Руководство по препарированию и изготовлению анатомических препаратов, Гончаров, 2002. Руководство по препарированию и изготовлению анатомических препа. Н. И. Гончаров, Л. С. Сперанский, А. И. Краюшкин, С. В. Дмитриенкоруководство по препарированию
 Скачать 2.15 Mb.
|
|
Мышечная система Изготовление препаратов мышц требует использования свежего материала. Исходный фраг- мент тела в течение 1-2 суток промывают проточной водой для освобождения его от крови. Затем следует препарирование в ходе которого удаляют жир, фасции, сосуды и нервы с тем, чтобы пока- зать топографические образования соответствующей части тела. Готовый препарат на 10-15 дней помещают в фиксирующую жидкость, в качестве которой для мышечной ткани наиболее часто применяют раствор, состоящий из равных частей 10 % фор- малина и 50 % спирта. Экспонируют препараты в 5 % 10 % растворе формалина. С целью демонстрации начала и прикрепления мышц можно изготовить так называемые ко- стно-мышечные препараты. Для этого оставляют мышцы, необходимые для демонстрации, а ос- тальные отсекают. Для имитации естественной окраски мышц существуют различные способы обработки как влажных, так и сухих препаратов. Влажные препараты рекомендуют окрашивать путем инъекций кровеносных сосудов специально подобранными по цвету растворами. Сухой препарат раскраши- вают в местах расположения мышечной ткани киноварью, растертой в желатине, а в участках ло- кализации соединительной ткани танином, также растертом в желатине. Более сложные способы приготовления мышечных препаратов с естественной окраской изложены в специальной литера- туре. Сухие препараты мышц готовят следующим образом. Исходный материал тщательно препа- рируют, освобождая от жиров. С целью дальнейшего обезжиривания ткани промывают щелочным раствором и на сутки помешают в 40 % спирт. Затем в течение нескольких дней препараты высу- шивают при помощи вентиляторов. При этом между мышцами целесообразно поместить распор- ки. Начиная со второго третьего дня сушки, мышцы обрабатывают смесью скипидара и спирта (1:1). Окончательно высушенный препарат несколько раз покрывают лаком. Классическим методом для изучения взаимоотношений анатомических образований, в том числе и мышц, является метод изготовления распилов замороженных трупов, разработанный в 1851-1859 годах Н.И. Пироговым. Части тела или целостный труп в течение нескольких суток вы- держивают в морозильной камере при температуре не выше минус 20 градусов по Цельсию. Необ- ходимые представления о топографии мышц дают поперечные распилы соответствующих частей тела. Для приготовления ровных качественных распилов рекомендуют ленточную электрическую пилу. Можно использовать пилу по металлу. Готовый препарат помещают в фиксирующий рас- твор, состоящий из 10% формалина. Для изготовления препаратов синовиальных влагалищ сухожилий используют нефиксиро- ванный материал. Кисть или стопа должны быть отпрепарированы. Иглу, соединенную со шпри- цем резиновой трубкой, вводят в проксимальную часть синовиального влагалища. Просвет сино- виального влагалища заполняют контрастной массой, в качестве которой можно использовать обычную масляную краску. Можно применять полихромную наливку в разные синовиальные вла- галища ввести красящие массы различных цветов. После окончания инъекции готовый препарат экспонируют в 5 % 10 % нейтральном формалине в стеклянной ёмкости. 