Рататуй. Навчальний посібник для студентів, що навчаються у вищих навчальних закладах іii1V рівнів акредитації за напрямом Ветеринарна медицина
 Скачать 5.29 Mb.
|
|
Антигенна структура хламідій досить складна. Порівняно добре вивчено груповий термостабільний антиген, характерний, для усіх представників роду Chlamydia. Він витримує автоклавування при 135° С, стійкий проти трипсину, папаїну та нуклеаз. Термолабільний антиген характерний лише для конкретного виду, тобто е видоспецифічним. Патогенність. Хламідіоз (гальпровіоз, бедсоніоз) – хронічна інфекція, яка у природних умовах хламідії уражують практично всі види сільськогосподарських, багато видів диких тварин і птицю. 450 Частіше хламідіоз уражує овець, кіз, свиней, велику рогату худобу, коней. Серед хламідій різного походження чітко спостерігається здатність до міграції і паразитування в організмі багатьох видів тварин. Переважна більшість хламідій, особливо збудник орнітозу, небезпечні для людини. Клінічний прояв хламідіозу знаходиться у прямій залежності від епізоотичної ситуації. У стаціонарно небезпечних господарствах ча- стіше спостерігається хронічний і навіть латентний перебіги хвороби. Хламідіоз може перебігати в декількох клінічних формах: генітальній, респіраторній, нервовій та змішаній. Захворювання досить небезпечне для людини. У новонароджених тварин розвиваються ентерит, пневмонія, кон'юнктивіт, артрит і нерідко енцефаломієліт. В багатьох видів птиці захворювання більше відоме під назвою орнітоз. Патогенез хламідіозу вивчений мало. Місцем локалізації хламідій в усіх видів тварин є кишечник, звідки вони постійно надходять у зовнішнє середовище. Здорові тварини заражаються переважно аліментарним шляхом, а також через дихальний тракт, статеву сферу. Потрапляючи на слизові оболонки дихальних шляхів, шлунково- кишкового тракту, кон'юнктиву хламідії проникають в епітеліальні клітини, макрофаги, де відбувається їх первинне розмноження. Запальний процес, що розвивається при цьому, клінічно проявляється у вигляді кон'юнктивіту, бронхопневмонії, ентериту. Внаслідок хламідемії збудник елімінується по всьому організму. У період вагітності хламідії розмножуються в плацентарній тканині, проникають у плід, зумовлюють дистрофічні й некротичні зміни в паренхіматозних органах, що призводить до аборту. У самців хламідії розмножуються в слизовій оболонці сечовивідного каналу, в тканині сім'яників. Виникає хронічний уретрит, вогнищевий орхіт, 451 баланопостит, простатит. Діагностика. При діагностиці хламідійних інфекцій спираються на комплекс клінічних та епізоотичних показань, однак основною підставою для постановки діагнозу слугують результати лабораторних досліджень. У лабораторній діагностиці хламідіозу тварин застосовують бактеріологічний та серологічний методи, які використовують у відповідності до „Настанови з лабораторної діанетики хламідіозів сільськогосподарських тварин”, затвердженої Державним департаментом ветеринарної медицини Міністерства АПК України в 2008 році. Для лабораторних досліджень на хламідіоз направляють асептично відібрані шматочки плаценти, легенів, печінки, селезінки, лімфовузлів, вагінально-маточний секрет, сичуг абортованого плоду або цілий плід, сім’яники, ексудат з грудної або черевної порожнин, зіскоби з кон’юнктиви очей, слизової матки, еякулят в об’ємі не меншому 1 см 3 , глибоко заморожену сперму не менш 4 гранул, проби інших органів і таканин. Патологічний матеріал відбирають не пізніше ніж через 2 години після загибелі, забою або аборту в стерильні закриті гумовими пробками флакони. Флакони з патологічним матеріалом або еякулят транспортують в термосі з льодом, глибоко заморожену сперму в контейнері з рідким азотом в день відбору матеріалу, але не пізніше ніж за 24 години після відбору