Практикум по клин. диагностики. Учебные пособия для студентов высших учебных заведений
 Скачать 5.61 Mb.
|
|
Определение содержания каротина в сыворотке крови (по В. Фи Л. А. Кудрявцевой). В пробирку вносят мл сыворотки крови и 3 мл этилового спирта, тщательно смешивают стеклянной палочкой. Добавляют 6 мл петролейного эфира (или бензина, энергично встряхивают не менее мини осторожно приливают по стенке пробирки 0,5 мл дистиллированной воды, оставляют стоять до четкого разделения нической и водяной фаз. После этого осторожно сливают мл каротина и переносят в кювету в кюветах 1 см при синем против петролейного эфира (бензина) Одновременно колоримет- рируют рабочий стандартный раствор бихромата калия. Содержание каротина (X, мл) находят по формуле Х = Б где А — плотность пробы Б — стаадартного раствора для каротина в на 100 мл. Определение каротина (X, мг/л) проводят также по формуле Х = Б где Аи Б — тоже, что ив предыдущей формуле — коэффициент в игл Содержание каротина в сыворотке крови здоровых животных составляет мл у крупного рогатого со- у Количество каротина находится в пределах у крупного рогатого у кур Уменьшение содержания каротина в крови называют Недостаток каротина и витамина А служит одной из причин снижения организма, развития у молодняка диспепсии, бронхопневмонии, кератоконъюнктивита, отставания в росте у снижения продуктивности, аборта, задержания последа, субинволюции матки, нарушения половых циклов у быков-производителей — изменения у возникновения уродству поросят. З ан яти е 2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ФОСФОРА И МАГНИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Цель занятия. Научиться определять в крови количество общего кальция, неорганического фосфора и магния и давать клиническую оценку результатам исследования Материальное обеспечение микробю- ретка (на 2 мл, центрифужные пробирки бутылки, градуированные микропипетки и пипетки (на 0,1; 1,5 и 10 мл сыворотка Реактивы для определения кальция (готовят на и хранят в бутылках) 0,1 н раствор калия, индикаторная смесь (1 г и 100 г нитрата калия, 0,1 раствор трилона Ь (37,21 г Б и воды дол М раствор Б (1 мл М раствора трилона Б и воды до 100 мл стандартный раствор кальция (высушенный при в течение 24 ч химически чистый бонат кальция 2,497 г 8 мл соляной и воды дол, рабочий стандартный раствор кальция (1 мл основного раствора кальция и 9 мл воды, в 1 мл раствора мг кальция) Реактивы для фосфора раствор реактив на фосфор, который готовят смешиванием 500 мл раствора ванадата аммония (1,17 г ванадата аммония растворяют в 250 мл горячей дистиллированной воды, добавляют 14 мл соляной кислоты, охлаждают дои доводят водой до объема мл, 1000 млн соляной кислоты (205,7 мл ной соляной доводят дистиллированной водой до объема 1 ли мл раствора молибдата аммония (35,3 г молибдата аммония растворяют в л горячей дистиллированной охлаждают доком- натной температуры и дистиллированной водой до объема 1 реактив в темном прохладном месте не менее 3 основной стандартный раствор фосфора (4,394 г до постоянной массы в эксикаторе над серной и воды дол добавляют мл хранят в холодильнике до 1 года в 1 мл Заказ № 1227 177 1 фосфора рабочий (5 мл ос- стандартного раствора фосфора и воды до 100 мл; в 1 мл раствора содержится 0,05 мг для определения магния раствор поливинилового раствор титанового раствор титанового желтого (1 мл раствора титанового желтого и воды до 50 мл раствор гидроокиси натрия основной стандартный раствор (8,458 г и дистиллированной воды дол рабочий стандартный раствор магния (1 мл основного раствора магния и дистиллированной воды до 200 мл в 1 мл раствора мг магния). Определение содержания общего кальция в сыворотке крови (по Вичеву и В пробирку берут 1 млн. раствора гидроокиси калия и несколько крупинок индикаторной появляется бледно-розовая окраска. Если возникает зеленоватая флуоресценция (вследствие присутствия в растворе следов то титруют 0,001 М раствором трилона Б до появления