Витер В.И., Халиков А.А. - Судебная медицина в лекциях. В. И. Витер, А. А. ХаликовСудебная медицинав лекцияхиздание второе
 Скачать 2.21 Mb.
|
|
Стр. 302 Судебная медицина в лекциях Изъятие образцов необходимо производить с соблюдением сле- дующих правил: - содержимое влагалища у живых женщин целесо- образно брать сразу после совершения преступления - сохранность сперматозоидов в половых путях живых женщин составляет 5-7 дней (при условии, если потерпевшая не предпринимала никаких гигиенических манипуляций), но количество их резко уменьшается уже в течение первых суток. Содержимое влагалища берется на чис- тый марлевый тампон, при этом обрабатываются своды, наружный зев и шейка матки. Отработанным тампоном на чистые предметные стекла наносятся поверхностные мазки, подсушиваются, упаковы- ваются и подробно надписываются; - содержимое полости рта у живых потерпевших желательно изымать в течение нескольких часов с момента совершения преступ- ления. Аналогично марлевым тампоном протирается слизистая обо- лочка губ, щек, десен, зубов, лакуны, миндалины, после чего содер- жимое тампона переносится на предметное стекло и высушивается; - содержимое прямой кишки у живых потерпевших следует брать до акта дефекации. Предварительно делается смыв вокруг анального отверстия (тампон исследуется самостоятельно), и лишь после этого новым тампоном берут содержимое прямой кишки, вводя тампон на глубину 3-6 см. Все тампоны с образцами перед упаковкой высу- шиваются. При взятии мазков-отпечатков с полового члена следует учиты- вать, что проведение подозреваемым гигиенических мероприятий способно полностью исключить возможность обнаружения чужерод- ного биологического материала. Как правило, безрезультатно изъятие мазков-отпечатков позднее, чем через 3 дня после совершения пре- ступления. При взятии отпечатков чистые, слегка смоченные водой предметные стекла одной из сторон плотно прикладываются к наруж- ной поверхности полового члена, внутренней поверхности крайней плоти венечной борозды, к головке полового члена. Отпечатки про- сушивают, стекла складывают отпечатками внутрь, проложив между ними спички, и связывают, предварительно промаркировав каждое стекло. Стекла укладывают в коробки и направляют на исследование. При взятии мазков, что менее желательно, марлевыми тампонами, слегка смоченными водой, протирают названные выше участки, там- поны подсушивают, упаковывают и направляют на исследование. В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 303 Перечисленные объекты отбираются у трупов судебными меди- ками, - у живых лиц - судебными медиками или урологами, сексопа- тологами, гинекологами, андрологами. Важные вещественные доказательства можно получить, иссле- довав подногтевое содержимое потерпевшего и подозреваемого. Для этого ногтевые пластинки указанных лиц срезают очень ост- рыми чистыми ножницами, стараясь не повредить мягких тканей и полностью захватить выступающий край ногтевой пластины. Во избежание утраты доказательственного материала подногтевое со- держимое исследуется первоначально на наличие микроволокон и лишь затем - на наличие биологических объектов. Подногтевое содержимое, равно как и следы чужеродных био- логических выделений в естественных отверстиях трупов, подлежат обязательному исследованию вне зависимости от времени с момен- та совершения преступления, за исключением случаев, когда иссле- дование невозможно из-за далеко зашедших гнилостных изменений трупа. В качестве сравнительных образцов на исследование желательно направлять биологические субстраты того же вида, что и изъятые на месте происшествия. Так, если на месте происшествия изъята кровь, то в качестве сравнительных образцов направляется тоже кровь, если сперма, то сперма, если слюна - то слюна и т.д. При таком срав- нении результаты являются наиболее объективными. Кровь - при возможности незамедлительной доставки в лабора- торию - желательно направлять в жидком виде в количестве 2-3 мл из пальца руки, помещенную в чистый флакон с указанием номера дела и фамилии донора. При невозможности направления крови в жидком виде, а также для возможного дублирования исследований обязатель- но представление образцов на марлевом тампоне. Тампон пропиты- вается кровью до получения пятна 5ґ5 см (с пропитыванием несколь- ких слоев марли), высушивается и направляется на исследование. Слюна - прополоскать рот донора водой, положить под язык марлевый тампон, после обильного пропитывания слюной извлечь его пинцетом, высушить при комнатной температуре, упаковать. Сперма, влагалищное содержимое - отбор этих образцов описан выше. На исследование направляют как мазки на предметных стек- лах, так и тампоны, высушенные при комнатной температуре. Стр. 30 Судебная медицина в лекциях Волосы - для сравнения следует направлять волосы с головы или тела человека, в зависимости от принадлежности волос с места происшествия. С головы для сравнения срезают, как можно ближе к корням, небольшие пряди волос, отдельно - со лба, висков, темени, затылка. Следует помнить, что длина волос - один из диагностических признаков. Для сравнения волосы с тела должны представляться с тех же областей, из которых предполагается происхождение волос-улик. Это могут быть длинные и короткие волосы тела, лица, конечностей. Для сравнения представляется не менее 5 -10 волос каждого типа. Исследование крови Схема исследования крови как вещественного доказательства: 1. Определение наличия крови. 