118 Внутренние органы Готовят как влажные, так и сухие препараты внутренних органов. В обоих случаях в качест- ве исходного материала могут служить как нефиксированные, так и консервированные органы. В качестве фиксирующего раствора наиболее часто употребляют 5 % 10 % водный раствор форма- лина. Для предотвращения заплесневения препарата к фиксирующей жидкости добавляют до 1 % её объёма тимол или карболовую кислоту. Консервирующую смесь сначала рекомендуют ввести в кровеносное русло органа. Затем препарат погружают в фиксирующую жидкость в подвешенном состоянии на марле, во избежание деформации органа. Для лучшего сохранения влажного препа- рата последний рекомендуют покрыть 5 % желатином. С целью имитации естественной окраски препаратов, обесцвеченных формалином, подсушенные органы, перед помещением в консервант, можно покрасить масляными красками, растворенными в ксилоле или ацетоне. Существуют сложные авторизованные прописи, используемые для частичного сохранения естественной окраски, консистенции и объёма органов (формалин не только обесцвечивает ткани, но и уплотняет их, уменьшая объём органа). Прописи и методы их применения предложены L. Jores (1896), Н.Ф. Мельниковым- Разведенковым (1896), С. Kaiserling (1896), L. Pick (1900), А.А. Мелких (1924), М.М. Тизенгаузе- ном (1933) и другими. Пропись Н.К. Лысенкова (1898): Глицерин 1000,0 мл Вода 300,0 мл уксуснокислый калий 500,0 г формалин 40,0 мл Пропись L. Jores (1896): а) жидкость № 1 формалин 100,0 мл сернокислый натрий 20,0 г сернокислый магний 20,0 г хлористый натрий 10,0 г вода 500,0 мл б) жидкость № 2 спирт 96 % в) жидкость № 3 (сохраняющая жидкость) глицерин химически чистый 500,0 мл вода 500,0 мл Способ фиксации по С. Kaiserbng(1896). Орган, не промывая водой, погружают на 15 суток в жидкость № 1: формалин 200,0 мл азотнокислый калий (селитра) 15,0 г уксуснокислый калий 30,0 г вода (кипяченая) 1000,0 мл После извлечения из этого раствора препарат высушивают хлопчатобумажной тканью и для восстановления естественной окраски тканей, которая изменилась от пребывания в жидкости № 1 помещают на 1-2 суток в жидкость № 2 (спирт 80%-95 %). На постоянную экспозицию препарат помещают в жидкость № 3: глицерин 200,0-350,0 мл уксуснокислый калий 200,0-800,0 г вода (кипяченая) 1000,0 мл Эти жидкости обеспечивают частичное сохранение цвета и консистенции органа. 119 Фиксация органов по Н.Ф. Мельникову-Разееденкову (1896) включает в себя три фазы. В первой фазе орган помещают в раствор, имеющий следующую пропись: формалин 100,0 мл уксуснокислый натрий 30,0 г хлористый калий 5,0 г вода 1000,0 мл В данном растворе препарат содержится до 3 суток, приобретая грязно-ржавый цвет. При этом объём раствора должен быть в 5-8 раз больше фиксированного органа. Во второй фазе орган помещают в спирт 80 % 95 % до восстановления естественной окраски тканей. Если препарат погружают сразу в 96 % спирт, то его рекомендуют хранить в нем 8 10 ча- сов. После восстановления натуральных цветов органа, последний помещают в раствор следую- щей прописи (третья фаза): глицерин чистый 600,0 мл уксуснокислый калий 300,0 г вода (дистиллированная) 1000,0 мл. Способ фиксации по М.М. Тнзенгаузену (1933) представляет собой модификацию способа Н.Ф. Мельникова-Разведенкова. а) Жидкость № 1 Н.Ф. Мельникова-Разведенкова, жидкость № 1 С. Kaiserling. б) Промывка в течение 12-24 часов в проточной воде. в) Фиксация в 96% спирте в течение 2-3 часов. г) Жидкость М.М. Тизенгаузена: азотнокислый калий (селитра) 10,0 г хлористый натрий 200,0 г вода 1000,0 г Способ фиксации L. Pick (1900) состоит из трех этапов. В начале орган в течение 36 суток фиксируют в жидкости № 1: формалин 50,0 мл карлсбатская соль (искусственная) 50,0 г вода 1000,0 мл Затем осуществляют восстановление цвета в жидкости № 2 (спирт 80%-95%). На третьем этапе орган помещают в жидкость № 3: Глицерин 540,0 мл уксуснокислый калий 270,0 г вода 900,0 мл. Пропись Г.М. Иосифова (1916): денатурированный спирт 12000,0 мл вода 3000,0 мл кристаллическая карболовая кислота 600,0 мл формалин 1400,0 мл. По способу фиксации А.