бледно-розовой окраски. При добавлении 0,1 мл рабочего стандартного раствора кальция появляется зеленоватая флуоресценция. Титруют 0,001 М раствором трилона Б до бледно-розовой окраски. В пробирку вносят ОД мл испытуемой сыворотки крови. После появления флуоресценции титруют 0,001 М раствором трилона Б до ее исчезновения. Содержание кальция в сыворотке (X, мл) находят по формуле А Б где 0,001 М раствора трилона Б на вание сыворотки, мл Б — количество 0,001 М раствора трилона Б, израсходованное на рабочего стандартного раствора кальция, мл 0,01 личество кальция в 0,1 мл стандартного мг сыворотки, взятое для исследования, мл — коэффициент для перечисления количества кальция на 100 мл. Содержание кальция (X, ммоль/л) определяют также по муле А Л — — • • Б где Аи же, что ив предыдущей формуле 40,08 — относительная моле- масса кальция 1000 — коэффициент для пересчета. У взрослых здоровых животных количество общего кальция в сыворотке находится в следующих пределах (мг/100 у крупного рогатого овец — козу Для пересчета количества общего кальция в единицы СИ концентрацию вещества в мг мл умножают на ко 0,25. В норме количество общего кальция в сыворотке крови составляет (ммоль/л): у крупного рогатого коз лошадей сви- собаку кур Уменьшение количества общего кальция в сыворотке наблюдают при голодании, рахите, остеодистро- фии, уремии, хронических заболеваниях послеродовом парезе, бронхопневмонии, экссудативном плеврите, анемии, лейко- зах, диабете, остро протекающих болезнях, хроническом сепсисе, тетании, гипопаратиреозе, остром панкреатите, контагиозной плевропневмонии и др. Увеличение общего кальция может быть алиментарного происхождения, при остеодистрофии, деформирующем артрите, остеомах, гиперпаратиреозе, сердечной недостаточности, перитоните, гангрене, желтухе и т. д. Определение содержания неорганического фосфора в сыворотке крови (по В и Л. А. Кудрявцевой). В центрифужную пробирку вносят 2,5 мл воды мл сыворотки крови, 2 мл раствора трихлоруксусной кислоты, хорошо перемешивают и центрифугируют 10 мин яри В другую пробирку наливают 2,5 мл прозрачного центрифугата, 2,5 мл реактива на фосфор и через 20 мин коло- риметрируют с синим светофильтром против воды в 10 мм кюветах. Одновременно таким же образом ставят реакцию с рабочим стандартным раствором фосфора, но вместо сыворотки наливают мл стандартного раствора. Содержание неорганического фосфора в сыворотке (X, мл Д Л Б где А — плотность пробы с сыворотки Б оптическая плотность пробы с рабочим стандартным раствором фосфора количество взятое для колориметрического исследования, мл коэффициент для пересчета фосфора на мл сыворотки количество фосфора во взятом для анализа объеме рабочего стандартного раствора В сыворотке крови взрослых животных содержание неорганического фосфора следующее (мг мл у крупного рогатого скота — овец лошадей собаку Для пересчета количества неорганического фосфора в единицы СИ (ммоль/л) концентрацию фосфора (мг мл) нужно умножить на коэффициент Содержание неорганического фосфора в сыворотке крови у здоровых животных составляет у крупного рогатого скота коз лоша- у кур— Уменьшение содержания неорганического фосфора в сыворотке бывает при рахите, остеодистрофии, гипер- неполноценном кормлении Увеличение содержания неорганического фосфора в сыворотке наблюдают при заживлении переломов костей, болезнях почек, гипопаратиреозе, желтой атрофии печени, лейкозах Определение содержания магния в сыворотке крови (по Спе- ру). Для анализа берут три пробирки В первую пробирку (проба) вносят 2,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки мл 0,1% ного раствора поливинилового спирта и 1 мл ного раствора титанового желтого Во вторую пробирку берут 2 мл воды, 1 мл рабочего стандартного раствора магния, 0,5 мл раствора поливинилового спирта и мл 0,01% ного раствора титанового желтого В третью и четвертую пробирки (контроль) вливают по 3 мл воды, 0,5 мл раствора поливинилового спирта и 1 мл раствора титанового