2. Установление видовой принадлежности. 3. Определение индивидуальной принадлежности по изосероло- гическим системам: - группы эритроцитарных антигенов - группы сывороточных антигенов - группы ферментных антигенов 4. Геномная идентификация. 5. Установление пола, возраста, регионарного происхождения крови, давности формирования пятен крови, количества излившей- ся крови и механизм образования следов крови, принадлежит кровь беременной женщине или роженице, живому лицу или трупу. Исследование следов крови является наиболее частым видом эк- спертизы вещественных доказательств и составляет около 80 % всех экспертиз. Судебно-медицинская экспертиза крови имеет большое значение при расследовании особо тяжких преступлений: убийств, изнасилований, нанесения телесных повреждений. Объекты исследования: следы, напоминающие кровяные - пят- на, помарки, смывы, соскобы, замытые участки на объектах - без ви- димых следов. Исследуются для определения: Наличия крови: исследование может производиться непосредс- твенно с участками вещественных доказательств, имеющими следы, похожие на кровяные, либо с экстрактами из этих следов - при ма- лых количествах вещества в следе исследование, как правило произ- водится с экстрактом из следа. В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 30 Методы: по возрастанию чувствительности - микроспектроско- пия; хроматография в тонком слое; микролюминесценция. Вида крови: человека, животного, птицы и т.д. - при получении положительного результата на наличие крови исследуются ранее приготовленные экстракты или новые вытяжки. В настоящее время применяется Опти-тест, позволяющий одно- временно выявить наличие и вид крови (человека). Он представляет сочетание бензидиновой пробы и преципитирующей реакции. Методы: кольцепреципитация; встречный иммуноэлектрофорез на агаре или на ацетатцеллюлозных мембранах; реакция в твердой среде; иммунофлюоресценция; выявление антигена Н; определение У-хроматина. Групповой принадлежности крови: при установлении прина- длежности крови человеку, как правило, первоначально определяется принадлежность к той или иной группе крови (по разным серологи- ческим системам) представленных образцов - с целью выбора рацио- нальной серологической системы исследования самих вещественных доказательств с места происшествия. При малых пятнах - исследова- ние только после изучения образцов крови подозреваемых и жертв!!! Определение антигенных свойств крови имеет значение при до- казательстве виновного в совершении преступления подозреваемо- го, в бракоразводных делах, в делах о подмене детей, при исключе- нии отцовства и материнства. Существует определенная зависимость наследования индивиду- альных факторов крови. В судебно-медицинской экспертизе вещественных доказательств и экспертизе по поводу спорного отцовства используют метод ге- номной дактилоскопии. В результате разрушения белкового материала, находящегося в неблагоприятных условиях на вещественных доказательствах, через 1-6 месяцев бывает трудно с помощью белковых систем произвести экспертизу. Кроме того, наличие в образце бактериального загряз- нения может привести к неверному определению групповой прина- длежности. Определение групповой принадлежности пятен спермы часто бывает затруднительно из-за загрязнения вагинальными вы- делениями. Протеолитическая активность спермы может привести к деградации белкового материала в образце. Стр. 30 Судебная медицина в лекциях Все белковые системы - это проявления полиморфизма генов в организме индивида. Однако генетическая изменчивость, наблюда- емая на уровне ДНК, значительно выше. Внедрение в практику ме- тодов анализа полиморфизма ДНК в следах биологического проис- хождения является крупнейшим достижением в криминалистике и судебной медицине последних лет. Первоначально в 1985 году был предложен метод анализа поли- морфизма длин рестриктазных фрагментов ДНК, названный геном- ной дактилоскопией. Исследования генома человека показали, что для каждого инди- вида характерен свой, присущий только ему набор вариантов тес- тируемых гипервариабельных локусов. Вся картина вариантов оп- ределяется геномным “отпечатком”, или генетическим “паспортом” - индивидуальной геномной характеристикой личности человека, которому принадлежит анализируемая ДНК. С целью “расшифров- ки” гипервариабельных локусов был предложен метод рестриктаз- ного анализа, основанный на расщеплении высокополимерной