А Мелких (1924) препарат помещают в жидкость следующего соста- ва: хлористый натрий 10,0 г сернокислый натрий 10,0 г азотнокислый калий (селитра) 15,0 г-20,0 г 120 После экспозиции от 2 до 8 дней в этой жидкости орган в течение 1-5 часов промывают во- дой. Затем препарат восстанавливают в 80% 95% спирте и погружают в жидкость № 3 Кайзер- линга или в жидкость автора, имеющую в своем содержании 10% раствор поваренной соли, к ко- торому добавляют по объему 30% глицерина и 1520 % спирта (95%). Пропись А.И. Абрикосова (1948): глицерин 600,0 мл спирт 200,0 мл формалин 200,0 мл уксуснокислый калий 30,0 г На кафедре анатомии человека совместно с кафедрой общей и биоорганической химии ВМА предложен и используется раствор для фиксации биологических объектов, основными компо- нентами которого являются диметилфосфит и натриевые соли фосфористой кислоты (А.С. № 1681805 от 08.06.91.). Раствор наиболее полно сохраняет консистенцию, объем и цвет органов. Используют раствор, содержащий смесь моно- и динатриевых солей метиловых эфиров фосфори- стой кислоты, получаемых в процессе обработки диметилфосфита, содержащего 15% 20 % мо- ноэтилового эфира фосфористой кислоты, раствором едкого натра до рН 6,0. Полученный таким образом раствор моно- и динатриевых солей метиловых эфиров фосфористой кислоты имеет кон- центрацию близкую к 52 % и в смеси с натриевой солью фосфористой кислоты используется для приготовления фиксаторов мас.%. смесь моно- и динатриевых солей метиловых эфиров фосфористой кислоты 8,0 10,0 натриевая соль фосфористой кислоты 1,5 3,0 вода 87,0-90,5 Для изготовления препаратов зубов последние удаляют из альвеол челюстей. Особую слож- ность для извлечения представляют многокорневые зубы и зубы с искривленными корнями. Уда- ление их осуществляют бормашиной с применением твердосплавных боров и алмазных сепараци- онных дисков, которыми распиливают стенки альвеол. Препараты шлифов зубов удобно получать, используя двух- и односторонние алмазные сепарационные диски. Для изучения синтопии внутренних органов можно использовать изготовление распилов за- мороженных трупов по методу Н.И. Пирогова (1851-1859). Кровеносные сосуды внутренних орга- нов инъецируют цветными застывающими индикаторами. Для этого рекомендуют использовать 20 % водный раствор столярного клея, смешанного с различными водными красками (Т.В. Богуслав- ская, 1959). После этого труп помещают в морозильную камеру с температурой минус 20 градусов по Цельсию. При этом туловище рекомендуют поместить на деревянную доску с ватной подстил- кой. Распилы туловища для иллюстрации внутренних органов лучше производить электропилой с интервалами в 2-3 см. Поверхность распила очищают от опилок. Срез укладывают на стекло и ус- танавливают в прозрачную ёмкость с фиксирующей жидкостью для экспозиции. С целью изготовления препаратов, иллюстрирующих синтопию внутренних органов на ка- федре анатомии человека ВМА предложена модификация метода распила замороженных трупов «вылущивание» замороженных органов. Удаленные путем вылущивания из замороженной брюш- ной полости орган, оставляет «ложе» с отпечатками его к окружающим органам. Показательны препараты кровеносных сосудов внутренних органов. Для иллюстрации кро- веносных сосудов кишки человека и животных рекомендуют наливку их застывающими массами (киноварь, берлинская лазурь в эфире и другие) с последующим приготовлением просветленных препаратов. Среди различных вариантов метода просветления можно отметить способ, включаю- щий следующие этапы: фиксация формалином; отбеливание в перекиси водорода; промывание в воде (вначале в проточной, затем выдерживание в дистиллированной воде в течение двух суток); обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации (75%, 85%, 96%, абсолютный спирт); про- светление в растворах глицерина в воде возрастающей концентрации (1:2, 1:1,2:1). Для изучения функциональной анатомии тонкой кишки можно продемонстрировать резорб- цию жиров из тонкой кишки в её лимфоносное русло и регионарные лимфатические узлы. Нами 121 предложена методика позволяющая приготовить соответствующие