желтого Во все четыре пробирки добавляют по 1 мл 7,5% ного раствора гидроокиси натрия После прибавления растворов их смешивают, выжидают 5 мини колориметрируют при зеленом светофильтре нм) в 10 мм кюветах против контроля Содержание магния в сыворотке крови (X, мл) определяют по формуле 0,2 ' ' 'где оптическая плотность пробы оптическая плотность стандарта количество магния, взятое для анализа вколи- чество сыворотки, взятое для анализа, мл, 100 — коэффициент на мл Содержание магния в сыворотке крови ммоль/л) находят также по формуле х 1,028 0,2 где 0,005 иже, что ив предыдущей формуле, фициент для перечисления (нач относительная молекулярная масса магния Содержание магния в сыворотке здоровых животных находится в следующих пределах (мг мл) у крупного рогатого овец собаку кур Для пересчета количества магния в единицы СИ (ммоль/л) 180 его содержание мл) умножают на 0,411 Содержание магния в сыворотке составляет (ммоль/л) у крупного рогатого скота овец лошадей сви- собак кур Увеличение количества магния в сыворотке крови может быть при острой и хронической почечной недостаточности болезнях печении др Уменьшение содержания магния в сыворотке крови наблюдают при пастбищной тетании у поно- белково минеральном голодании, циррозе печении т д З ан яти е ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА, ГЛЮКОЗЫ И ОБЩЕГО БЕЛКА В КРОВИ Цель занятия Овладеть техникой определения глюкозы и щего белка в крови, научиться давать диагностическую оценку результатам исследования Материальное обеспечение рефрактометр, водяная баня шкаф, мерные колбы (на 100 мл и 1 л), градуированные и пипетки (на ОД, 1, 2 и 5 мл), л обычные дробарки, кровь (с антикоагулянтами сыворотка крови Реактивы для определения билирубина кофеиновый реактив (5 г химически чистого 7,5 г бензоата натрия, 12,5 г ацетата натрия, дистил- воды до 100 мл натрия (диазореактив 5 г кислоты растворяют при подогревании в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 15 мл соляной кислоты и доводят водой долг нитрита натрия и воды до 100 мл перед работой смешивают 10 мл диазореактива I и мл диазореактива II), гидрокарбонатного (60 гидрокарбоната натрия, 0 3 г хлористого натрия, 25 мл дистиллированной воды и 75 мл этилового билирубин, Реактивы для определения глюкозы о в колбе реторте на песочной бане 200 хранят в посуде из темного стекла без доступа воздуха, ледяная раствор трихлоруксусной кислоты, тиомочевина о реактив (94 мл ледяной уксусной кис 0,15 г и 76 мл о толуидина, хранят в стандартный раствор (500 мг глюкозы, высушенной до постоянной при 100 растворяют в 100 мл 0,2% ного раствора бензойной кислоты, хранят в рабочий стандартный раствор глюкозы (к 1 мл основного раствора глюкозы 4 мл дистиллированной воды, готовят в День исследования, в 1 мл содержится 1 мг глюкозы) Определение содержания билирубина в сыворотке крови (по Ендрашику, и Грофу). В три пробирки вносят по мл сыворотки, разведенной в 2 раза 0,9 % раствором хлористого натрия, а затем в первую пробирку (контроль) добавляют мл кофеинового реактива и 0,25 мл раствора хлористого натрия и колориметрируют, во вторую про (прямой билирубин) вносят мл 0,9 % ного раствора хлористого натрия и 0,25 мл диазосмеси, колориметрируют через мин (в течение 5 в третью пробирку (общий билирубин) вливают 1,75 мл кофеинового реактива и 0,25 мл диазо- смеси, колориметрируют через 20 мин. Колориметрирование проводят при зеленом светофильтре в 5 мм кюветах против дистиллированной воды. Из показателей оптической плотности, полученных при следовании прямого и общего билирубина, вычитают показатель оптической плотности контроля. По графику находят содержание общего и прямого билирубина (мг мл, или ммоль/л), а по разнице между количество непрямого билирубина (мг мл, или Методика построения калибровочного графика следующая. В мерную колбу вносят 10 мг чистого билирубина и добавляют хлороформа до 100 мл (в 1 мл раствора содержится 0,1 мг билирубина. В пробирки отмеривают раствор в 