой. Получают из крови серопозитивных здоровых доноров. Применяют для со­здания пассивного иммунитета с целью экстренной профи­лактики кори при контакте.

Живая ослабленная краснушная вакцина. Содержит аттенуи-рованный штамм вируса краснухи. Применяют для специфи­ческой профилактики краснухи. Вводят парентерально детям в возрасте 12—15 мес.

Иммуноглобулин нормальный человеческий. Получают путем фракционирования крови здоровых доноров. Неспецифичес­кий препарат, содержащий антитела различной специфичности. Применяют для создания пассивного иммунитета с целью экстренной профилактики паротита, кори, краснухи при кон­такте.

Вакцина ящура. Применяют для специфической профилак­тики ящура у сельскохозяйственных животных.

Осповакцина. Содержит вирус осповакцины. Применяют для специфической профилактики натуральной оспы. С 1980 г. обязательная вакцинация отменена.

Живая ослабленная пероральная аденовирусная вакцина. Со­держит аттенуированные штаммы аденовирусов серотипов 4 и 7. Применяют в ряде стран для специфической профилактики аденовирусной пневмонии у новобранцев.

Инактивированная культуральная вакцина против вирусов простого герпеса. Применяют для специфической профилакти­ки рецидивов простого герпеса.

Живая ослабленная вакцина против ветряной оспы. Содержит аттенуированный штамм вируса ветряной оспы/опоясывающе­го лишая. Применяют в ряде стран для специфической про­филактики ветряной оспы.

Иммуноглобулин человеческий против ветряной оспы. Полу­чают из крови серопозитивных здоровых доноров. Применяют для создания пассивного иммунитета с целью экстренной про­филактики ветряной оспы при контакте.

Противовирусные препараты. Интерферон человеческий лей­коцитарный; интерферон рекомбинантный; неовир и другие индукторы интерферона. Применяют для создания пассивно­го иммунитета с целью экстренной профилактики рецидивов и лечения герпесвирусных инфекций.

Ацикловир и его производные, цидофовир, аденозин-ара-бинозид, трифлюридин, ганцикловир, тромантадин, фоскар-нет. Применяют для профилактики рецидивов и лечения гер­песвирусных инфекций.

Глава 22

ОНКОГЕННЫЕ ВИРУСЫ И ВИРУСЫ ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА (ВИЧ)

Онкогенные вирусы представляют собой группу неродствен­ных вирусов (табл. 22.1), способных вызывать персистирующую инфекцию в клетках организма человека, приводящую к их трансформации (иммортализации). Трансформированные клетки приобретают новые свойства — высокую скорость размножения, способность к бесконтрольному неограниченному делению, ут­рачивают чувствительность к сигналам, ингибирующим размно­жение, включая контактное ингибирование. Происходит измене­ние их морфологии и метаболизма. Появление трансформиро-

\**« A/ Название вируса Вызываемые заболевания СЕМЕЙСТВО Papovaviridae РОД Papillomavirus НРУ-16, ЯРК-18 и др. Доброкачественные папилломы различных локализаций, опу­холи кожи и слизистых оболо­чек верхних дыхательных пу­тей, гениталий (рак шейки матки) РОД Poliomavirus вирус ВК (BKV) Поражения почек (см. также главу 21) вирус JC (JCV) Мультифокальная прогресси­рующая лейкоэнцефалопатия (см. также главу 19) СЕМЕЙСТВО Herpesviridae ПОДСЕМЕЙСТВО Gammaherpesvirinae РОД Lymphocryptovims вирус Эпштейна— Барр (EBV) Т-клеточные лейкозы/лимфо-мы, эндемическая лимфома Беркитта, карцинома носоглотк РОД Rhadinovirus герпесвирус человека 8-го типа Саркома Капоши (ЯЯК-8) СЕМЕЙСТВО Hepadnaviridae вирус гепатита В (HBV) Гепатоцеллюлярная карцинома СЕМЕЙСТВО Retroviridae РОД Deltaretrovirus Т-лимфотропные вирусы че- Острый Т-клеточный лимфо-ловека типов 1, 2, 5 (HTLV-1, цитарный лейкоз/лимфома, HTLV-2, HTLV-5) тропический спастический паралич (см. также главу 19) РОД Lentivirus вирусы иммунодефицита че- ВИЧ-инфекция/Синдром при-ловека (ВИЧ) 1-го, 2-го типа обретенного иммунодефицита (Я/К-1, HIV-2) (ВИЧ/СПИД)