анатомические препараты экс- периментальных животных. Смесь Судана IV (2,0 г) с подсолнечным маслом (100,0 г) кипятится на водяной бане до образования темно-красной прозрачной жидкости. При температуре 37-40 гра- дусов эта жидкость объёмом 5-25 мл (в зависимости от массы животного) вводится через полиэти- леновый зонд в свободный от содержимого желудочно-кишечный тракт животного (кошка, крыса, кролик). Через 4 часа на вскрытии видны ярко-красные тяжи лимфатических сосудов тонкой киш- ки и такого же цвета брыжеечные лимфатические узлы. Препарат, иллюстрирующий функцио- нальную анатомию тонкой кишки, помешается в раствор, содержащий диметилфосфит. Ветвление бронхиального дерева, сосуды внутренних органов можно показать на коррозион- ных препаратах. В качестве инъекционной массы применяют самые разнообразные материалы, включая целлоидин, клей БФ-2, канифоль, воск. Наиболее употребительно методика приготовле- ния коррозионных препаратов с использованием латекса. Для этого латекс набирают в шприц, предварительно смоченный мыльной пеной, чтобы предупредить коагуляцию его в шприце. Со- держимое шприца вводят в исследуемые полости. Если речь идет о кровеносном русле органа, по- следнее заранее промывают водой с добавлением 0,2% 0,3% раствор аммиака. Инъецированный орган на несколько дней (от 2 до 5 дней в зависимости от размеров препаратов) погружают в кон- центрированный раствор соляной кислоты. Готовый слепок исследуемых анатомических образо- ваний промывают водой, которую используют и для сохранения препарата. Для уяснения закономерностей анатомии внутренних органов целесообразно изготовление моделей нативных препаратов из пластилина, пластики, папье-маше, мыла и других материалов. При моделировании зубов применяют воск, мел, гипс, дерево. Моделирование зубов прово- дят по оригинальным образцам. Для репродукции в качестве прототипов используют натуральные анатомические препараты или макеты зубов (фантомы). Масштаб выбирают произвольным. Удоб- ным и апробированным практикой является двух- или трехкратное увеличение. Техника модели- рования зубов изложена нами в специальном руководстве (С.В. Дмитриенко с соавт., 1998). Модели печени, легких, почек и других паренхиматозных органов лучше изготавливать из папье-маше, которое затем окрашивают гуашью или акварельными красками в цвета, соответст- вующие натуральным препаратам. На поверхности этих органов можно показать границы между сегментами печени, лёгких, почек. Сердечнососудистая система и органы иммунной системы Препараты кровеносного русла внутренних органов можно приготовить методом коррозии. При этом латекс рекомендуют подкрашивать в необходимый цвет киноварью, берлинской лазу- рью, ультрамарином. Для сохранения нативного объёма органа его сосудистое русло заполняют различными инъекционными массами желатин, целлоидин. Раствор целлоидина (6%) готовят, используя отмытую рентгеновскую пленку. Плёнку режут на мелкие фрагменты общей массой 6,0 г, помещают в химически чистую посуду, которую запол- няют 47,0 г абсолютного спирта и экспонируют в течение суток. Затем содержимое ёмкости до- полняют 47,0 граммами эфира и выдерживают ещё 2-3 суток до полного растворения целлоидина. Перед инъекцией смесь можно подкрасить красной киноварью или ультрамарином. Препараты, иллюстрирующие анатомию лимфатической системы готовят, применяя интер- стициальную (внутритканевую) инъекцию контрастными массами корней лимфоносных путей. Предпочтителен свежий материал. Перед инъекцией орган рекомендуют на несколько часов по- местить в теплую воду. Инъекцию осуществляют шприцем с тонкими иглами. Контрастные массы вводят очень медленно, осторожно массируя инъецируемый участок. Одновременное введение красителей различного цвета используют для полихромных инъекций. Наиболее простой инъекционной массой является профильтрованная, разведенная в 2-3 раза водная взвесь туши. Более сложными являются авторизованные прописи Герота, Ф.