Рководство по туберкулезу. Стратегия и организация национальной программы по контролю над туберкулезом в республике казахстан 1 Цель контроля над туберкулезом в рк
 Скачать 1.83 Mb.
|
|
3.8.1 Определение теста на лекарственную чувствительность к ПТП Существуют 2 метода определения теста на лекарственную чувствительность (ТЛЧ) к ПТП:
3.8.1.1 Метод абсолютных концентраций на плотных средах для определения чувствительности к ПТП первого ряда В соответствии с критериями устойчивости в опытах по её изучению рекомендуется пользоваться следующими концентрациями туберкулостатических препаратов: Используемые концентрации антибактериальных препаратов 1 линии:
32  Таблица 5 - Критерии устойчивости микобактерий туберкулёза к ПТП
Таблица 6 - Активность чистых лекарств ( мкг активной субстанции на мг веса продукта)
Активность лекарства варьирует от одной партии/серии лекарств к другой. Эти важные сведения обычно приводятся на этикетках контейнеров лекарств, упаковках или их можно получить от компании-изготовителя. 3.8.1.2 Метод пропорций на плотных средах для определения чувствительности к основным ПТП Метод пропорций широко используется в мире. Для выполнения этого метода используется среда Левенштейна-Йенсена (Л-Й), и устойчивость тестируемых штаммов определяется отношением числа колоний выросших на среде с лекарствами к числу колоний, выросших на среде без лекарств. Этот показатель позволяет определить наличие устойчивых мутантов в общей популяции жизнеспособных колониеобразующих единиц. Для получения подсчитываемого числа колоний, выросших на среде Л-Й, рекомендуется посев 2 разведений. Преимущество данного метода в том, что в исследовании используется стандартный инокулят и можно подсчитать число колоний, выросших на Л-Й. Приготовление питательной среды с лекарствами Большую важность для получения точных результатов ТЛЧ представляет приготовление среды, содержащей лекарственный препарат. Ниже приведены критические концентрации лекарственных препаратов в среде Л-Й: Изониазид 0,2 мкг/мл Стрептомицин 4 мкг/мл Рифампицин 40 мкг/мл Этамбутол 2 мкг/мл При приготовлении среды с препаратами необходимо учитывать активность препарата, которая может варьировать от одной партии/серии лекарств к другой и в зависимости от его производителя. Эти сведения приводятся на этикетках контейнеров, упаковках или предоставляются компанией-изготовителем. 33  Изониазид:Содержание активного вещества 1000 мкг/мл 1) Приготовление растворов лекарственных препаратов:
Стрептомицин: Содержание активного вещества 780 - 800 мкг/мг Процедура приготовления среды с 4 мкг/мл (чистое вещество 780мкг/мг)
Рифампицин: Содержание активного вещества 1,000 мкг/мл
Этамбутол: Содержание активного вещества 1,000 мкг/мл Приготовление раствора лекарственного препарата:
Приготовление бактериальной суспензии Выросшую культуру микобактерий снимают с питательной среды Л-Й с помощью металлической петли и помещают в пробирку с 5-6 стеклянными бусами. При использовании металлической петли в пробирку внести предварительно 2 капли стерильной дистиллированной воды. Пробирку с бактериальной массой гомогенизируют в течение 1-2 минут на встряхивателе "Vortex", затем добавляют 7 мл дистиллированной воды и снова осторожно встряхивают до образования однородного раствора Полученную суспензию оставляют на 1-3 минуты до осаждения крупных частиц. Затем гомогенную взвесь (верхнюю часть суспензии) собирают и переносят в сте- 34  рильную пробирку. Мутность гомогенной взвеси сравнивают со стандартом Мак-Фар ланда №1, постепенно добавляя дистиллированную воду до тех пор, пока густота взвеси не сравняется с густотой стандарта. Полученная суспензия называется рабочей суспензией". В дальнейшем из рабочей суспензии готовятся последовательные десятикратные разведения: 10-1; 10-2; 10-3; и 10-4 тля каждой суспензии используются разные 1мл градуированные пипетки). Посев бактериальной суспензии:
Пробирки в термостате хранят в наклонном положении с неплотно прикрытыми крышками при температуре 370 С, до появления видимого роста на среде без лекарств, после чего в течение 4-6 недель с закупоренными пробками. Интерпретация результатов Критерием устойчивости является 1 % роста бактериальной популяции для всех этих препаратов. Через 4 недели инкубации, рост на среде, не содержащей лекарства, ;шокулированной из суспензии 10-4 сравнивают с ростом на среде с препаратом, ;гнокулированной из суспензии 10-2. Если число колоний больше на среде, содержа-шей лекарство, тестируемый штамм считается устойчивым. Так как отношение 10-2 и 10-4 является как 1:100, то следующая формула может использоваться для подсчета % устойчивости: Число колоний на среде с лекарствами в разведении 1Q-2 = % устойчивости Число колоний на среде без лекарств в разведении 10-4 Если рост бактерий на питательной среде, содержащей лекарство, превышает 1%, штамм считается устойчивым. 