зистых оболочек, преимущественно респираторного и гени-тального тракта. HPVявляются возбудителями доброкачествен­ных разрастаний — папиллом (бородавок) ладоней и ступней (чаще HPVтипов 1, 2, 3, 4), ротовой полости и гортани (чаще HPV6 и 11-го типов), наружных половых органов — candyloma acuminatum (HPV 6, 11, 42—44-го типов). С ЯРК-инфекцией также связывают развитие ряда злокачественных новообразо­ваний: плоскоклеточного рака кожи, кератокарциномы, мела-номы — в клетках этих опухолей в некоторых случаях удается обнаружить HPV типов 37, 38, 41 и 48, интраэпителиальные неоплазии генитального тракта (шейки матки, вульвы, полово­го члена) ассоциированы преимущественно с HPV типов 6, 11, 16 и 18. Наиболее высоко онкогенными являются HPV типов 16 и 18. Эти вирусы в 90—100 % случаев обнаруживаются в опухолевых клетках при карциноме шейки матки и выявляются при раке прямой кишки и карциноме носоглотки и гортани.

Полиомавирусы вызывают опухоли у лабораторных живот­ных. У человека представители этого рода — вирусы ВК (BKV) и JC (JCV) — вызывают пожизненную бессимптомную латент­ную персистирующую инфекцию. Заболевания развиваются только на фоне иммунодефицита. BKV является возбудителем геморрагического цистита (см. главу 21). JCV вызывает разви­тие медленной инфекции — мультифокальной лейкоэнцефало-патии (см. главу 19).

Вирус Эпштейна—Барр является возбудителем инфекцион­ного мононуклеоза (см. главу 21) и вызывает пожизненную бессимптомную латентную инфекцию, персистируя в незрелых В-лимфоцитах. Латентная инфекция сопровождается транс­формацией В-лимфоцитов. При недостаточном защитном кле­точном иммунитете бесконтрольная пролиферация трансфор­мированных В-лимфоцитов может привести к развитию зло­качественной опухоли — лимфомы. Специальная лабораторная диагностика не проводится.

Герпесвирус человека 8-го типа (HHV-8) вызывает пожиз­ненную бессимптомную латентную инфекцию. С его реак­тивацией на фоне иммунодефицита (СПИД, возраст старше 60 лет) связывают развитие сосудистой опухоли — ангиосар-комы Капоши. Специальная лабораторная диагностика не проводится.

Вирус гепатита В является возбудителем вирусного гепатита В (см. главу 20). В случае хронической активной формы забо­левания через 10—35 лет может развиться первичный рак пе­чени. Более чем в 80 % случаев в опухолевых клетках обнару­живают дефектные провирусы. Специальная лабораторная диа­гностика не проводится.

Среди онкогенных ретровирусов связь с опухолями человека установлена только для Т-лимфотропного вируса человека 1-го типа — HTL V-1. Вирус вызывает пожизненную бессимптомную латентную инфекцию, персистируя в Т-лимфоцитах хелперах (CD4⁺). Заболевания — острый Т-клеточный лимфоцитарный лейкоз/лимфома или тропический спастический паралич — развивается менее чем в 5 % случаев и имеет длительный инкубационный период.

Вирусы иммунодефицита человека 1-го и 2-го типа (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) являются возбудителями медленной инфекции с длительным инкубационным (латентным) периодом от 3 до 10 лет и более. Первичная инфекция может протекать бес­симптомно или с неспецифическими гриппоподобными про­явлениями. После длительного латентного периода у ВИЧ-ин­фицированных лиц развивается синдром приобретенного им­мунодефицита (СПИД), который характеризуется снижением содержания в крови CD4⁺ Т-лимфоцитов (менее 500/мм³) и разнообразными клиническими проявлениями, включая СПИД-ассоциированные оппортунистические инфекции и опухоли. Для предотвращения распространения и своевременного нача­ла лечения первостепенное значение имеет ранняя диагностика ВИЧ-инфекции. В общей стратегии лабораторного обследова­ния с целью выявления ВИЧ/СПИД существуют следующие направления: обследование больных с клинической картиной СПИД или СПИД-ассоциированных заболеваний (оппортунис­тических инфекций и опухолей); обследование здоровых лиц, контактировавших с больными (половые контакты, мать—ре­бенок и др.); обследование беременных, рожениц и лиц при плановой госпитализации; анонимное обследование всех же­лающих. Строго обязательным является обследование доноров крови, спермы, костного мозга и других с целью выявления потенциальных источников инфекции и предотвращения ят-рогенного заражения.