РУКОВОДСТВО ПО ОБЩЕЙ ХИРУРГИИ. Руководство по общей хирургии Учебное пособие. М. Оао Издательство Медицина
 Скачать 9.28 Mb.
|
|
▲ Группы А(П)$ и В(Ш)(х встречаются соответственно в 28,2— 39,2 %, 20,2—22,5 % случаев и являются взаимно агглютинирующимися, т. е. сыворотка одной группы дает реакцию агглютинации с эритроцитами другой. Кроме того, эти группы находятся в определенных вышеуказанных соотношениях с группами 0(1)оф и AB(IV); эритроциты группы А(П)р и В(Ш)а агглютинируются сывороткой группы 0(1)оф, а сыворотки А(П)р и В(Ш)а дают агглютинацию с эритроцитами группы AB(IV). 154 В настоящее время в России принято обозначать группы крови римской цифрой и по содержанию агглютиногенов эритроцитов, обозначаемых заглавными буквами латинского алфавита, т. е. 0(1); А(П); В(Ш); AB(IV). По химической природе агглютиногены представляют собой полипептиды, состоящие из расположенных цепочкой многочисленных аминокислот. Строение каждого агглютиногена определяется составом этих аминокислот, а также числом и формой полипептидных цепочек. Агглютиногены в эритроцитах связаны с цитоскелетом. Агглютинины сыворотки находятся в р- и у-глобулиновой фракциях. После выпадения этих фракций сыворотка становится интактной, хотя и содержит некоторые белковые фракции. Выпавшие же глобулины, высушенные и вновь растворенные в солевом растворе, дают реакцию агглютинации. Чувствительность эритроцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям вследствие того, что как сыворотка, так и эритроциты имеют различные титры. Под титром агглютинации понимают то максимальное разведение сыворотки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. Если определяется титр сыворотки, то постоянной величиной будут стандартные эритроциты; если же определяется титр эритроцитов, то постоянной величиной явится стандартная сыворотка. Появление агглютинации и степень ее зависят от целого ряда причин и в первую очередь от температуры. При низкой температуре независимо от групп крови происходит неспецифическая «холодовая агглютинация» за счет наличия в сыворотке особого холодового агглютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. Реакция агглютинации зависит от степени концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Чем выше концентрация, тем слабее реакция агглютинации. Добавление 10 % раствора лимоннокислого натрия в некоторых случаях приводит к ускорению агглютинации. Наряду со специфической агглютинацией в результате соединения одноименных агглютиногенов и агглютининов встречается и неспецифическая агглютинация (феномен Томсена), наблюдаемая в крови, постоявшей и зараженной бактериальной флорой. Сущность этого феномена сводится к тому, что нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток (иногда дольше) при комнатной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп и со своей собственной. Неспецифическая агглютинация может встречаться и в свежей крови — панагглютинация (аутоагглютинация). Сущность явления сводится к тому, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сывороткой группы IV(AB). 8.1.1. Определение группы крови Группы крови определяют по стандартным сывороткам (простая реакция), стандартным эритроцитам (двойная или перекрестная реакция) и с помощью синтетических моноклональных антител анти-А и анти-В. 8.1.1.1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки Для определения групповой принадлежности крови у человека пользуются тремя стандартными сыворотками групп 0(1), А(П), В(Ш) и реже— 155 AB(IV). Стандартные сыворотки готовят главным образом из крови, редко из других жидкостей (асцитическая, плевральный экссудат). Чаще всего кровь берут от доноров определенных групп крови; используют также ре-троплацентарную кровь. После отстаивания крови забирают сыворотку, к которой добавляют консервирующее вещество — борную кислоту из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки (лучше прибавлять ее немного больше). При таком способе консервации сыворотка, полученная даже из нестерильной ретроплацентарной крови, сохраняет свои агглютинационные свойства, а борная кислота не снижает титра. После отстаивания сыворотку разливают по стерильным ампулам или флаконам, которые сразу же запаивают или герметично закупоривают. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка должна удовлетворять следующим требованиям:
Во избежание ошибок при определении групп крови стандартные изогем-агглютинирующие сыворотки окрашивают в разные цвета: группы А(П) — синий, группы В(Н1) —розовый, группы АВ(ГУ) —желтый цвет. Сыворотку группы 0(1) не окрашивают. Хранят жидкие сыворотки, герметично закрытые, в холодильнике; обязательно в темном месте. Открытую сыворотку необходимо предохранять от высыхания, так как при загустевании она склонна давать псевдоагглютинацию. Группы крови определяют обязательно двумя сериями стандартных изогем-агглютинирующих сывороток, при температуре 15—20 °С, на тарелках (рис. 8.1, а) или планшетах (рис. 8.1, б). На левой стороне тарелки или планшета надписывают 0(1), в середине — А(П), на правой стороне — В(Ш). По середине верхнего края планшета или тарелки отмечают фамилию донора (реципиента) или номер крови. Используют активные стандартные сыворотки трех групп (0, А, В) с титром не ниже 1:32, двух серий. Сыворотки располагают в специальных штативах в два ряда. Каждой сыворотке соответствует маркированная пипетка. Для дополнительного контроля в отдельный стаканчик ставят ампулу с сывороткой AB(IV). На тарелку или планшет наносят по 1—2 капли стандартных сывороток в два ряда: сыворотку группы 0(1) — слева, сыворотку группы А(П) — в середину, сыворотку группы В(Ш) — справа. Капли крови наносят пипеткой около каждой капли стандартной сыворотки и смешивают углом предметного стекла. Количество крови должно быть в 8—10 раз меньше, чем сыворотки. Угол предметного стекла необходимо всякий раз менять, чтобы не произошло смешивания стандартных сывороток. После смешивания тарелку или планшет осторожно покачивают в руках, что способствует более быстрой и четкой агглютинации. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, к каплям сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и продолжают на- 156  Стандартные сыворотки4* Oa$(t) AP(II) Ba(lll)
0(1) А (II) В (III Исследуемая кровь группы Ва(Ш) 0(1} A(ll) B(lih, Исследуемая кровь группы А В (IV > Реакция отрицательная Реакция положительная Рис. 8.1. Определение группы крови с использованием стандартных изогемагглюти-нирующих сывороток. блюдение до истечения 5 мин. Через 5 мин читают реакцию: если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего дают заключение о групповой принадлежности.