А. Стефаниса, Д.А. Жданова. Синюю массу Герота готовят растиранием 2,0 г продажной прусской синей масляной крас- ки в 30,0 г скипидара. Полученную массу смешивают с 15,0 г эфира и пропускают через фильтр. Красную массу Герота готовят путем растирания 5,0 г порошка киновари с 15 каплями льняного масла. В полученную массу добавляют 3,0 г скипидара и 5,0 г хлороформа и очищают её путем фильтрования. Чёрную массу Герота получают из 5,0 г масляной краски, 5,0 г льняного масла, 10,0 г ски- 122 пидара и 10,0 15,0 г эфира. Указанные ингредиенты тщательно растирают в ступке и фильтруют. Красную массу Стефаниса получают с использованием 4,0 г масляной краски мумии (окись железа), 2,0 г скипидара и 10,0-15,0 г хлороформа. Краску растирают в скипидаре и разводят в хлороформе. Желтую массу Стефаниса готовят из 2,0 г желтой масляной краски (кадмий желтый), 1,0 г скипидара и 10,0 г хлороформа. Смесь первых двух компонентов растирают в ступке и разводят хлороформом. Зеленую массу Стефаниса готовят, растирая 4,0 г зеленой киноварной краски в 2,0 г скипи- дара. Смесь разбавляют 10,0 г хлороформа и фильтруют. Красные суриковые массы Жданова готовят из сурика, вазелинового или льняного масла и скипидара в следующих пропорциях: сурик 6,0 мл вазелиновое или льняное масло 6,0-8,0 мл скипидар 20,0-25,0 мл Белую массу Жданова готовят из 2,0 г масляной краски «свинцовые белила», 10,0 г льняного масла и 25 г скипидара. Зеленую массу Жданова получают смешением синей массы Герота и желтой массы Стефа- ниса. Для полихромной инъекции, например, различных участков стенки кишки используют одно- временно красную, чёрную массы Герота, желтую массу Стефаниса и другие. Красящие вещества по лимфатическим сосудам достигают лимфатических узлов и контрастируют их. Такие препара- ты можно экспонировать в растворе, содержащем диметилфосфит и натриевые соли фосфористой кислоты. Для самостоятельного изготовления в учебных целях препаратов различных групп лимфати- ческих узлов человека и животных можно использовать ряд методик, которые разрабатывались на кафедре анатомии человека ВМА для решения научных задач иммуноморфологии. Демонстратив- ные препараты полихромно инъецированных подколенных лимфатических узлов эксперименталь- ных животных. Живому наркотизированному животному в межпальцевые промежутки и поду- шечки стопы шприцем вводят 1,8-2,0 см 3 зеленой тушь-желатины; одновременно мышцы голени инъецируют 0,5-1,0 см 3 5 % черной тушь-желатины. Отпрепарированные лимфатические узлы вместе с фрагментом тазовой конечности животного помещают в раствор с диметилфосфитом для демонстрации лимфатических сосудов, по которым течет лимфа от поверхностных (кожа) и глу- боких (мышцы) тканей к соответствующим сегментам подколенного лимфатического узла. Нами предложена методика изготовления препаратов лимфатических узлов, иллюстрирую- щих сегменты лимфатического узла, соответствующие качественно разнородным участкам бас- сейна лимфосбора, с использованием латекса. Латекс окрашивают разными цветами и готовят коррозионные препараты лимфатических узлов по описанной ранее методике. На кафедре анатомии человека ВМА предложена методика перорального введения жирорас- творимых индикаторов (судана) экспериментальных животных, позволяющая изготовить препара- ты, где хорошо видны сегменты брыжеечного лимфатического узла-конгломерата, соответствую- щие тонкой кишке (окрашенный сегмент) и толстой кишке (сегмент, лишенный витального краси- теля). Показательны препараты целостных трупов экспериментальных животных с тотальным ок- рашиванием органов иммунной системы (лимфатические узлы, элементы лимфоэпителиального кольца Пирогова, тимус, червеобразный отросток, Пейеровы бляшки) нейтральным красным. Для этого нами предложена методика введения в кровеносное русло 0,5 % нейтрального красного на физиологическом растворе. Через 15-20 минут после инъекции индикатора можно препарировать органы иммунной системы. На кафедре анатомии человека совместно с кафедрой хирургических болезней педиатриче- ского и стоматологического факультетов ВМЛ предложена методика изготовления анатомических препаратов, позволяющих иллюстрировать связь лимфоносных путей брюшной и грудной полос- тей (А.