матеріалу, при умові зберігання на холоді з дотриманням застережень, що виключають розповсюдження збудника інфекції. Залежно від епізоотологічної обстановки захворювання може перебігати в гострій, хронічній і латентній формах. В усіх випадках ураховують те, що інфекція уражує тварин різних вікових груп. При клінічному огляді звертають увагу на наявність у новонароджених тварин бронхопневмоній, ентеритів, кон'юнктивітів, ураження у 10— 452 15 % тварин суглобів і центральної нервової системи. Кількість абортів і мертвонароджень значно коливається. Якщо серед корів протягом року абортують 7—10 %, то серед разових свиноматок цей показник досягає 100 %. Звертають увагу на погіршення якості сперми у плідників, ураження у них статевої сфери, скорочення періоду їх використання. У лабораторіях ветеринарної медицини діагноз установлюють із застосуванням таких методів: - ізоляція хламідій на курячих ембріонах, лабораторних тваринах, культурах клітин з наступною ідентифікацією в реакції імунофлюоресценції (РІФ), імуноферментним методом (ІФА), полімеразно-ланцюговою реакцією (ПЛР); - виявлення антигену хламідій в патологічному матеріалі та в спермі за допомогою РІФ, ІФА, ПЛР; - виявлення хламідій методами світлової мікроскопії з подальшою ідентифікацією в РІФ; - виявлення ДНК хламідій в патматеріалі, спермі, зіскобах з кон'юнктиви та слизвох оболонок генітальних органів за допомогою ПЛР; - виявлення зростання титрів антитіл до хламідій у сироватках крові методами РЗК, РНГА, ІФА при дослідженні парних сироваток крові з інтервалом 2-4 тижні. Діагноз на хламідіоз вважають установленим при одержанні позитивних результатів в одному з нижченаведених випадків: - хламідії виділені з патматеріалу або сперми на курячих ембріонах, лабораторних тваринах, у культурах клітин і ідентифіковані в РІФ, ІФА, ПЛР; - виявлений антиген хламідій методами ІФА, РІФ; 453 - - хламідії виявлені за допомогою ПЛР. Із патологічного матеріалу готують мазки, які фарбують методами Стемпа, Маккіавелло, Романовського —Гімза, толуїдиновим синім для звичайної мікроскопії і акридиновим оранжевим — для люмінесцентної. У мазках із плаценти, як правило, виявляють значну кількість хламідій на різних стадіях розвитку: дрібні елементарні тільця розміщуються невеликими скупченнями в цитоплазмі клітин або за їх межами; ініціальні тільця — парами, по чотири, короткими ланцюжками типу диплострептокока, скупченнями по 8,16, інколи й більше часток. Після обробки акридиновим оранжевим зрілі елементарні тільця у люмінесцентному мікроскопі флуоресціюють зеленим кольором, проміжні форми відрізняються чергуванням оранжевих і жовтих тонів. Концентрація тілець хламідій значно нижча в інших матеріалах порівняно з плацентою. Методами Стемпа і Маккіавелло тільця хла- мідій фарбуються у червоний колір на синьому фоні, за Романовським—Гімза — в синьо-фіолетовий. Важливе діагностичне значення має реакція імунофлуоресценції (РІФ), яку можна проводити в прямому і непрямому варіантах. У пер- шому випадку використовують імунні хламідійні глобуліни, мічені ФІТЦ, які зв'язуються з тільцями, хламідій як з антигеном, що й сприяє їх інтенсивному світінню в люмінесцентному мікроскопі (рис. ). Такі глобуліни можуть виявляти хламідії незалежно від їх походження. Виділяти хламідії можна лише в спеціальних режимних лаборато- ріях. З цією метою спеціально обробленою суспензією патологічного матеріалу, звільненого від бактерій і грибів, заражають у жовтковий 454 міхур 6—7-денні курячі ембріони. Специфічна загибель останніх розпочинається на 3—4-й день і триває до 10—12-го дня після зара- ження. У мазках із стінки жовткового міхура загиблих ембріонів виявляють тільця хламідій, які частіше розміщуються у вигляді на- миста по периферії епітеліальних клітин. Більшість