157 8.1.1.2. Стандартные сыворотки и стандартные эритроциты—перекрестная реакция Стандартные эритроциты представляют собой 10—20 % взвесь эритроцитов группы А(П) и В(Ш) в цитратно-физиологическом растворе. Для определения группы крови берут 3—5 мл крови в пробирку без стабилизатора. Кровь должна отстояться или ее центрифугируют для получения сыворотки. На планшет наносят по две капли стандартных сывороток группы 0, А, В двух серий. Соответственно каждой группе сывороток располагают по одной капле стандартных эритроцитов группы 0, А, В. В стандартные сыворотки добавляют по 1 капле испытуемой крови, а в стандартные эритроциты — по 2 капли испытуемой сыворотки. Капли перемешивают углом предметного стекла, всякий раз изменяя угол так, чтобы не произошло смешивания разных сывороток и разных эритроцитов. Покачивая планшет в руках в течение 5 мин, следят за наступлением агглютинации. а Наличие агглютинации со стандартными эритроцитами А и В и отсутствие агглютинации в трех стандартных сыворотках двух серий указывает на то, что в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина аир, а в испытуемых эритроцитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(1). ▲ Наличие агглютинации со стандартной сывороткой группы 0(1), В(Ш) и со стандартными эритроцитами группы В(Ш) указывает на то, что в ис следуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуе мой крови — агглютинин (3. Следовательно, кровь относится к группе А(П). а Наличие агглютинации со стандартной сывороткой группы А(П), 0(1) и со стандартными эритроцитами группы А(П) указывает на то, что в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке — агглютинин а. Следовательно, кровь относится к группе В(Ш). ▲ Наличие агглютинации со стандартными сыворотками и отсутствие агглютинации со стандартными эритроцитами указывает на то, что в иссле дуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке ис следуемой крови отсутствуют оба агглютинина, т. е. кровь относится к группе AB(IV). 8.1.1.3. Синтетические моноклональные антитела анти-А и анти-В Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий. Это моноклональные анти-А и анти-В антитела, которые продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса I, G, М, направленные против группоспецифических антигенов А или В человека. Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови системы AB0 человека вместо стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В. На планшет (пластинку) наносят по одной большой капле цоликлона анти-А и анти-В (0,1 мл) под соответствующими надписями: «анти-А» или «анти-В». Рядом помещают по одной маленькой капле исследуемой крови (соотношение кровь : реагент = 1:10), затем реагент и кровь смешивают и наблюдают за ходом реакции при легком покачивании планшета или пластинки. Агглютинация с цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 5 с. Наблюдение следует вести 2,5 мин ввиду возможности более позд- 158  него наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Оценка результатов реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и ан-ти-В представлена на рис. 8.2 и в табл. 8.3, в которую также включены результаты определения агглютининов в сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов. При подозрении на спонтанную агглютинацию у лиц с группой крови AB(IV) проводят контрольное исследование с 0,9 % раствором натрия хлорида. Реакция должна быть отрицательной. Цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100, 200 доз с растворителем, приложенным к каждой ампуле, по 2, 5, 10, 20 мл соответственно. Таблица 8.3. Результаты определения группы крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В
Примечание. «+» — агглютинация есть, «—» — агглютинации нет. 159 8.1.2. Ошибки при определении групповой принадлежности крови ▲ К ошибкам по техническим причинам относятся:
▲ Ошибки, связанные с применением неполноценных стандартных сыво роток и стандартных эритроцитов:
▲ Ошибки, зависящие от биологических особенностей исследуемой кро ви:
8.2. Группы крови системы Rh | |||||||||||||||||||||||||||||||