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25; 0,3. Содержание билирубина в этих пробирках будет соответственно (мг 0,005; 0,01; 0,015; 0,02; 0,025 и 0,03. Содержимое трех последних пробирок выпариванием на горячей водяной бане доводят до объема мл. После этого в каждую пробирку добавляют мл спирта, до 2,5 мл чистого этилового спорта, 0,5 мл диазосмеси, а через 15 2 мл кофеинового реактива (общий объем 5 мл) и сразу колориметрируют против воды. По оси ординат откладывают показатели оптической плотности, а по оси количество билирубина. Чтобы дать эти показатели в миллиграммах (на 100 мл, количество билирубина в каждой пробирке умножают на 200 из расчета, что для анализа берется 0,5 мл сыворотки. Первая пробирка соответствует мг 2, 3, 4, и 6 мг билирубина на 100 мл сыворотки, или 17,1; 34,2; 68,4; 85,5; 102,6 мкмоль/л. Разведение сыворотки в раза не учитывают, так как объем стандартных проб в 2 раза больше по сравнению с исследуемыми. Содержание билирубина в сыворотке здоровых животных составляет (мг мл у общего билирубина, прямого билирубина нету телят до дневного воз- общего билирубина у ло- общего билирубина (по НА у общего билирубина пря- у общего билирубина у кур — (по Л. Шлезингеру). Для пересчета концентрации билирубина в единицы СИ (мкмоль/л) количество билирубина, выраженное в мах на 100 мл, умножают на Количество общего билирубина в сыворотке составляет у у телят до дневного общего билирубина у общего билирубина у общего били- у общего билирубина у кур Повышение содержания в сыворотке непрямого билирубина регистрируют при гемолитических жел- тухах, обусловленных (пироплазмоз, бабе- зиоз, нутталиоз) и (кровопятнистая болезнь и др) болезнями, отравлениями гемолитическими ядами, введением несовместимой Повышенную концентрацию прямого билирубина в сыворотке крови встречают при механической желтухе (закупорка желчных путей желчными камнями, паразитами, сдавливание их опухолями, увеличенными лимфатическими узлами, абсцессами, эхинококками, сужение вследствие рубцового стягивания, воспаления слизистой двенадцатиперстной Увеличение количества прямого и непрямого билирубина в связано с паренхиматозной желтухой (при инфекционной анемии, контагиозной плевропневмонии, мыте, инфекционном энцефаломиелите, лептоспирозе, острых и хронических гепатитах, токсической дистрофии печени, отравлении фосфором и др.). Определение содержания глюкозы в крови с сахар и глюкозу устанавливают методами Сомоджи (с сульфатом меди) или (с пероксидазой и глюкозо- Близкие значения к данным этих методов дает определение глюкозы с о-толуидином. Для постановки реакции в вносят 0,9 мл раствора трихлоруксусной кислоты и 0,1 мл крови. Смесь цент- рифугируют в течение 10 мин при 3000 К 0,5 мл прозрачного центрифугата прибавляют 4,5 мл реактива и пробирку выдерживают на кипящей водяной бане точно 8 мин. При истечении указанного срока пробирку охлаждают водопроводной водой под краном и колориметрируют на фотоэлектроко- лориметре при длине волны нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостого опыта, сущность которого в следующем. К 0,5 мл 3 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты добавляют 4,5 мл о-толуидино- вого тщательно смешивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение 8 мин. Стандартную пробу готовят также, как и опытную, нов первую вместо сыворотки берут 0,1 мл рабочего стандартного раствора глюкозы (концентрация 100 мг на 100 мл, или 5,55 ммоль/л). 183 глюкозы в опытной пробе мг мл, ищи ммоль/л) рассчитывают по формуле где концентрация глюкозы в стандарте (мг мл, или ммоль/л); плотность пробы оптическая плотность стандарта. У здоровых взрослых животных содержание глюкозы в крови находится в пределах (мг у крупного рогатого ско- собаку кур При умножении количества глюкозы (мг мл) на получают концентрацию ее в единицах СИ (ммоль/л). Содержание глюкозы составляет у крупного рогатого скота овец свиней лоша- собаку Увеличение содержания глюкозы в крови (гипергликемию) наблюдают при сахарном диабете, поедании большого количества сахара, стрессах, гиповитаминозах и С, почечной недостаточности, нефрите и т. д. Уменьшение количества глюкозы в крови (гипогликемия может быть при голодании, диспепсиях, А-ги- повитаминозе, лейкозе, гипофункции щитовидной остром поражении печении т. д. Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом. Для определения общего белка в сыворотке крови пользуются рефрактометрами различного типа ИРФ-22, ИРФ-23, РЛУ, РЛ, РПЛ При работе на рефрактометре РЛУ (рис. 59) вначале проверяют нулевую точку, для чего на поверхность измерительной призмы наносят капли дистиллированной воды лупу шкалы и окуляр зрительной трубки уста- Рис. 59. Рефрактометр РЛУ навливают на резкость в поле зрения должны быть хорошо видны шкала и визирные устраняют дисперсию в окуляре зрительной трубки вращением рукоятки дисперсионного компенсатора линию, имеющуюся на лупе шкалы, устанавливают наделении, а границу светотени совмещают сточкой пересечения визирных линий с помощью ключа. После подготовки прибора раскрывают его камеру, протирают верхнюю и нижнюю призмы фильтровальной бумагой, а затем мягкой салфеткой. На поверхность нижней призмы наносят капли сыворотки закрывают, направляют зеркалом свет в ее окно и поворачивают камеру до тех пор, пока граница светотени не установится в точке пересечения визирных линий, и по шкале проводят отсчет показателя пре- 5. Коэффициенты преломления сыворотки крови и соответствующие им количества общего белка Показа- тель рефрактометра Показатель рефрактометра мл Показа- тель рефрактометра Показа- рефрактометра Белок, мл 1,3431 1,3435 1,3439 1,3446 1,3450 1,3454 1,3458 1,3460 1,3462 1,3464 1,3465 1,3466 1,3468 1,3469 1,3470 1,3472 1,3473 1,3474 1,3475 1,3477 3,94 4,16 4,38 4,60 4,81 5,03 5,25 5,47 5,68 5,92 5,97 6,02 6,07 6,12 6,18 6,23 6,29 6,34 6,40 6,45 6,50 6,60 6,71 6,77 6,82 6,88 6,93 7,04 1,3481 1,3482 1,3483 1,3484 1,3485 1,3486 1,3487 1,3488 1,3489 1,3494 1,3495 1,3496 1,3497 1,3500 1,3501 1,3502 1,3503 1,3504 1,3506 1,3507 1,3510 7,10 7,15 7,20 7,25 7,31 7,36 7,42 7,48 7,54 7,59 7,63 7,68 7,73 7,79 7,83 7,91 7,96 8,06 8,12 8,17 8,23 8,28 8,33 8,38 8,44 8,49 8,55 8,61 8,71 8,76 1 3511 1,3512 1,3513 1,3514 1,3515 1,3516 1,3517 1,3518 1,3519 1,3520 1,3521 1,3522 1,3523 1,3525 1,3527 1,3528 1,3529 1,3531 1,3532 1,3535 1,3537 1,3538 1,3540 8,82 8,87 8,92 8,97 9,03 9,08 9,14 9,20 9,26 9,35 9,41 9,46 9,51 9,57 9,63 9,68 9,73 9,84 9,89 9,94 9,99 10,05 10,10 10,17 10,23 10,28 10,33 10,39 10,44 ,3541 ,3542 ,3543 ,3544 ,3545 ,3546 ,3547 ,3548 ,3549 ,3550 ,3551 ,3552 ,3553 ,3554 ,3556 ,3557 ,3558 ,3559 ,3561 1,3562 ,3563 ,3564 ,3565 ,3566 ,3567 ,3568 1,3569 1,3570 10,49 10,54 10,60 10,64 10,75 10,80 10,88 10,98 11,04 11,09 11,21 11,26 11,30 11,37 11,42 11,47 11,52 11,57 62 11,71 11,77 11,82 11,87 11,93 11,98 12,04 185 сыворотки. Пользуясь данными таблицы 5, повели- чине коэффициента преломления находят содержание белка. У здоровых животных содержание общего белка в сыворотке находится в следующих пределах (г мл у крупного рогатого сви- у или у крупного рогатого свиней собаку кур Уменьшение концентрации общего белка в сыворотке крови встречают при низком содержании белка в рационе, несбалансированности рациона по аминокислотному составу, острых и хронических кровотечениях, гидремии, беременности, нефротическом отеке, паренхиматозном гепатите, циррозе печени, абсцессах, злокачественных паратуберкулезе (у клинически больных терминальной форме туберкулеза, затяжном сепсисе, тейлериозе, лихорадочных состояниях, интоксикациях и т. д. Увеличение содержания общего белка в сыворотке наблюдают при концентратном типе кормления, избытке переваримого протеина и недостатке легкорастворимых углеводов, дегидратации, рвоте, тяжелых формах диареи, диабете, гепатите (в стадии каротина в кормах, неправильном соотношении кальция и фосфора, недостатке витамина D, острых воспалениях, флегмонах, тяжелых инфекционных и других болезнях. |