штамів хламідій виявилися патогенними для молодняку білих мишей при різних способах їх зараження. ЦПД в культурах клітин з'являються не раніше 4-го дня після зараження й характеризуються округленням клітин, які стають більш темними і відшаровуються від скла. В цитоплазмі клітин виявляють скупчення хламідій у вигляді колоній. Виділені за допомогою курячих ембріонів, лабораторних тварин або культур клітин штами ідентифікують як хламідії на підставі мор- фологічних, тинкторіальних ознак та за антигенною структурою. При ідентифікації хламідій достовірні результати також одержують від застосування імуноферментного аналізу (ІФА). Допоміжне значення при діагностиці хламідіозу мають реакції дифузійної преципітації (РДП), гемаглютинації і її затримки (РГА та РЗГА), пасивної гемаглютинації (РПГА). Для серологічнії діагностики хламідіозу найбільш вживаною є реакція зв'язування комплементу (РЗК) та її модифікації — інгібіторна РЗК і реакція тривалого зв'язування комплементу. Алергічна діагностика хламідіозу майже не розроблена і застосо- вують її тільки для виявлення орнітозу у людей. Імунітет при хламідіозі переважно клітинний. Спеціалісти ветеринарної медицини України для профілактики хламідіозу застосовують полівалентну інактивовану вакцину «Плах» (проти парвовірусної інфекції, лептоспірозу, хвороби Ауєскі і 455 хламідіозу свиней). За кордоном застосовують комплексну вакцину для профілактики хламідіозу овець, великої рогатої худоби і свиней. Це жива ембріон- вакцина, виготовлена із штаму хламідій пневмонії котів, безпечного для сільськогосподарських тварин. Від застосування імунних лікувальних сироваток на початковій стадії розвитку інфекції одержують позитивний ефект (особливо в телят) у поєднанні з іншими препаратами. Терапія при хламідійній інфекції має бути з одного боку симптоматичною з метою полегшення перебігу хвороби для організму тварини, а з іншого – комплексною, направленою на придушення або ж хоча б пригнічення патогенних властивостей та вірулентного потенціалу збудника. Враховуючи органну локалізацію та змішану етіологію патогенних та проміжних форм інфекційного начала, підходи у боротьбі з хворобою мають бути такими ж як і при лікуванні змішаних вірусно-бактеріальних інфекцій з використанням противірусних, антибактеріальних та хіміотерапевтичних препаратів, здатних ефективно впливати на збудника. Для лікування хворих на хламідіоз тварин використовують також антибіотики широкого спектра дії, особливо із групи тетрацикліну (біоміцин, окситетрациклін гідрохлорид, дибіоміцин, дитетрациклін, ангеміцину та ін.), макроліди групи тілану – тілозин, фармазин, а також препарати хінолонового і фторхінолонового рядів – офлоксацин, ципрофлоксацин, норфлоксацин, енрофлоксацин. Тут не слід забувати, що циркуляція хламідійної інфекції серед поголів’я, її багаторазовий пасаж через організми тварин із зниженою резистентністю, особливо молодняку, у кілька разів коли не на порядки підвищують вірулентність штамів мікроорганізму. Ось чому 456 без попередньої лабораторної апробації терапевтичних засобів на чутливість до них хламідій, їх використання може бути малоефективним. ПАТОГЕННІ СПІРОХЕТИ Збудник лептоспірозу (Spirocheta interrogаns) Лептоспіроз — зооантропонозне природно-вогнищеве захворювання теплокровних тварин і людини, яке перебігає в гострій, підгострій, хронічній і персистентній формах. Хвороба характеризується хвилеподібною гарячкою, жовтяницею, гемоглобінурією, некрозом слизових оболонок і шкіри, а також абортами. Інфекція реєструється на всій території України, та в багатьох країнах всіх континентів. Повідомлення про захворювання людей, що були подібні з лептоспірозом, належить ще до середини XVIII століття. Природа цієї хвороби залишалася невідомою і її називали або