3.9 Контроль качества работы бактериологических лабораторий 3.9.1 Внутренний контроль качества бактериологической лаборатории направлен на: размещение лаборатории и организацию работы; лабораторное оборудование; качество материала; обработку материала; качество, годность и количество реагентов; методика и процедура посева; регистрация анализов и выдача результатов. Внутренний контроль качества - это ответственность всего персонала лаборатории! 3.9.1.1 Размещение лаборатории и организация работы:
 35
3.9.1.2 Лабораторное оборудование:
3.9.1.2.1 Биологический шкаф безопасности:
3.9.1.2.2 Центрифуги Каждые 6 месяцев необходимо проверять щетки в электродвигателях. 3.9.1.2.3 Инкубатор Регистрировать температуру в термостате ежедневно. Необходимо проверять разницу температур внутри термостата на различных уровнях. 3.9.1.2.4 Свертыватель Ежедневно проверять температуру. После каждой партии сред тщательно обрабатывать свертыватель. 3.9.1.2.5 Водяная баня Контролировать температуру до и во время использования. Ежемесячно производить тщательную обработку и чистку. 3.9.1.2.6 Холодильник (2-8°С): Ежедневно контролировать температуру. Ежемесячно проводить обработку, каждые 3 месяца удалять лед из морозильной камеры. 3.9.1.2.7 Морозильник Ежедневно проверять температуру, чистить раз в 6 месяцев. 3.9.1.2.9 Стеклянная лабораторная посуда Не использовать потускневшую и треснувшую посуду. Стерильную посуду хранить не более 3 недель. 3.9.2 Диагностический материал и направление на анализ: 36  ■--.о
3.9.3 Реагенты и красители На всех флаконах с реагентами должны быть проставлены даты получения и даты открытия нового флакона. Любой реактив неудовлетворительного качества немедленно выбрасывается и в списке имеющихся реагентов делается соответствующая запись. Необходимо контролировать оборот запасов на складе (первыми использовать те реактивы и красители, срок годности которых подходит к концу). Необходимо регистрировать дату приготовления свежеприготовленных реактивов и красителей на флаконах в соответствующем журнале. 3.9.4 Гомогенизация и деконтаминация:
3.9.4.1 Среды:
3.9.4.2 Тест на проверку ростовых качеств сред 37  Тестирование ростовых качеств каждой партии среды проводится с помощью стандартного тест-штамма, в качестве тест-штамма используют лабораторный (музейный) штамм H37Rv или "дикий" чувствительный штамм. Суспензия МБТ готовится по стандарту Me Farland-№1, затем ее разводят до 10 - 6 и засевают по 0,1 мл на питательную среду. Если на питательной среде наблюдается рост 50-100 колоний -качество среды хорошее.3.9.4.3 Посев Во избежание контаминирования с каждым анализом, используйте стерильную пипетку и строго следуйте всем рекомендациям. Если же материал (особенно мокрота) был доставлен в лабораторию через несколько дней, процент пророста составляет 5 - 10%. 4. ТУБЕРКУЛЕЗ ЛЕГКИХ 4.1 Методы выявления туберкулеза Случаи туберкулеза могут быть выявлены двумя способами:
Приоритет в контроле над туберкулезом должен быть отдан выявлению и лечению заразной формы заболевания. Пассивное выявление - выявление заболевания у лиц, обратившихся в медицинское учреждение (поликлиника, больница, диагностический центр, частные клиники и др.) с жалобами на кашель. В этом случае наиболее эффективным методом выявления туберкулеза является микроскопия мазка мокроты. Микроскопия мазков мокроты у больных с продолжительным кашлем (более 2 недель) является наиболее важным диагностическим тестом, позволяющим обнаружить наиболее опасные формы туберкулеза легких. У некоторых больных при наличии потери веса тела, лихорадки, болей в грудной клетке, кашель может отсутствовать. Но обязанностью врача является заподозрить туберкулез у таких пациентов и провести соответствующее диагностическое исследование. Активное выявление - выявление заболевания при профилактических флюорогора-фических обследованиях. В Казахстане этот метод используется для скрининга групп высокого риска. Но следует помнить, что диагностировать туберкулез с полной уверенностью только по данным рентгенологического обследования довольно трудно. Флюорография и рентгенография могут быть субъективными, а, следовательно, ошибочными, не исключается и фактор недостаточного качества. В любом случае, пациенты с рентгенологическими изменениями должны направляться на бактериоскопию мокроты, прежде чем им будет установлен диагноз. |