С. № 1718818). На невскрытом трупе контрастное вещество (индигокармин и др.) вводят в серповидную связку печени через вкол иглы в круглую связку печени. После этого в течение 15-20 минут массируют эпигастральную область. Изготовление препарата инъецированных лимфатиче- ских сосудов и узлов осуществляют на комплексе извлеченных органов брюшной и грудной по- 123 лостей. Нами предложена методика изготовления анатомических препаратов, иллюстрирующих хи- люсные лимфатические сосуды и концевые ветвления (арборизации) лимфатических сосудов в ткани лимфатических узлов. У живых наркотизированных животных субсерозно инъецируют стенку тонкой кишки. В качестве индикатора для визуализации хилюсных лимфатических сосудов применяют гистологические красители эозин или гематоксилин. Фрагмент кишки помещают в фиксирующую жидкость (например в раствор, содержащий диметилфосфит). Концевые арбориза- ции лимфатических сосудов выявляют также интерстициальной инъекцией красителей. Получают наглядные демонстрационные препараты ветвления концевых отделов приносящих лимфатиче- ских сосудов в капсуле лимфатического узла. На кафедре анатомии человека ВМА разработана методика прижизненного выявления и ис- следования дренажной системы лимфатического узла, которая положена в основу изготовления соответствующих анатомических препаратов, позволяющих на целостном лимфатическом узле рассматривать корковые промежуточные синусы. Живому наркотизированному животному в об- ласть лимфосбора лимфатического узла вводят контрастное вещество. Это может быть метилено- вый синий, нейтральный красный, цветная тушь, чёрная китайская тушь, трипановый синий, ме- тиленовый зелёный и другие красители. Лучшие результаты получены нами от применения синей туши и синих китайских чернил. Уже невооруженным глазом в отраженном свете отчетливо видна ячеистость рисунка капсулы лимфатического узла. Это связано с особенностями анатомии дре- нажной системы этого органа. Краевой синус, куда лимфа поступает из афферентных лимфатиче- ских сосудов, представляет собой щелевидное пространство под капсулой. Промежуточные кор- ковые синусы, в которые далее следует лимфа, располагаются под углом, близким к прямому, по отношению к корковому синусу. Тем самым они создают величину столба красящего вещества во много раз превышающего прослойку индикатора в краевом синусе, что и определяет условия ви- зуализации корковых промежуточных синусов. Типы дренажной системы можно рассматривать в витальных условиях под лупой или при помощи стереомикроскопа. Лимфатический узел с окра- шенными синусами в виде демонстрационного препарата можно экспонировать в растворе с диме- тилфосфитом. Нами предложена методика изготовления «макро-микроскопических» препаратов лимфати- ческих узлов средостения. Предварительно препарируют паратрахеальные, верхние и нижние тра- хеобронхиальные и бронхопульмональные лимфатические узлы. Затем трахею с бронхами первого и второго порядков и с прилежащими лимфатическими узлами помещают в фиксирующий раствор и далее в заливочную среду для последующего изготовления тотальных гистологических срезов этого комплекса органов. Срезы окрашивают гематоксилин-эозином и заключают в бальзам на стекле соответствующего размера. На таких препаратах, наряду с общим видом фрагмента брон- хиального дерева с лимфатическими узлами, невооруженным глазом видна внутренняя структура лимфатических узлов. |