за місцевістю, де вона виникала, або у зв'язку з виконанням певних робіт (болотна, водяна, лучна гарячка, хвороба свинопасів і т. ін.). І тільки в 1914 p. японські дослідники Інадо, Ідо та інші виділили із крові людини, яка хворіла на інфекційну жовтяницю, спірохету і в умовах експерименту відтворили захворювання на морських свинках. Вони назвали виділеного збудника Spirocheta icterohaemorrhagiae. Подібного збудника німецькі мікробіологи Уленгут і Фромме назвали Spirocheta 457 interrogаns і Spirocheta nodosa. Ще в 1917 p. Ногуші об'єднав відомі спірохети у самостійний рід Leptospira (гр. лептос —дрібний і спіра — завиток), а захворювання, яке вони викликали, назвали лептоспірозом. У «Визначнику бактерій» Берджі (1997) відносяться до Групи 2 «Аеробні (мікроаерофільні, рухомі, спіральні) вигнуті грамнегативні бактерії». Значний вклад у вивчення лептоспірозу внесли М. В. Земсков, В. І. Терських, С. Я. Любашенко та ін. Морфологічно всі лептоспіри однакові й різняться за антигенною структурою. В природі циркулює понад 220 сероваріантів об’єднаних в 23 серогрупи. Велика кількість їх є сапрофітами. Збудником лептоспірозу є спірохета L. interrogans, куди відносять паразитичні лептоспіри, які живуть і розмножуються в організмі тварин. Крім того, існує група L. biflexa, яка об'єднує, вільноживучі, непатогенні лептоспіри, що зустрічаються у зовнішньому середовищі, переважно в вологих ґрунтах і мілких водоймах. Нині патогенні лептоспіри включають більше 120 серологічних типів, об'єднаних у 18 серологічних груп. У ветеринарній патології найбільше значення мають представники таких серогруп: Неbdomadis (16 сероваріантів), Icterohaemorrhagiae (13 сероваріантів), Canicola (10 сероваріантів), Tarassovi (7 сероваріантів), Роmоnа (4 сероваріанти). Морфологія. Збудники лептоспірозу аероби, надзвичайно рухливі мікроорганізми, що належать до звивистих, спіралеподібних мікробів, які мають центральну осьову нитку, навколо якої гвинтоподібно намотана цитоплазма. У лептоспір відсутні спори й капсули, фарбуються за Грамом негативно. Звичайні анілінові фарби лептоспіри сприймають погано, у зв'язку з чим застосовують спеціальні методи фарбування: обробку сріблом за Левадиті, тривале фарбування за Романовським — Гімза. Середня їх довжина 7—14 458 мкм (рис. 24), проте зустрічаються клітини довжиною 30 мкм і більше або короткі (3—4 мкм) особини. Ширина клітини 0,06—0,15 мкм. Кінці у лептоспір загнуті у вигляді гачків і мають характерні потовщення. За рахунок скорочення осьової нитки лептоспіри інтенсивно рухаються. Рис.24 . Лептоспіри. Скануюча ЕМ. х 17000. Інтернет, 2008. Культуральні властивості. Лептоспіри слабо розмножуються у живильних середовищах, так в 1 мл рідини їх нагромаджується у десятки разів менше, ніж інших мікроорганізмів. Для культивування лептоспір в лабораторних умовах використовують елективні живильні середовища, куди додають до 10% інактивованої сироватки барана чи кроля. Часто використовують також середовище Ферворта — Вольфа у модифікації С. Тарасова, до складу якого входять ще й хлористий натрій і пептон Діфко. Культивують збудник в аеробних умовах при температурі 28—30° С протягом 3 міс. Кращі результати одержують при культивуванні цих мікробів в мікроаерофільних умовах при зниженій концентрації кисню. Характерним є те, що середовище 459 візуально не змінюється навіть у випадку розмноження лептоспір, тому періодично краплю середовища перевіряють на наявність лептоспір шляхом темнопольної мікроскопії. У більшості випадків ці мікроби виростають на - 7—20-й, деколи на З—5-й день або навіть через 3 місяці. Біохімічні властивості лептоспір вивчені мало. Вони ферментують ряд вуглеводів частіше до кислоти, інколи — до кислоти й газу. Резистентність лептоспір до впливу фізико-хімічних