ДНК ферментами рестриктазами. Рестриктазы “разрезают” ДНК внутри или около своих участков узнавания, которые обычно содержат 4- 6 нуклеотидных пар. В результате из каждого вида молекул ДНК образуется свой, присущий только данному виду набор молекул низкомолекулярных поли- и олигонуклеотидных фрагментов. По- лученную гетерогенную смесь фрагментов ДНК фракционируют по размеру, далее анализируют непосредственно с помощью окрашива- ния и изучения в УФ-лучах или опосредованно с помощью гибриди- зационных методов, применяя соответствующие, меченные радио- изотопами зонды. Применение зондов позволяет выявлять сразу все минисателлиты данного семейства, гомологичного используемому зонду. При этом для каждого человека характерен свой, присущий только ему вариант набора таких, отличающихся по длине миниса- теллитных фрагментов. Основное преимущество данной методики заключается в высо- кой надежности при проведении идентификации личности. Однако первоначально разработанный метод анализа полиморфизма длин рестриктазных фрагментов ДНК имеет ряд существенных ограниче- ний, связанных как с количеством, так и с качеством используемой при анализе ДНК. Для успешного проведения анализа необходимо В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 307 наличие высокомолекулярной ДНК в количестве 5-10 мкг. Значи- тельно деградированная ДНК (с распадом нити на мелкие цепочки) непригодна для оценки полиморфизма рестриктазных фрагментов. К недостаткам метода также относится длительность проведения анализа (2-4 недели) и в ряде случаев невозможность повторного ис- следования и сравнения результатов. Для преодоления перечислен- ных недостатков был предложен метод ферментативной амплифика- ции, т.е. увеличение числа копий строго определенных фрагментов молекулы ДНК в условиях in vitro с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), что позволило резко повысить чувствитель- ность анализа. Этот метод позволяет быстро, в течении 1-3 дней ана- лизировать образцы, содержащие минимальное количество ДНК различной степени сохранности (небольшое пятно крови, луковица волос и др. объекты). Успешное сочетание метода полимеразной цепной реакции с геномной дактилоскопией основано на том, что ПЦР позволяет размножить необходимую последовательность ДНК в количестве, достаточном для проведения типирования методом геномной дак- тилоскопии. Каждый этап удвоения ДНК в процессе амплификации состоит из трех последовательных ступеней: 1. Денатурация ДНК. 2. Комплементарное связывание праймерной последовательнос- ти с соответствующей последовательностью на ДНК-матрице (так называемый отжиг). 3. Синтез ДНК с помощью Taq-полимеразы (достройка прайме- ра). Такой подход положен в основу создания диагностических и индивидуализирующих тест-систем. Все они разрабатывались по единому принципу, который заключается в подборе праймеров на основе известной первичной последовательности ДНК (как прави- ло это олиго-нуклеотиды длиной 20-25 нуклеотидов) и выбора оп- тимальных условий амплификации нужного генетического локуса. Существование в геноме человека гипервариабельных локусов поз- волило использовать ПЦР для целей высокоточной идентификации личности и определения биологического родства в судебной экспер- тизе. Стр. 30 Судебная медицина в лекциях Практическое применение геномной “дактилоскопии” в судеб- ной медицине. Использование технологии геномной “дактилоскопии” в экспер- тизе спорного отцовства, а также для установления видовой и поло- вой принадлежности биологических объектов и проведения иден- тификации позволяет выйти на качественно новый, более высокий уровень анализа, поскольку геннодактилоскопические системы об- ладают потенциалом исключения и избирательностью, которые на несколько порядков выше чем у традиционных маркерных систем. Геннодактилоскопический тест, направленный на разрешение случаев оспариваемого отцовства, предполагает сравнительный анализ геномных “отпечатков” ребенка, матери и предполагаемого отца. При этом регистрируют все полосы в геномном “отпечатке” ребенка, позиции которых совпадают с материнскими полосами, а оставшиеся полосы у ребенка сопоставляются с геномным “оттис- ком” мужчины. Если исследуемое трио представляет собой истин- ную биологическую семью, все не материнские полосы ребенка об- наружатся в геномном “отпечатке” отца. В противном случае часть полос в геномном “отпечатке” ребенка окажется посторонними, т.е. не найдет соответствия в геномном “отпечатке” заявленных родите- лей. Это стандартный алгоритм решения данной экспертной задачи, который базируется на закономерностях наследования гипервариа- бельных локусов. В частности, опираясь на менделевский характер наследования можно считать, что все полосы, составляющие геном- ный “отпечаток” ребенка должны иметь либо отцовское, либо мате- ринское происхождение. Поэтому присутствие у ребенка посторон- них фрагментов служит основанием для исключения заявленного родства. Теоретически потенциал исключения мультилокусных сис- тем очень высок - более 99,999%, однако практические результаты очень сильно зависят от технического уровня выполнения экспери- ментальных процедур. При судебно-медицинском исследовании вещественных дока- зательств в одном случае проводилась идентификация следов кро- ви. По данным судебно-следственных органов гр-н В. подозревался в убийстве гр-на Б. Наряду с исследованием белковых систем была проведена геномная “дактилоскопия”. Типирование проводили по двум гипервариабельным участкам ДНК. После анализа данных, В.И. Витер, А.А. Халиков Стр. 30 было установлено с вероятностью ошибки не более 0,36%, что кровь на вещественных доказательствах принадлежит гр-ну В. Таким об- разом, вопрос, интересовавший следствие был разрешен. В другом случае по данным прокуратуры, был обнаружен труп гр-ки Т. При судебно-биологическом исследовании в содержимом ее влагалища обнаружено присутствие спермы. В изнасиловании и убийстве гр-ки Т. подозревался гр-н Г. Проведение экспертизы по эритроцитарным системам не привело к позитивному результату. При проведении геномной дактилоскопии типирование геномной ДНК осуществлялось по четырем локусам - Аро В, Д I7S 30, Д IS 80, Д 9S 49 из образцов крови подозреваемого Г., спермы из влагалища Т., ее образцов крови. Результаты, полученные после анализа длин амплифицированной ДНК, позволили исключить происхождение спермы во влагалище гр-ки Т. от подозреваемого Г. На основе практических результатов проведенных экспертиз, можно сделать вывод о довольно высокой достоверности результа- тов при использовании полимеразной цепной реакции с типирова- нием не менее 3-4 гипервариабельных локусов с последующим вы- считыванием вероятности ошибки. Внедрение в практику судебно-медицинской экспертизы мето- дов геномной дактилоскопии означает развитие нового периода в производстве экспертиз по идентификации объектов биологическо- го происхождения и родственных отношений на качественно более высоком уровне, чем обычные рутинные методы исследования. Установление половой принадлежности крови основано на вы- явлении особенностей хромосом в ядрах клеток белой крови челове- ка. Установлено, что у женщин наличествует две одинаковые поло- вые хромосомы (XX), у мужчин разные - X и У. Возможно решение о половой принадлежности крови по выявлению в ядрах лейкоцитов глыбок полового хроматина (телец Бара), имеющих вид “барабанных палочек”. У мужчин эти включения встречаются относительно редко. Установление происхождения крови от взрослого человека или младенца основано на различии гемоглобина крови, выявляемого физико-химическими и электрофоретическими методами. Гемогло- бин новорожденного на 70-80% состоит из плодного или фетального гемоглобина, и лишь на 20-30% из гемоглобина, характеризующего взрослого человека. Постепенно это соотношение меняется и к кон- Стр. 310 Судебная медицина в лекциях цу первого года жизни составляет около 1-2% фетального гемогло- бина, что характерно для крови взрослых людей. Региональное происхождение крови - определяется по обнару- жению в ней примесей клеток тех тканей, откуда произошло кро- вотечение. Доказательством наличия менструальной крови, кроме наличия клеток слизистой оболочки матки, является обнаружение фермента фибринолизина. Метод может быть использован только при наличии свежей крови без каких либо примесей (спермы, слю- ны и др.). Для определения давности происхождения пятна крови исполь- зуют изменение свойств гемоглобина при “старении” пятна и сни- жение активности некоторых ферментов крови с течением времени. Методы относительно сложны и трудоемки, требуют дефицитных реактивов. Определение количества излившейся крови представляет слож- ную задачу в связи с рядом факторов, затрудняющих ее рёшение. На результат влияют характер и структура материала, на котором сфор- мировалось пятно, степень пропитывания и др. Основным методом являет определение сухого остатка крови в пятне с последующим перерасчетом на объем жидкой крови. Для выявления беременности, бывших родов и аборта (прерван- ной беременности) по пятнам крови используются гормональный и ферментативный методы Они достаточно сложны и дорогостоящи. В ряде случаев не дают однозначного ответа. Дифференциация следов крови от живых людей и трупов воз- можна в пределах до 45 суток с помощью метода основанного на вы- бросе в кровь трупа тканевых изоферментов, отсутствующих в кро- ви живого человека. Появившись спустя 15-20 минут после смерти они, достигают максимума концентрации через два часа и являются специфическим диагностическим признаком. Ценность метода ве- лика. Однако его сложность затрудняет внедрение в следственную и экспертную практику. Исследование спермы Исследование спермы в жидком виде, в мазках, в семенных пят- нах производится при расследовании половых преступлений, при определении способности к оплодотворению, в бракоразводных и алиментных делах. |