факторів невисока. Нагрівання збудника до 60 °С інактивує його вже через 10 с. Швидко він гине при висушуванні. У воді мілких водойм лептоспіри виживають до 10 діб. У дуже вологому ґрунті — до 270 діб. У сечі хворих залишаються живими від кількох годин до кількох діб. Збудники надзвичайно чутливі до кислот і лугів. Незначні концентрації їх знищують лептоспір майже миттєво. Антигенна структура. Між сероварами лептоспір не існує морфологічних і культуральних відмінностей і різняться вони між собою лише за антигенною будовою. Встановлено два антигени: родоспецифічний гемолітичний антиген і типоспецифічний аглютинін. Патогенність. Сприятливі до патогенних лептоспір усі сільськогосподарські й домашні та величезна кількість диких тварин. Хворіє також і птиця, частіше молодняк. Високу чутливість до лептоспірозу проявляють велика рогата худоба, вівці, свині, промислові тварини, менш чутливими є коні, олені, коти, собаки, кури, гризуни. Захворювання дуже небезпечне для людини. Основним джерелом інфекції є хворі та перехворілі тварини і лептоспіроносії, які виділяють збудника у навколишнє середовище з сечею, утворюючи 460 природні, антропургічні та змішані осередки інфекції. Основні природні носії патогенних лептоспір – гризуни, у яких захворювання перебігає в персистентній формі. Збудник лептоспірозу від людини до людини, як правило, не передається. Збудник лептоспірозу має фактори патогенності: розчинний гемолізин, а також ліпазу й лецитиназу. На організм тварин також впливають ендотоксини, які звільняються після розпаду клітин збудника. В організм лептоспіри проникають головним чином через ушкоджені шкіру й слизові оболонки. Після нетривалого періоду розмноження у тканинах збудник потрапляє в кров і паренхіматозні органи. В них, а особливо в печінці та нирках, інтенсивно розмножується й внаслідок руйнування виділяє токсини. Токсини лізують еритроцити, підвищують порозність судин і як наслідок – з’являються крововиливи, розвивається прогресуюча гематурія та жовтяниця. На організм негативно впливають не лише ендотоксини, а й аутоантитіла, які утворюються у зв'язку з розпадом уражених тканин організму. В печінці спостерігається зерниста, рідше жирова дистрофія. Під впливом токсичних продуктів в клітинах центральної нервової системи виникає хроматоліз, пригнічується функція гемопоезу, що в поєднанні з гемолізом призводить до анемії. Ураження печінки й інтенсивний розпад еритроцитів є основною причиною жовтяниці. Білірубін, що при цьому утворюється, затри- мується тканинами і забарвлює їх у жовтий колір. Крім того супроводжується лептоспіроз глибоким порушенням азотистого, вуглеводного та мінерального обмінів. Діагностику лептоспірозу здійснюють на основі клінічних ознак, патолого-анатомічних досліджень, даних бактеріологічного, 461 молекулярно-генетичного (ПЛР), серологічного і гістологічного методів досліджень з урахуванням епізоотологічних показників. Серед методів бактеріологічної діагностики головним є виявлення лептоспір у досліджуваному матеріалі за допомогою мікроскопії в темному полі (рис.25) або виділення культури збудника і постановки біопроби. Рис. 25. Лептоспіри в темному полі мікроскопу. Для прижиттєвої діагностики від хворих тварин відбирають кров і сечу в період гарячки не пізніше сьомого дня від початку хвороби. Для серологічних досліджень кров беруть не раніше ніж за 7 днів після появи перших клінічних ознак хвороби. Після загибелі або забою тварин відбирають серце, нирку. Виявляють лептоспіри у досліджуваному матеріалі методом темнопольної мікроскопії. У препаратах типу «роздавлена крапля» або «висяча крапля» збудник має форму спіралеподібних тонких сріблястих ниток, кінці яких зігнуті у вигляді гачка й потовщені. При цьому відмічають інтенсивний рух лептоспір. |